免疫组化联合检测诊断前列腺良恶性疾病的研究
作者：李松远，廖志武，李莹，黄秋霞
【摘要】 目的 探讨CK34βE12、P63、P504s联合免疫组化染色在前列腺良、恶性病变鉴别诊断中的意义。方法 采用免疫组化方法，观察CK34βE12、P63、P504s在不同前列腺疾病中的表达情况。结果 36例前列腺病变中，28例良性前列腺增生及低度的不典型增生（PIN）的腺泡及导管周围可见连续的CK34βE12和 P63呈阳性，少数呈间断表达。特别以P63染色明显，但P504s染色皆呈阴性。高度不典型增生（PIN）CK34βE12、P63染色呈不连续表达或阴性，而增生的腺上皮，部分细胞P504s呈弱（+）或（+）；非典型腺瘤性增生，CK34βE12、P63呈（+）、P504s（－）；前列腺癌8例中7例CK34βE12、P63染色呈（－），1例显色局灶性（+），但P504s均呈（+）。结论 P63、CK34βE12、P504s联合检测可明显提高前列腺癌诊断的正确性。
【关键词】 前列腺疾病；免疫组化；诊断，鉴别
随着我国人口步入老龄化，前列腺疾病是临床极为常见的老龄男性疾病。前列腺癌的发病率呈逐年上升趋势。然而在临床病理诊断工作中，常常遇到前列腺良性增生与前列腺癌的鉴别难题，特别是对于细针穿刺前列腺活检的病例，病理诊断正确与否直接决定着临床手术方式方案的选择及评估病人的预后等，均值得病理科及临床科室医师去探讨。我院2001～2006年间对传统开放切除前列腺标本21例，气化电切标本8例，细针穿刺标本7例，共计36例进行常规HE染色后，再进行免疫组化联合检测，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 收集我院2001～2006年前列腺传统方法手术切除，气化电切除及穿刺前列腺标本共36例。其中良性前列腺增生28例［包括低度不典型增生(PIN)4例，非典型腺瘤性增生2例］，前列腺癌8例（包括癌旁高度不典型增生1例，低度不典型增生3例），年龄55～80岁，平均68岁。
1.2 方法 免疫组化染色采用即用型两步法。P63、CK34βE12、P504s单抗及两步法试剂（pv－9000试剂盒）均购自福建迈新生物技术有限公司产品，所有抗体均为工作液。详细步骤如下：①石蜡切片脱蜡至水。②蒸馏水冲洗，PBS浸泡5min，采用高压锅抗原修复。③3％双氧水室温孵育25min，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗，2min×3次。④滴加一抗工作液，37℃孵育2h。⑤PBS冲洗，2min×2次。⑥滴加试剂1，室温孵育20min，PBS冲洗2min×3次。⑦滴加试剂2，室温孵育20min，PBS冲洗2min×3次。⑧DAB显色。⑨自来水充分冲洗，复染、脱水透明、封片。每批染色设置已知阳性对照，阴性对照用PBS替代一抗，DAB显色，苏木素复染。
1.3 结果判断 CK34βE12、P504s以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性表达。P63以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性表达。无棕黄色颗粒出现即为阴性表达。
2 结果
2.1 P63和CK34βE12 P63抗体在前列腺腺体基底细胞胞核特异性着色，而CK34βE12则在基底细胞胞质特异性着色，腺体上皮细胞P63、CK34βE12表达（－），间质成纤维细胞、血管平滑肌也均（－）。在28例良性前列腺增生病例中，可见大多数良性增生腺泡及低度不典型增生腺管周围呈现连续的P63和CK34βE12阳性反应，表明基底细胞完整存在。同时也可见少数的良性腺泡壁CK34βE12及P63染色皆呈腺泡壁间断性阳性表达，甚至完全阴性，2例前列腺非典型腺瘤性增生的病例P63及CK34βE12染色（+），可见增生的小腺泡周围基底细胞存在。癌旁1例高度不典型增生及3例低度不典型增生CK34βE12和P63染色呈程度不同的间断缺失或完全阴性。8例前列腺癌中有7例CK34βE12和P63染色均呈（－），1例在癌性增生的腺管壁上CK34βE12和P63染色显示间断弱（+），表明基底细胞仍有部分残留。
2.2 P504s P504s为前列腺癌细胞标记物，8例前列腺癌上皮细胞皆呈（+），癌细胞胞质特异着色，而基底细胞正常分泌上皮细胞呈（－）。在28例良性前列腺增生中（含低度不典型增生）皆呈（－）。癌旁高度不典型增生腺上皮细胞部分呈弱（+）或局灶（+）。2例非典型腺瘤性增生病例腺泡上皮均呈（－）。
3 讨论
近年来，国内外病家用CK34βE12对前列腺基底细胞进行标记来判断是否为癌，但由于各种原因，假阳性或假阴性的现象时有发生［1,2］，新近国内外研究报道［3,4］，与P53同源的P63是一种特异性和敏感性更高的新的基底细胞标记物，而P504s（a－甲基酰基辅酶A-消旋酶）则是新近发现的前列腺癌细胞标记物。利用P504s与基底细胞特异性标记物（P63或CK34βE12）联合检测将有助于提高对前列腺癌诊断的正确率。目前国内相关报道不多。因此笔者选择传统方法手术切除、气化电切除及穿刺前列腺标本共36例进行CK34βE12、P63、P504s免疫组化联合检测，以探讨其在前列腺良性增生和前列腺癌鉴别诊断中的实际应用价值，并与临床互相交流达成共识。
在临床病理诊断中经常遇到前列腺癌与前列腺良性增生（特别是重度不典型增生）的鉴别诊断问题。早期发现和诊断前列腺癌非常重要，基底细胞的存在与否是鉴别前列腺良、恶性病变的最关键指标。一般来说，良性增生性病变导管及分泌上皮与基膜之间都存在基底细胞，而前列腺癌通常基底细胞消失。由于前列腺组织结构复杂多变，部分良恶性病变差异很小，用常规HE染色显微镜下观察前列腺病变的基底细胞是否存在往往很困难。近十年来研究发现［1］，利用CK34βE12对基底细胞进行标记有助于前列腺癌的诊断，然而在病理诊断实践中，人们逐渐发现CK34βE12染色特异性不强，敏感度不高以致有假阳性或假阴性现象发生。最近研究报道［2］，P63是P53肿瘤抑制基因的同源性基因，位于染色体3q27-29，它在不同上皮的基底细胞胞核选择性表达。研究显示P63是一种新的基底细胞标记物，其特异性及敏感性比CK34βE12更胜一筹。P63作为标记物用于前列腺良恶性病变鉴别有较理想的效果。
P504s为a－甲基酰基辅酶A-消旋酶（AMACR），它的基因定位于染色体5P13，存在于胞质过氧化物酶和线粒体上，在侧链脂肪酸的β氧化中发挥重要作用，最近发现前列腺癌内mRNA表达上调以致于蛋白产物过度表达。用P504s免疫组化染色，前列腺癌组织呈阳性，而良性腺泡呈阴性。对明确诊断效果明显［3］。
本组通过对36例前列腺传统手术方法切除，气化电切除或穿刺标本进行CK34βE12、P63、P504s抗体染色，结果表明，P63抗体能特异地与基底细胞的胞核反应显示基底细胞的存在，而腺体上皮细胞呈阴性反应。大多数前列腺良性增生性病变，P63显示阳性，在腺泡周围呈连续性分布。研究显示，P63染色敏感度较CK34βE12更高，此点与报道一致［2］。与此同时，我们观察到在前列腺良性增生病例，少数良性腺泡或腺泡壁上部分基底细胞存在CK34βE12和P63染色都呈阴性的情况。国内学者马骏［5］也曾有过类似的报道，在正常前列腺组织，有少数腺泡没有基底细胞。鉴于此，我们认为在临床活检标本尤其是穿刺标本，仅CK34βE12或P63染色阴性，不能作为诊断前列腺癌的确诊指标，必须辅以P504s染色或结合HE形态改变进一步明确诊断，避免病理误诊。
本组研究显示低度PIN大多显示腺管周围呈连续的P63（＋），少数也可呈间断（＋），其增生的腺上皮P504s染色呈阴性反应。2例高度PIN中，1例P63呈不同程度的间断缺失或完全阴性，部分腺上皮细胞P504s染色出现弱阳性或阳性，结果提示，低度PIN时基底细胞逐渐减少直至完全消失，在高度PIN时，腺上皮细胞且出现了癌性增生。2例前列腺非典型腺瘤性增生的腺上皮细胞P504s呈阴性，P63染色证实增生的小腺体壁上均有基底细胞存在，故易与前列腺癌的浸润癌巢鉴别。
本组8例前列腺癌中7例经免疫组化染色显示CK34βE12、P63呈阴性，显示基底细胞完全消失，上皮细胞形态异常，P504s呈现较强阳性，诊断前列腺癌证据充足。
研究表明，P63是一种特异性强、敏感度高的基底细胞标记物，而P504s则为一种新的癌细胞标记物，两者联合检测应用将明显地提高前列腺癌的诊断正确性，为临床提供更病理依据。本方法操作简单，费用不高，一般基层病理科都可开展。
【文献】
［1］ 孔祥田，邓方明，王静华，等.高分子量细胞角蛋白在前列腺癌鉴别诊断中的应用［J］.中华病理学杂志，1996，25（4）：199-261.
［2］ 胡志红，徐晓，彭进.CK34βE12、P63表达在乳腺癌和前列腺癌诊断中的应用价值［J］.山东医药，2005，45（32）：10-12.
［3］ 陈光勇，刘丽娜，周小鸽，等.a－甲基酰基辅酶A消旋酶在前列腺癌诊断和鉴别诊断中的作用［J］.中华病理学杂志，2004，33（5）：419-423.
［4］ Xiao Y, Chen J, Luo YF, et al. Detection of 504s in prostatic adenocinomas ［J］. Natl Med J china，2004，84(16)：1362-1366.
［5］ 马骏.高分子量角蛋白34βE12和PSA在前列腺癌诊断中的应用［J］.临床与实验病理学杂志，2000，16(2)：176.
