过敏性紫癜患儿血浆肝细胞生长因子及细胞纤维结合蛋白水平变化的研究
【摘要】 目的 检测肝细胞生长因子(HGF)及细胞纤维结合蛋白(c-Fn)水平变化，以探讨血浆HGF和c-Fn与过敏性紫癜（HSP）患儿血管内皮细胞损伤的关系。方法 对32例HSP（其中12例合并肾脏损害）急性期患儿采用酶联免疫吸附法进行血浆HGF、c-Fn水平测定；另选28名健康儿童为对照组，并对两者的相关性进行分析。结果 患儿急性期HGF和c-Fn含量明显高于正常对照组（t分别为5.94、7.11，P均<0.01)；有肾脏功能改变患儿血浆HGF和c-Fn水平较无肾脏功能改变患儿明显升高(t分别为2.58、2.06，P均<0.05)。血浆 HGF和c-Fn浓度二者呈正相关(r=0.79，P<0.01)。结论 HSP患儿血浆 HGF和c-Fn水平的动态检测有助于观察病情进展、判断预后，可为临床正确选择方案提供依据。
【关键词】 紫癜 过敏性；血管内皮细胞 肝细胞生长因子 细胞纤维结合蛋白
Abstract: Objective To examine the relationships between the injury of vascular endothelial cells with hepatocyte growth factor (HGF) and cellular fibronectin (c-Fn) in children with Schoenlein-Henoch purpura (HSP). Methods Plasma concentrations of HGF and c-Fn were detected using ELISA in 32 children with HSP (of 12 associated with kidney injury) in the acute phase. 28 healthy children served as the controls. The correlation between HGF and c-Fn was studied. Results An elevated HGF and c-Fn in acute phase HSP was found, there was statistically significant difference compared to normal control group (t=5.94, 7.11, respectively, P<0.01). The plasma HGF and c-Fn in children with HSP associated with kidney injury increased statistically compared to those without kidney injury (t=2.58, 2.06, respectively, P<0.05). Plasma HGF was associated positively with c-Fn (r=0.79, P<0.01). Conclusion Dynamic measurement of plasma concentrations of HGF and c-Fn is of great value in assessing progress and prognosis!in selection of proper treatment for HSP.
Key words: purpura, Schoenlein-Henoch; vascular endothelial cells; hepatocyte growth factor; cellular fibronectin
过敏性紫癜(Henoch-Schoenlein purpura，HSP)是机体对某些物质发生变态反应所致的广泛性小血管炎，由于血管内皮细胞(vascular endothelial cell, VEC)是血液和血管平滑肌的屏障，是血管中首先受到创伤的部位［1］，所以VEC受损是HSP发病机理的一个重要环节。细胞纤维结合蛋白（cellular fibronectin，c-Fn)是由VEC合成、释放的一种蛋白质，正常生理情况下，仅占循环纤维结合蛋白量的很小部分，当内皮细胞损伤时，c-Fn量增加［2］。而近年的研究发现［3］，肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)是内皮细胞特异性生长因子，促进内皮细胞增殖。本研究测定了HSP患儿血浆HGF和c-Fn浓度，以进一步探讨HSP患儿内皮细胞受损和两者的关系。
1 对象与方法
1.1 研究对象
病例组选自2005年10月～2006年3月于滨州医学院附属儿内科收治的32例HSP患儿，其中男18例，女14例；年龄4～15岁，平均8.2岁。根据皮疹消退前和消退后有无肾损害的临床依据，将HSP患儿分为无肾损害组和有肾损害组，诊断依据均符合美国风湿学会制定的HSP诊断标准［4］。32例HSP患儿中20例无肾损害，男11例，女9例；年龄4～15岁，平均7.8岁；12例有肾损害，男7例，女5例；年龄5～13岁，平均8.9岁；正常对照组28例中，男16例，女12例，年龄4～12岁，平均7岁，为同时期滨州医学院附属医院儿科门诊健康体检儿童，近期内无感染、变态反应性疾病，未使用过免疫制剂。
1.2 标本采集
病例组分别于发病急性期清晨空腹采静脉血3ml(避免高脂和溶血标本)，置于盛1/10体积2%EDTA抗凝管中，3000r/min离心10min，收集上层血浆，置-70℃低温保存待测。
1.3 标本检测
HGF和c-Fn均采用双抗体夹心ELISA法测定，HGF和c-Fn试剂盒均由北京晶美生物工程有限公司提供。使用芬兰雷勃 MK3型全自动多功能酶标仪测定。
1.4 统计学处理
采用SPSS11.0统计软件进行统计学处理。计量数据以±s表示，采用组间t检验及直线相关性分析。
2 结果
2.1 HSP患者血浆HGF和c-Fn检测水平
患儿急性期HGF和c-Fn含量明显高于正常对照组（P<0.01)；有肾脏功能改变患儿血浆HGF和c-Fn水平比无肾脏功能改变者明显升高（P<0.05)，见表1、表2。表1 HSP急性期与正常对照组血浆HGF和c-Fn水平的比较(略)表2 HSP急性期有无肾损害组之间患儿血浆HGF和c-Fn水平的比较(略)
2.2 HSP患者血浆HGF和c-Fn的关系
经直线相关回归分析，HGF和c-Fn呈正相关(r=0.79，P<0.01)。
3 讨论
HSP是儿童时期较为常见的小血管性血管炎，其特征为非血小板减少性紫癜，可伴有消化道症状，关节肿痛及肾脏损害［5］。其发病机理尚不完全清楚，目前认为是一种自身免疫性疾病，即体内免疫复合物(immune complex， IC)形成并沉积于局部血管，激活补体，引起中性粒细胞及一系列细胞因子活化，导致血管受损。由于VEC位于血管壁内侧，是血管中首先受到创伤的部分。因此VEC受损成为ＨＳＰ发生的病理基础。近年的研究对血浆中的一些炎性介质和血管内皮细胞合成产物有了深入了解，使得利用检测这些细胞因子治疗前后的水平来反映VEC的损伤程度成为可能。同时这些因素的变化，又为进一步研究HSP的致病机制奠定了理论基础。本研究即通过检测患儿血浆两种细胞因子HGF和c-Fn水平，来探讨二者在HSP患儿血浆中的含量变化及其在HSP发病机制中的作用，为HSP的临床治疗提供进一步的依据。HGF又称扩散因子(scatter factor，SF)，是间质细胞衍生的一种多功能生长因子，它能促进细胞生长、移行和各种细胞组织形态的发生，在胚胎生长、组织形成过程中起着重要作用，特别是对VEC的促有丝分裂作用强于其他任何生长因子(如血管内皮生长因子)［6］，提示HGF在促进内皮细胞增生和损伤修复方面起重要作用。有报道［7］不同的全身血管炎症性疾病：系统性红斑狼疮、川崎病及多发性小动脉炎病人的循环HGF 浓度可以显著增加，这些报道表明HGF与血管炎疾病有密切关系。进一步研究发现在受损血管中，HGF能促进受损单层内皮细胞增生和移行，是一种有效的血管形成因子［8］。我们的研究结果显示，与正常对照组相比，HSP患儿急性期HGF显著增加，差异有高度显著性。我们分析这种差异可能是由于在HSP的急性期，免疫反应强烈，血管的病理损害程度高，作为其构成的内皮细胞需要大量合成来修补其创面，机体通过代偿性分泌HGF增多促进损伤的修复，刺激VEC的增殖；健康儿童体内微血管发生创伤的几率极低，新生成的少量VEC只对正常凋亡的细胞起着替代和更新的作用，HGF含量低，提示HGF含量的变化与内皮细胞合成数量成正比。患儿有肾损害组HGF与无肾损害组比较差异有显著性。目前已有证据表明在肾损伤时，间质细胞、巨噬细胞、内皮细胞和系膜细胞表达HGF，并通过自分泌和旁分泌途径起作用，可见肾和血浆中HGFmRNA和（或）蛋白水平迅速升高；并且，在急性肾损伤时，远处器官如肝脏、肺脏和脾脏，HGFmRNA表达也都上调［9］。所以，在HSP肾损伤时HGF升高我们推测有两种途径：肾脏局部产生HGF的旁分泌和自分泌机制，及远处器官产生HGF的内分泌机制。
c-Fn是一组高分子糖蛋白，是细胞外基质的重要组成部分，既往认为其具有非免疫素调节的功能，在网状内皮—机体防御系统中起重要作用。近年来国外学者［10］发现VEC可分泌c-Fn，并与VEC损伤有一定关系。c-Fn以两种形式在体内存在，一种是血浆FN（pFN），主要存在于血浆和体液中；另一种为细胞FN（c-Fn），主要存在于细胞表面、细胞外液、结缔组织和各种实质器官基底膜和细胞外基质中。c-Fn和血浆纤维连接蛋白(Fn)可以相互转换，细胞c-Fn可以是血浆Fn的前身，血浆Fn池和c-Fn池之间存在动态平衡［11］。Fn是一种作为VEC损伤的生化指标之一已被学术界确认［12］。在先前的研究中，当其它疾病，如脉管炎、败血症、糖尿病和缺血性中风损伤血管壁时血浆中c-Fn的水平会显著上升，意味着这一蛋白可能是动脉损伤的指示物［13］。由于c-Fn主要局限在VEC内，所以高浓度的血浆c-Fn含量可作为VEC损伤的指标［15］。尽管血浆中Fn主要由肝脏生成 ，但血浆中少量的c-Fn则由内皮细胞合成。由于c-Fn主要粘附于血管内皮的表面，所以血浆中高浓度的此种蛋白能够反映内皮的损伤程度。笔者探讨了与血管内皮损伤有关的因素c-Fn的水平，结果发现，在HSP患儿急性期血浆c-Fn水平明显高于正常对照组，说明c-Fn 也参与了HSP患儿的血管内皮损伤过程。c-Fn是由VEC合成、释放的一种蛋白质，正常生理情况下，仅占循环纤维结合蛋白量的很小部分，当内皮细胞损伤时，c-Fn量增加［15］。因此我们认为c-Fn升高的机理可能是由于血管炎症反应，损伤VEC，促使内皮细胞间的粘连作用减弱，使血管通透性和脆性增加。机体刺激损伤的内皮细胞合成分泌细胞Fn 的量增加，修复损伤的血管，导致循环血液中c-Fn水平升高。当合并肾损害时，免疫复合物引起肾小球毛细血管炎症反应，导致VEC受到损伤，其血浆c-Fn水平与无肾损害组相比差异有显著性，恢复期内除去了病因，内皮细胞功能恢复正常，c-Fn分泌才会逐渐下降。提示血浆中可溶性c-Fn水平不仅与VEC损伤有关，更与疾病进展程度成正相关。并且HSP急性期、恢复期的HGF和c-Fn 水平进行相关分析表明，它们之间存在着明显的正相关关系，也进一步说明机体的自我平衡能力。从上述两组所得的结果可以看出，HGF和c-Fn可以作为VEC损伤的标志。对HSP患儿动态测定血浆HGF和c-Fn浓度不仅能特异性的反映患儿体内VEC损伤的程度，并可能作为疾病进展阶段的鉴别，为临床的合理用药提供了理论依据。
【】
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