60 Co照射对MGC-803细胞株癌基因表达的影响
【摘要】 ［目的］ 观察 60 Co照射对胃癌MGC-803细胞株癌基因表达的影响. ［方法］ 利用常规方法复苏并培养MGC-803胃癌细胞株，利用 60 Co照射癌细胞株，在倒置显微镜下观察细胞形态学变化，利用免疫组织化学及原位杂交方法显示癌基因，观察间隙为6h. ［结果］ 60 Co照射前MGC-803胃癌细胞株c-fos，c-ha-ras基因表达稳定;照射6h后培养瓶内细胞被破坏或变形，且不表达癌基因，12～24h时部分癌细胞开始表达癌基因，48h时多数癌细胞表达癌基因. ［结论］ 60 Co照射在癌细胞内作用靶点是癌基因的DNA链，被照射后DNA易被破坏使肿瘤细胞的增生被抑制.
【关键词】 基因表达调控，肿瘤;癌基因;放射疗法
放射是重要的肿瘤治疗方法之一，现已成 为独立的专门学科.目前认为肿瘤是基因病变引起癌基因激活和抑癌基因的异常表达导致细胞的异常增生而形成 ［1］ .放射治疗利用各种射线破坏癌基因DNA结构，改变癌基因表达，破坏肿瘤细胞，以达到治疗目的.国内外已有关于放射治疗后肿瘤组织基因发生变化的研究报道 ［2，3］ .本文探讨了 60 Co照射对MGC-803胃癌细胞株癌基因表达的影响.
1 材料与方法
1.1 材料 主要试剂:RPMI-1640培养基为Life Tech公司产品，C-fos抗体为Santa curz公司产品，p53，APC，c-ha-ras生物素标记由北京医科大学病理科提供;MGC-803胃癌细胞株由医科大学肿瘤研究所提供.
1.2 方法 按常规复苏MGC-803胃癌细胞株，细胞贴壁生长，进入对数生长期时参照［4］方法照射 60 Co放射线，1次照射剂量为100Gy.继续培养，分别于照射后6，12，24，48h进行观察，并行涂片处理检测癌基因.免疫组织化学SP法:按常规操作，DAB显色，每组设阳性及阴性对照，确定阳性率 ［5，6］ .原位分子杂交:于42℃条件下用不含探针的杂交缓冲液孵育1，2h，滴加2mg/L含探针的杂交液，覆盖盖玻片，于95℃条件下共变性15min，随即进行反应，42℃过夜（12～16h），清除未结合探针，滴加碱性磷酸酶标记的链霉卵白素，BCIP/NBT显色，设阳性对照，确定阳性率 ［5，6］ .
2 结果
60 Co放射线照射后6h时在倒置显微镜下观察可见，贴壁细胞全部漂浮，细胞被破坏或变形;12h时与6h时相仿，只在少数部位可见漂浮的圆形细胞;24h时可见较多的贴壁细胞;48h时所见与24h时相仿.照射6h时癌基因检查未见癌基因表达;12h时在细胞内或细胞外可见少量c-fos，c-ha-ras基因表达;24h时表达较12h时增多;而在48h时则明显增多.为了遏制癌基因的表达，照射后12h时继续分2次给予2000Gy的 60 Co照射，间隔为5h，到24，48h时观察发现c-fos，c-ha-ras基因表达未增多，提示加大照射剂量或改变照射方法可阻碍癌基因 DNA的表达，抑制癌细胞的增殖.
3 讨论
本实验用免疫组织化学和原位杂交方法观察癌细胞结果示c-fos，c-ha-ras基因呈阳性表达，p53，APC基因呈阴性表达，提示本组癌细胞株已被激活.本实验用突变型p53抗体进行了实验，发现p53基因未见表达，提示该癌细胞株p53以野生型形式存在，未发生突变，但处于关闭状态，不能起抑制癌细胞作用.本实验中胃癌细胞株经 60 Co照射后癌基因不表达，提示癌细胞已被损伤，12h后癌基因有新表达.受到1个剂量的放射照射后，受损细胞并不立即全部死亡，而是有些细胞再进行几次不规则的分裂后才死亡.在一般的照射剂量下，有的细胞还能保存分裂能力，继续无限分裂，在此过程中若得不到适宜的环境和条件，则转化为不可逆的损伤，使细胞最终丧失分裂能力.本实验结果提示，加大照射剂量或改变照射方法可阻碍癌细胞基因表达，提高肿瘤细胞的抑制增殖作用.
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