伤寒H901经不同途径免疫抗血清效价增长规律的比较
作者：申海光，莫海英，蒋敏强
【摘要】 目的 观察不同途径免疫抗血清效价的变化，探讨最佳免疫途径。方法 用伤寒H901标准诊断菌液分别通过耳静脉、皮下、腹腔3种途径免疫兔子。从第2次注射后的第2天开始由耳中静脉采血测定抗血清效价，并依此绘出效价变化曲线。结果 静脉注射免疫途径效价变化曲线陡峭。注射量每增加1倍，血清效价上升4倍。高峰期几何平均效价达1∶12900，最高效价达1∶20480，远优于皮下和腹腔注射免疫途径。结论 伤寒H901采用静脉注射免疫途径免疫家兔的结果与理论相符，可免去传统方法制备抗原的繁杂程序。
【关键词】 伤寒H901标准诊断菌液；免疫测定；免疫学试验；抗血清
在微生物免疫学教学中，抗原抗体的结合是比较抽象的概念，借助实验的方法可以帮助学生对这一原理的直观理解。抗血清即是通过利用目标抗原免疫动物，从而使动物体内产生相应的抗体，此抗体主要存在于被免疫动物的血清中，通过采集动物的血液收集血清而获得。抗血清的质量对实验过程中的特异性和敏感性有很大的影响，因此制备高效价和敏感性强的抗血清是实验的关键，也是实验的基础。肥达氏反应中所使用的血清可以通过处理相应的活菌后感染动物的方法获得，但这样操作繁杂，时间长，浪费课时，购买的血清价格贵，效价低。笔者直接用肥达氏标准诊断菌液免疫动物，经多次试验，取得良好效果，现举其中用伤寒H901免疫兔子，抗血清效价增长规律的观察结果供同行。
1 材料与方法
1.1 抗原 选用宁波天润生物药业有限公司生产的伤寒Ｈ901标准诊断菌液。按说明书用无菌生理盐水1∶10稀释成７亿／ml个细菌的浓度，冰箱保存备用。
1.2 动物 选用(2.5±0.25)kg范围内的健康雄性家兔9只，随机按顺序编号，分笼饲养。在免疫前作伤寒抗血清玻片凝集和试管凝集试验，均为阴性的兔子才可继续使用，否则应及时更换条件相同的兔子，以免影响实验的性。
1.3 器材 温箱，１ml一次性注射器，消毒用酒精、碘酒、棉签，记号笔，酒精灯，兔箱，试管等。
1.4 免疫 动物随机分成耳静脉免疫组(A组)、皮下免疫组(B组)、腹腔免疫组(C组)3组，每组3只。分别采用耳静脉、皮下和腹腔注射的方法。免疫剂量和时间均同，分别是：第1天0.1ml，第4天0.2ml，第7天0.4ml，第10天0.8ml。整个过程应执行无菌操作。
1.5 试血 从第2次免疫注射后的第2天（即第6天）开始试血。用1ml注射器从耳中静脉采血1ml，装于试管，37℃温箱留存4～6h［1］，让血清析出。取血清1∶20稀释，按肥达氏操作，倍比稀释至第10管(高峰期至第12管)。之后每管加0.5ml抗原(标准菌液)。混匀后静置37℃温箱留存过夜。第2天读取效价，以肉眼观察有絮状沉淀2个“+”的血清最高稀释倍数为其效价。试血的频率为第6、9、12、15、18、21、23天。
2 结果
3组动物分别读取效价，然后求出每组3只兔子效价的几何平均数，见表1。并根据以上数据绘成效价变化曲线，见图1。
表1 不同免疫途径效价几何平均数频率（略）
图1 不同免疫途径效价变化曲线（略）
2.1 从以上血清效价变化表和曲线图可以看到，在抗原相同、免疫的频率相同、免疫的剂量相同的情况下，3种免疫方法中以耳静脉注射方法效果最好［2］，血清效价增长快而高。从第2次注射开始，注射量每增加1倍，血清效价增长约4倍。因为第1次注射为免疫应答阶段，所以效价意义不大。而皮下与腹腔注射免疫，效价的增长较慢，但第3针与第4针之间注射的量增加1倍效价增长10倍。这与皮下和腹腔注射吸收慢有关。
2.2 皮下与腹腔注射免疫方法出现效价高峰期要比静脉注射免疫法晚了约1针的时间。但维持的时间是一样的，约3～5天。
2.3 高峰期静脉注射免疫所得血清的效价大约是皮下注射免疫法的1.5倍，腹腔注射免疫法的3倍。
3 讨论
直接用伤寒标准菌液免疫动物，方法简单，省去了抗原制备的繁杂程序。其结果与理论是相符的。而且制作的成本低、效价高，静脉注射免疫的平均效价达1∶12900，最高效价可达1∶20480。选用家兔作免疫对象的优点在于家兔免疫产生的抗体是R型免疫血清，具有较宽的抗原抗体比例范围，可应用于直接凝集、试管凝集、肥达氏反应等实验，教学效果良好［3］。
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［1］ 陶义训.免疫学和免疫学检验［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2001:108-109.
［2］ 蔡玲斐.不同免疫途径制备伤寒抗血清效价的比较［J］.杭州医学高等专校学报，2002，23(3):106-107.
［3］ 彭丽花.一种新的动物免疫血清简易制备法［J］.中西医结合杂志，2006，15（13）:1802
