CD44v6和uPA 在胃癌组织中的表达及相关性研究

【摘要】  目的：观察CD44v6和uPA 在胃癌组织中的表达情况，分析它们在各种组织类型及不同分化程度胃癌中的表达,探讨它们的异常表达与胃癌侵袭转移的关系。方法：采用免疫组织化学SP 法分别检测CD44v6和uPA 在67 例胃癌组织中的表达。结果： （1）67 例胃癌组织中CD44v6阳性表达34 例(50.75%, uPA 阳性表达35例(52.24%)；（2）CD44v6、uPA 在低分化胃癌中的表达率均比高分化中的高；（3）有淋巴结转移者的CD44v6、uPA阳性率比无转移者显著增高；（4）早期胃癌组、侵及肌层组和侵犯全层组CD44v6阳性表达率分别为7.69%、45.00%、70.59%，差异有统计学意义(P<0.01)。uPA的阴性表达率也有统计学意义；（5）胃癌中CD44v6 和uPA 的表达呈正相关(P<0.01) 。结论：CD44v6、uPA 的表达均与胃癌的分化程度、浸润深度和淋巴结转移有关,二者在胃癌的浸润和转移过程中可能有协同作用。

【关键词】  胃癌;细胞表面整合蛋白-6;尿激酶型纤溶酶原激活物;浸润;转移

    [Abstract]   Objective：To study the expression of urokinase-type plasminogen activator(uPA) and cluster of differentiation 44-6 on the infiltration and metastasis of gastric cancer and to investigate the relationship of their expression. Methods：Immunohistochemical technique (S-P method) was applied to detect CD44v6 and uPA in 67 cases of gastric cancer. Results：（1）Of the 67 cases gastric cancer, 34(50.75 %) were positive for CD44v6 , 35 (52.24%) for uPA. The co-expression of CD44v6 and uPA was 26(38.81%)；（2）The CD44v6 positive rate in well differentiated carcinoma was higher than that in poorly one (P<0.05) ; The same result was concluded about uPA（P<0.01）；（3）CD44v6 and uPA positive rates in the cases with lymph node metastasis were relatively higher than that without lymph node metastasis（P<0.01）；（4）The differences of CD44v6 and uPA positive rates were significant among cases of early gastric cancer and cases with muscularis involvement and cases with whole layer infiltration(P<0.01)；（5）The relationship was significant between the expression of CD44v6 and uPA in gastric cancer (P<0.01) . Conclusion：The study shows that CD44v6 and uPA may play an important role in histologic types or invasion or metastasis of gastric cancer. The assay of CD44v6 and uPA in patients with gastric cancer , as the clinical valuable marker, has the active role and instructive significance in estimating prognosis and working out rational therapy.

    [Key words]   Gastric cancer; CD44v6 ; uPA; Infiltration; Metastasis

    肿瘤的浸润及转移是患者死亡的主要原因，也是判断患者预后情况的重要指标；胃癌的浸润及转移是肿瘤细胞和宿主细胞的一个复杂、多步骤、多因素参与的过程。多种转移相关基因激活是导致肿瘤细胞转移的重要因素，肿瘤细胞的黏附力和对周围基质蛋白的降解能力与恶性肿瘤的转移和预后密切相关CD44v6，uPA，它们能有效地降解细胞外基质,参与机体的许多生理和病理过程。本文就 CD44v6和uPA 在胃癌中的表达以及二者的相关性作如下探讨。

    1 　 材料与方法

    1.1 　 对象　  本文选择我院1992年1月～2001年12月67例资料齐全的胃癌手术标本,其中男39例,女28例；年龄36～75岁,平均56.45岁。标本经甲醛固定、石蜡包埋、切片、染色。

    1.2 　 方法　  采用免疫组织化学SP 法。鼠抗CD44v6人和uPA 单克隆抗体以及SP 免疫组化试剂盒(即用型、广谱试剂盒) 均系美国MAXIM 公司产品,购自福州迈新生物技术开发公司。上述切片经脱蜡水化,经过氧化氢甲醇液阻断、正常羊血清保护,再加入第一抗体、生物素标记的第二抗体、链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶溶液等,最后经DAB显色、复染、脱水、透明、封固。用已知胃癌阳性标本作阳性对照,PBS 替代一抗作阴性对照。CD44v6主要定位于胃癌细胞胞浆,uPA则主要定位于细胞膜或胞浆中。抗原阳性物质为黄棕色颗粒状。阳性细胞占肿瘤细胞总数超过25%者为阳性。

    1.3 　 统计学方法　  CD44v6、uPA 的表达与胃癌临床病理及相关分析采用χ2检验。

    2 　 结      果

    2.1   在胃CD44v6癌组织中的表达   见表1。肿瘤组织中CD44v6阳性物质主要位于肿瘤细胞胞浆和部分组织间质内,以癌巢的边缘实质细胞内多见。67例胃癌组织中CD44v6阳性34例（50.75%）；其表达与浸润深度亦相关,早期胃癌、侵及肌层和侵及全层者的阳性率分别为7.69%(1/13)、45.00%(9/20) 、70.59%(24/34)，差异有统计学意义（P＜0.05）。

    2.2 　 uPA在胃癌组织中的表达   见表1。肿瘤组织中uPA 阳性物质亦主要位于肿瘤细胞胞浆。67例胃癌组织中uPA阳性为35例（52.24%）；其表达与浸润深度亦相关，早期胃癌、侵及肌层和侵及全层者的阳性率分别为15.38%(2/13)、40.00%(8/20)、73.53%(25/34)，差异有统计学意义（P＜0.05）。

    2.3   CD44v6 和uPA 在胃癌组织中表达的相关性   见表2。67 例患者中CD44v6和uPA 均为阳性者26例(38.81%) ,同为阴性者24例, 二者的表达具有相关性（P＜0.01）。

    3   讨      论

    CD44（cluster of differentiation 44）是一个很受关注而分布极为广泛的细胞表面黏附分子,属于Ⅰ类膜蛋白,是软骨连接蛋白家族的一员。CD44最初由Dalchau 等（1980）采用单克隆抗体技术检测并确定。CD44v6（cluster of differentiation 44 variant 6）是CD44的一种拼接变异体,其表达可改变肿瘤细胞表面黏附分子的构成和功能,并有助于肿瘤细胞获得转移潜能，在肿瘤细胞侵袭和转移过程中起促进作用[1]。有报道[2，3]，人类胃癌组织中CD44v6 表达率为64%～77% ,而且与肿瘤的浸润转移密切相关。Gunthert 等[4]发现含有V6 的CD44 变异体在小鼠动物模型中与胰腺癌淋巴结转移有关。CD44v6可使胃癌细胞获得转移能力通过小血管或淋巴管内基质的黏附结合，使转移的癌细胞稳定寄居，并形成转移灶。梁雨荣报道[5]CD44v6阳性率在淋巴结转移组及淋巴结无转移组存在统计学差异，表明CD44v6与胃癌的淋巴结转移相关，辛彦等报道[7]晚期胃癌CD44v6检出率明显高于不伴转移者。

    我们发现CD44v6在肿瘤组织中的表达与患者年龄及性别无关,但与肿瘤细胞的分化程度、淋巴结转移及浸润深度显著相关,在低分化胃癌、有淋巴结转移者或浸润至全层者表达较高,与文献报道一致[7，8]，说明CD44v6可使胃癌细胞获得转移能力通过小血管或淋巴管内基质的黏附结合，使转移的癌细胞稳定寄居，并形成转移灶。从而促进肿瘤的侵袭和转移。但由于肿瘤细胞的异质性,并非所有的肿瘤细胞都具有转移潜能,本实验发现部分肿瘤组织不表达CD44v6，而有表达的瘤细胞多位于癌巢边缘,提示具有转移潜能的癌细胞多位于肿瘤结节表面或周边,因而也符合肿瘤细胞侵袭并脱落向远处转移的。

    uPA 是分子质量为50～60 kD 的一种丝氨酸蛋白酶,表达定位于癌细胞胞浆中[9]，在癌细胞周围的细胞间质和基底膜的破坏过程中起重要作用。Okusa[11]通过分析71例胃癌患者肿瘤切除标本认为，uPA活性增高见于进展期、未分化型、基质丰富的和浸润型生长的肿瘤, 提示uPA的表达和激活参与肿瘤浸润的过程uPA 的酶活性也是胃癌的一个预后因素,由间质细胞产生的uPA 可能调节癌细胞的侵袭。本研究发现uPA 在胃癌中的表达与CD44V6一致,并且二者的表达显著相关,提示二者可能在胃癌浸润和转移过程中起协同作用。联合检测CD44V6和uPA ,可以一方面探索胃癌浸润和转移的原因,另一方面为胃癌临床的研究寻找靶作用点，以期提高肿瘤患者的生存期。

【文献】
  [1] Yoshida R ,Kimura N ,Harada Y, et al . The loss of Ecadherin ,alpha and beta catenin expression is associated with metastasis and poor prognosisin invasive breast cancer [J]. Int J Oncol ,2003 ,18 (3) :513-520.

[2] 陈天义. CD44v6、nm23 及基质金属蛋白酶9在胃癌组织中的表达及其意义[J]. 基层医药,2006,13 (2) :182-185.

[3] 吴凯彦,刘 欣,郝远瑞. 胃癌异常增生组织中CD44v6 表达及其意义[J]. 中国基层医药,2002,9 (12) :1065-1066.

[4] Gurthert U, Hofman M , Rudy W. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cell lines[J]. Cell ,1991，65:13-18.

[5] 梁雨荣，何尔斯泰. 转移相关基因CD44v6在胃癌中的表达意义[J]. 中国肿瘤临床，1999,26（1）:33-35.

[6] 辛 彦，赵风凯，张素敏，等. CD44v6基因编码蛋白表达与胃癌转移和预后的关系[J]. 世界华人消化杂志,1999，7（3）；210-214.

[7] 姜汉国，唐慰萍. 胃癌及淋巴结转移灶中CD44v6和上皮钙粘素的表达及其意义[J]. 临床消化病杂志，2001 ,13(2)∶60-63.

[8] 陈秀娇,陈建阳. CD44v6 MMP-9在胃癌中的表达及生物学行为关系研究[J]. 江西医学院学报, 2005，45（5）:56-58.

[9] 周晓武,王元和,王 强. 尿激酶型纤溶酶原激活物在胃癌组织中的表达及其意义[J]. 第二军医大学学报,1998 ,19(3) :250-2521.

[11] Okusa Y, Ichikura T, Mochizuki H. Prognotic impact of stromal cell-derived urokinase-tupe plasminogen activator in gstric carcinoma[J]. Cancer, 1999,85(5) : 1033-1038.