RP-HPLC法测定维生素E霜的含量
[关键词] 维生素E霜；维生素E；HPLC；含量测定
Determination of Vitamin E in Vitamin E Cream by RP-HPLC
LI Jian，LU Qi-wen，HE Lin.
(Department of Pharmaceutics, Guangdong College of Pharmacy, Guangzhou,Guangdong 510006, China)
Abstract: ObjectiveTo determine the content of Vitamin E in Vitamin E Cream. Methods RP-HPLC method was used. The chromatographic column was DiamonsilTM C18, the mobile phase was methanol∶chloroform (85∶15), the flow rate was 1.0ml・min-1,the detection wavelength was 284 nm, and the column temperature was 40 ℃. Results The average recoveries for Vitamin E was 99.79%, precision of the method was 0.20%(RSD, n=6). Conclusion The method could be used to determine the content of Vitamin E in Vitamin E Cream.
Key words: Vitamin E Cream; Vitamin E; RP-HPLC; Assay
维生素E是人的机体维持正常代谢和机能必需的脂溶性维生素，维生素E（VitE）霜是皮肤科常用的一种制剂，已用于某些衰老性皮肤病[1~2]。其主要成份为VitE，现行测VitE含量标准[3]采用气相色谱法，由于基质的干扰，无法按标准方法进行含量测定，用HPLC法能消除基质的干扰，不经分离直接测定复方VitE霜中VitE的含量，方法简单，灵敏度高，重现性好，结果稳定，适合对该制剂质量控制的要求。
1 仪器与试药
1.1 仪器日本岛津高效液相色谱仪(LC－10 ATVP×2台溶剂输入泵，SPD－10 AVP紫外检测器，SCL－10 AVP系统控制器，CTO－10 ASVP柱温箱，SPD－M10 AVP二极管阵列检测器)；LCsolutionVer1.X色谱工作站(日本岛津公司)。
1.2 药品与试剂维生素E对照品(药品生物制品鉴定所)，维生素E霜剂和基质霜剂(广州市红十字会提供)，甲醇、氯仿均为色谱纯。
2 实验部份
2.1 溶液的制备
2.1.1 供试品溶液:取VitE霜剂约1.0 g，精密称定，置于100 ml棕色容量瓶中，加60～70 ml甲醇，超声溶解15 min后用甲醇稀释至刻度，0.45 μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
2.1.2 对照品溶液:精密称取VitE对照品101.96 mg置于100 ml棕色容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度、摇均，得VitE浓度为1.0196 mg・ml-1的对照品贮备液。分别吸取一定量的对照品贮备液,用甲醇稀释成浓度为10.196，50.980，101.960，152.940，203.920，254.900，305.880 μg・ml-1的对照品溶液。
2.1.3 基质溶液:取缺VitE霜剂约1.0 g，精密称定，置于100 ml棕色容量瓶中，加60～70 ml甲醇，超声溶解15 min后用甲醇稀释至刻度，0.45 μm微孔滤膜过滤，作为样品缺VitE阴性对照品溶液。
2.2 色谱条件及系统适用性试验色谱柱：DiamonsilTM(钻石) C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm迪马公司)；流动相：甲醇-氯仿(85∶15)；流速：1.0 ml・min-1；检测波长284 nm；柱温为40 ℃；分别取对照品溶液(VitE浓度为101.960 μg・ml-1)，供试品溶液和阴性对照品溶液20 μl注入色谱仪，按上述色谱条件，记录色谱图(见图1 )。VitE和样品中相邻色谱峰的分离度大于1.5；理论板数以VitE峰应不低于9000；拖尾因子约为1.04；保留时间约为9.97 min。
2.3 方法学考察
2.3.1 线性与范围:吸取不同浓度的对照品溶液各20 μl，分别进样测定，以峰面积(A)对对照溶液系列浓度(C)进行回归，得回归方程A＝4379C＋11066.65，r＝0.9997，试验表明VitE在0.2039～61176 μg之间与峰面积线性关系良好。
2.3.2 精密度试验:取浓度为101.960 μg・ml-1的VitE对照品溶液20 μl，连续测定5次，记录峰面积并，结果VitE峰面积的平均值为456942，RSD为0.41%，表明仪器精密度良好。
2.3.3 稳定性试验:取VitE霜剂供试品溶液(批号20050314)在0，2，4，6，8，12 h分别进样20 μl，记录峰面积，结果VitE峰面积的平均值为452381，RSD为0.37%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.3.4 重复性试验:取同一批号(批号20050314)样品6份，按样品提取法提取、测定，结果VitE平均含量为10.0348 mg・g-1，RSD为0.20%，表明分析方法精密度良好。
2.3.5 加样回收试验:精密称取已知含量(批号20050314)的霜剂样品约1.0 g，共6份，分别精密加入浓度为1.0196 mg・ml-1的VitE对照品溶液5.0 ml，5.0 ml，10.0 ml，10.0 ml，15.0 ml，15.0 ml，按“2.1.1”项下方法制备供试液，在上述色谱条件下进样20 μl进行分析，结果见表1。VitE平均回收率为99.79%，RSD＝1.30%，结果表明本方法准确可靠。表1 回收率试验结果（略）
2.4 样品测定取VitE霜剂样品3批，照“2.1.1”项下方法制备供试液，另取101.96 μg・ml-1的对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定，计算VitE的含量，结果见表2。表2 样品测定结果（略）
3 讨论
VitE制剂含量测定除药典规定气相色谱法外，还有分光光度分析法、荧光分析法、高压液相色谱分析法、双波电压分析法、示波极谱分析法等几种主要方法。高压液相色谱法大多采用反相色谱柱进行分析，多以水和甲醇作为流动相，这易造成脂溶性大分子化合物在柱内的沉淀，要经常清洗色谱柱，也可能使色谱峰性不理想[4]。气相色谱法所用的内标物正三十二烷市场上难购买，给日常分析造成困难，而且样品前处理较繁琐。本文采用的HPLC法是以甲醇和氯仿作为流动相，使脂溶性VitE不残留在柱里，能减少VitE的保留时间，并提高了柱的稳定性，保持柱分离效能，延长其使用寿命。由于VitE制剂处方不同，霜剂基质中含有多种成份，用其它方法检测，难消除基质的干扰，采用HPLC法测定能很好的消除基质的干扰，而且不经过分离，直接测定VitE的含量。另外，VitE的化学性质不稳定易氧化，尤其遇光易变色，故在整个操作过程中尽量避光，采用棕色容量瓶。对波长的选择,我们尝试用二极管阵列检测器对VitE对照品和VitE霜样品进行多波长的检测，结果波长在284 nm处为最高峰，故检测波长定为284 nm。对流动相的选择,我们尝试过甲醇作为流动相条件，但VitE保留时间为35 min，出峰时间过长，不。还尝试了不同比例甲醇－氯仿及不同柱温对分离的影响，结果甲醇－氯仿(85∶15)，柱温40 ℃时，VitE霜样品中VitE可和其他组分基线分离，出峰时间适中，并峰形良好。该方法分离效果好、简便、准确，可用于VitE霜剂的质量控制。
[参 考 文 献]
[1] 张石革，何木兰.维生素E霜剂的制备及应用[J].药学杂志,1985,5(2)：28.
[2] 王志朝，夏众源，张 宜,等.超氧化歧化酶霜的研制及临床疗效观察[J].中国医院药学杂志,1993,13(8)：357.
[3] 国家药典委员会.中国药典[M].北京:化学出版社,2005:674.
[4] 樊明涛，吴守一，马海乐.维生素E测定方法的研究进展[J].江苏大学学报(版),2002,23(1)：54-57.
