当归酒精提取液对大鼠骨骼肌收缩力及小鼠强迫游泳时间的影响
【摘要】 [目的] 探讨当归酒精提取液对大鼠骨骼肌收缩力及小鼠强迫游泳时间的影响. [方法] 将大鼠分为生理盐水、当归大剂量(1.40g/kg)、中剂量(0.70g/kg)及小剂量(0.35g/kg)4个组,将小鼠分为生理盐水、当归大剂量(3.00g/kg)、中剂量(1.50g/kg)、小剂量(0.75g/kg)4个组,每组分别灌胃给予相应制剂2周后,观察电刺激大鼠坐骨神经对在体腓肠肌和比目鱼肌收缩力以及小鼠强迫游泳时间. [结果] 当归酒精提取液使大鼠腓肠肌和比目鱼肌单收缩的最大收缩幅度增高,潜伏期缩短及1/2舒张时间延长;强直收缩的最大收缩幅度增高,潜伏期缩短,疲劳指数百分率减小,使小鼠游泳时间延长. [结论] 当归酒精提取液可增强大鼠快肌和慢肌的收缩力,并具有抗疲劳作用.
【关键词】 肌,骨骼;收缩;疲劳;当归;大鼠;小鼠
《本经》中记载当归属伞形科多年生草本植物(Angelica sinensis(Oliv.)Diels)的根,具有补血调经、活血止痛及润肠通便之功效 [1] .近期研究表明,当归还具有提高记忆力 [2] ,抑制血小板凝集和子宫平滑肌收缩 [3] ,镇痛,提高免疫力 [4] ,清除氧自由基 [5] ,改善骨骼肌代谢能力 [6] ,增强老年小鼠运动能力 [7] 等诸多功效.目前当归是否影响骨骼肌的收缩力,尤其是在体研究骨骼肌收缩力学的研究报道少见.本实验通过电刺激大鼠坐骨神经,观察在体腓肠肌和比目鱼肌的收缩力以及小鼠的强迫游泳时间,探讨了当归酒精提取液对大鼠骨骼肌收缩力及小鼠强迫游泳时间的影响.
1 材料与方法
1.1 材料 当归酒精提取液由延边大学药学院药物化学教研室提供,每mL含1g生药,临用前加生理盐水配制成所需浓度.实验动物采用体重为180~200g的雄性Wistar系大鼠和18~22g的昆明种小鼠,均由延边大学医学部实验动物科提供.实验所用仪器有成都泰盟科技有限公司的RM-6240生物机能实验分析系统和张力换能器(JH-z204008,50g).
1.2 方法
1.2.1 动物分组 将28只大鼠和28只小鼠各分为4个组,即对照组及当归大、中、小剂量组,每组各为7只.当归大、中、小剂量组实验动物分别灌胃给予相应剂量的当归酒精提取液,即大鼠当归大、中、小剂量组分别为1.40,0.70,0.35g/kg,小鼠分别为3.00,1.50,0.75g/kg.大鼠灌胃容量为10mL/kg,小鼠为40mL/kg;正常组灌胃给予等容量生理盐水;每日1次,连续给药14d.
1.2.2 标本制作及观察 于末次给药30min后,给大鼠100g/L水合氯醛(3.0g/kg)腹腔注射行麻醉,待麻醉后取腹卧位固定,制作在体左侧坐骨神经-腓肠肌标本和右侧坐骨神经-比目鱼肌标本.选择约10cm长的细线缚于腓肠肌和比目鱼肌肌腱,缚线一端连接于张力换能器悬梁臂上,将换能器同样固定在支架上,令肌肉处于最大等张收缩的前负荷状态;将张力换能器与RM-6240系统相连,保护刺激电极置于坐骨神经干,描记波形并记录数据.实验中 为了防止神经肌肉干燥而涂抹液体石蜡,并将动物直肠温度保持在37℃左右.小鼠组同样于末次给药30min后,在小鼠尾部1/3~2/3处负重(体重的10%)后放入水深为22cm的水槽中游泳.
1.2.3 主要观察指标 1)在单刺激、波宽0.2ms条件下,找到最大刺激强度并测定肌肉单收缩时的最大收缩幅度(Pt)、潜伏期(CT)及1/2舒张时间(HRT).2)在连续单刺激、波宽0.2ms、2倍最大刺激强度、5倍刺激强度引起完全性强直收缩的最小刺激频率条件下,记录完全性强直收缩时的最大收缩幅度、潜伏期及疲劳指数(FI)等.3)观察和记录每只小鼠自入水后到沉入水中10s不能浮出水面的时间,并记录给药前和给药2周后的体重.
1.2.4 统计学处理 数据处理采用Prism统计软件进行组间比较的t检验.
2 结果
2.1 当归酒精提取液对大鼠腓肠肌收缩力的影响 由表1可见,当归酒精提取液可缩短大鼠腓肠肌单收缩和完全性强直收缩时的潜伏期,增加单收缩的最大收缩幅度、1/2舒张时间和完全性强直收缩时的最大收缩幅度,降低疲劳指数,与对照组比较有显著性差异(P<0.05),而且作用与剂量间有量效关系.
2.2 当归酒精提取液对大鼠比目鱼肌收缩力的影响 由表2可见,当归酒精提取液可明显缩短大鼠腓肠肌单收缩和完全性强直收缩时的潜伏期,增加单收缩的最大收缩幅度及1/2舒张时间,提高完全性强直收缩时的最大收缩幅度,降低疲劳指数,与对照组比较有显著性差异(P<0.05),而且作用与剂量间有量效关系.
2.3 当归酒精提取液对小鼠强迫游泳时间和体重的影响 对照组小鼠强迫游泳时间为(180.17±26.35)s,而实验组小鼠强迫游泳时间则明显地延长,当归大、中、小剂量组分别为(720.23±31.48)s,(540.70±38.17)s,(300.45±21.81)s,与对照组相比较均有显著性差异(P<0.05),并具有明显的量效关系(图1).当归酒精提取液还可增加小鼠体重,大剂量组小鼠体重比对照组增加(2.69±0.45)g,两 组间有显著性差异(P<0.01),见图2. 表1 当归酒精提取液对大鼠腓肠肌收缩力的影响与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001 表2 当归酒精提取液对大鼠比目鱼肌收缩力的影响
3 讨论
当归的成分主要有阿魏酸、阿魏酸松伯醇酯、邻苯二甲酸-2-乙基已酯、邻苯二甲酸二丁酯、木蜡酸、棕榈酸及Z-6,7-顺式-二羟基甲苯内酯 [8] ,主要的功效是补血调经、活血止痛及润肠通便 [9,10] .本实验结果表明,当归酒精提取液可增加大鼠腓肠肌和比目鱼肌完全性强直收缩时的最大收缩幅度.丁基苯 酞是当归主要成分之一,据报道消旋、左旋丁基苯酞可降低低糖低氧刺激后培养的豚鼠皮层神经细胞谷氨酸和5-羟色胺的含量,亦可抑制由花生四烯酸引起的神经细胞谷氨酸的释放 [11] ;丁基苯酞还可直接作用于脑细胞,有效地保护细胞内线粒体,改善细胞的能量代谢 [12] ,从而增强骨骼肌抗疲劳的能力.实验结果表明,当归的酒精提取液可能是通过丁基苯酞或黄酮类的抗氧化作用和通过血液动力学和改善血液循环等机制来提高抗疲劳能力,但详细作用机制尚有待于进一步深入研究.
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