复方薤白胶囊对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠ET、TNFα含量的影响

              作者：孙菊光，奚肇庆，姜静，朱萱萱，洪建军，蒋萌，邹建东，徐艳，甘咏梅

   [摘要]目的：探讨复方薤白胶囊对野百合碱(MCT)诱导的肺动脉高压大鼠血浆中内皮素(ET)、肿瘤坏死因子α(TNFα)含量的影响。方法：SD 大鼠60只，随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、复方薤白胶囊高剂量组和复方薤白胶囊低剂量组。采用MCT进行一次性腹腔注射（按60mg・kg-1）造模，22d后测定平均肺动脉压、平均右心室压以及血浆中ET、TNFα的含量，并观察肺小动脉及右心室病理变化。结果：模型组平均肺动脉压、右心室压以及血浆中ET、TNFα含量明显高于正常对照组（P＜0.01）。其余各组平均肺动脉压、右心室压以及血浆中ET、TNFα含量明显低于模型组（P＜0.05或P＜0.01），且复方薤白胶囊高、低剂量组优于卡托普利组。结论：复方薤白胶囊能有效降低MCT诱导肺动脉高压大鼠的肺动脉压，可能的机制是抑制TNFα、ET产生，减轻MCT引起的炎性细胞浸润，改善肺小动脉及右心室重构。提示复方薤白胶囊将是防治肺动脉高压很有前途的中药，值得进一步研究。

    [关键词]复方薤白胶囊；野百合碱；肺动脉高压；内皮素；肿瘤坏死因子

       肺动脉高压（pulmonary hypertension，PH）是慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）引起慢性肺源性心脏病的中心环节[1]。阐明PH的形成机制以及寻求理想的防治PH药物一直是COPD、肺源性心脏病防治研究中的重要研究课题［2］。近年来研究发现，肺血管内皮代谢的变化及体液因子在肺动脉高压的发生、中有重要作用[37]。本实验采用野百合碱（MCT）诱导PH大鼠模型，研究复方薤白胶囊(以下简称FFXBC)对MCT诱导的PH大鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNFα）和内皮素（ET）含量的影响，以探讨FFXBC防治COPD、PH的可能机制。

    1  材料与方法

    1. 1  实验动物和药品健康SD大鼠60只，雄性，体重130～175g，鼠龄6～8周，由南京青龙山动物饲养厂提供，证号SCXK 2001 0007。FFXBC由江苏省中药剂科制剂部生产，卡托普利片由中美施贵宝制药有限公司生产，0.9%的NaCl溶液由南京小营制药厂生产，戊巴比妥钠由北京通县育才精细化工厂生产，肝素由江苏省万邦升化医药股份有限公司生产。

    1.2  试剂与仪器MCT，美国Sigma公司生产，批号43606091；TNFα ELISA试剂盒由南京建成生物工程研究所提供；ET ELISA试剂盒由北京晶美生物工程有限公司提供；右心导管:聚乙烯心导管内径0.6mm，外径0.9mm，购于医学院基础医学院研究所；RM 6000多导生理仪购于日本光电公司。

    1.3  方法

    1.3.1  分组  健康SD大鼠60只，适应性饲养3d后根据体重由轻到重编号，借助SAS统计分析系统PROC PLAN程序进行随机分组：正常对照组10只，模型组14只，卡托普利组、FFXBC高剂量组、FFXBC低剂量组各12只。

    1.3.2  造模  模型组、卡托普利组、FFXBC高剂量组、FFXBC低剂量组大鼠分别予一次性腹腔注射2%MCT（剂量60mg・kg-1）复制PH大鼠模型，正常对照组一次性腹腔注射等量生理盐水。

    1.3.3  给药方法及剂量  于造模第2天开始给药。参照《中药药理研究方法》经灌胃器灌胃给药，各组药物剂量：卡托普利组为4.16mg・kg-1・d-1。FFXBC高剂量组为1.32g・kg-1・d-1，FFXBC低剂量组为0.666g・kg-1・d-1。以上各组药物按相应的药物剂量均配成1ml・（100g）-1溶液，每天1次灌胃；模型组予1ml・（100g）-1生理盐水灌胃，1 次・d-1。

    1.3.4  平均肺动脉压(mPAP)和平均右心室压(mRVP)测定  每组按随机数字表法取6～8只大鼠测量肺动脉压，用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，按孙波等[8]方法将一充盈1%肝素的右心导管从右颈外静脉经上腔静脉、右心房、右心室插到肺动脉，导管另一端连接生理多导仪，并连接P300型压力传感器，根据生理多导仪所显示的压力波型变化判断导管的位置。分别记录10、30、60min时的肺动脉压和右心室压，取其平均值为mPAP和mRVP。

    1.3.5  ET、TNFα的含量测定  每只肺动脉压测量完毕后的大鼠行颈动脉或心脏穿刺抽血，剩余的大鼠均进行眼眶取血3ml入备有胰酞酶的试管中，应用放射免疫法测定血浆中ET、TNFα的含量(按试剂盒的要求操作)。

    1.3.6  病检查  取血后立即处死大鼠，剖开胸腔取出心脏、肺脏，取右肺下叶放入10%福尔马林中固定1周，梯度乙醇脱水，取相同部位肺组织、右心室制成标本，石蜡包埋，常规切片，苏木素伊红染色，光学显微镜下观察右心室厚度、细胞形态、肺组织和肺小动脉形态学改变；每组取8只进行病理学检查。

    1.4  统计学处理实验数据用x-±s表示，使用SPSS 13.0统计软件，用成组资料方差齐性检验，在此基础上进行多重t检验及两组比较t检验比较多组和两组之间的差异。

    2  结    果

    2.1  各组mPAP、mRVP测定结果实验结果表明：正常对照组mPAP为（16.37±2.10）mmHg （1mmHg=0.133kPa），mRVP为(35.04±2.96) mmHg，均在正常范围。模型组mPAP为(36.94±4.76) mmHg，mRVP为（36.94±4.76） mmHg，显著高于正常组，达到并超过PH诊断标准，造模成功，两组比较差异有极显著意义（P＜ 0.01）。卡托普利组mPAP、mRVP分别为（31.33±2.35）mmHg、（59.83±3.36） mmHg；FFXBC高、低剂量组mPAP分别为（26.16±2.75）、（27.94± 2.76） mmHg，mRVP分别为（52.5±2.42）、（61.23±4.23） mmHg。卡托普利组，FFXBC高、低剂量组与模型组相比，mPAP、mRVP显著降低，差异具有显著性意义（P＜ 0.01、P＜ 0.05），以FFXBC高、低剂量组mPAP降低更显著。说明FFXBC具有降低MCT诱导HP大鼠肺动脉压作用（表1）。表1  各组大鼠mPAP、mRVP测定结果（略）

    2.2  各组大鼠血浆ET含量测定结果结果显示：模型组血浆ET含量较正常组明显升高，差异具有极显著性（P＜ 0.001），卡托普利组、FFXBC高剂量组、FFXBC低剂量组血浆ET含量比模型组显著降低，差异具有极显著性（P＜ 0.01）。实验结果表明，卡托普利、FFXBC高剂量、FFXBC低剂量均能降低MCT诱导PH大鼠血浆中ET含量，且以FFXBC高剂量组ET降低更显著（表2）。表2  各组大鼠ET含量测定结果（略）

    2.3  各组大鼠血浆TNFα含量测定结果结果显示：模型组血浆中TNFα含量比正常组明显升高，差异具有极显著性（P＜ 0.001），卡托普利组、FFXBC高剂量组TNFα含量较模型组显著降低（P＜ 0.05）。FFXBC低剂量组TNFα含量较模型组无显著降低（P＞0.05）。结果表明，卡托普利、FFXBC高剂量能降低MCT诱导PH大鼠血浆中TNFα含量，FFXBC低剂量组TNFα含量降低不显著（表3）。

    2.4  右心室和肺小动脉病理检查结果（光镜下）正常对照组肺动脉管壁菲薄，内皮细胞扁平连续，细胞分布均匀，大小厚薄较一致；右心室心肌细胞横纹清晰，核居中，右心室无增厚。模型组右心室明显肥厚，可见一些肥大的心肌细胞，核轻度增大及深染，心  表3  各组大鼠TNFα含量测定结果（略）肌间质见炎性细胞浸润及轻度水肿；肺小动脉壁增厚伴玻璃样变，管腔狭窄甚至闭塞，肺组织可见大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主。其余组与模型组相比心肌肥厚和心肌水肿减轻，肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄减轻，肺组织炎性细胞浸润减轻，且以FFXBC高剂量组改善明显。

　3  讨    论

　COPD是呼吸系统常见病、多发病，后期常并发慢性肺源性心脏病，受到了世界各国的重视［9］。COPD引起HP与低氧性肺血管收缩及肺血管重建有关，其病理特征主要包括肺小动脉壁中膜平滑肌细胞增生肥厚、外膜弹力纤维和胶原沉积增多，使肺动脉压力持续增高，形成慢性肺心病[10]。而PH则是COPD为慢性肺源性心脏病的病理生理关键性环节，如果能在疾病早期及时发现并进行适当的防治，就有可能使病变逆转或阻断病变的进一步发展。1967年Hayshi等[11]成功建立了MCT诱导的大鼠PH及肺损伤模型。MCT导致的PH与COPD的PH机理基本相似，模型稳定，易于控制，因此多被采用进行COPD引起HP、肺心病的研究［12］。ET是迄今所知体内最强的缩血管物质，具有强烈收缩肺动脉、促进肺动脉外膜成纤维细胞增生和纤维化的作用［13］；MCT可刺激体循环血管产生ET，直接作用于肺血管平滑肌细胞ETA样受体，引起肺血管收缩和中膜增生，导致肺血管阻力增加，引起PH和肺心病［14］。而TNFα是有着广泛生物学作用的多向性细胞因子，将它注入动物体内可导致急性肺损伤、HP和心率增快［1516］。慢性缺氧HP大鼠中TNFα可增加肺血管对缺氧的反应性，抑制肺动脉内皮依赖性舒张反应［17］。COPD病人的低氧血症、HP、右心室肥厚与TNFα活化及产生增多有关［18］。本实验结果表明正常对照组的mPAP和mRVP在正常范围，模型组mPAP和mRVP均升高，且明显地高于正常组；血浆中ET、TNFα含量明显升高，肺小动脉壁增厚伴玻璃样变，管腔狭窄甚至闭塞，肺组织可见大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，以上结果均与报道相似。模型组与正常组比较差异具有极显著意义。卡托普利组，FFXBC高、低剂量组与模型组相比，其mPAP、 mRVP及血浆中ET、TNFα含量均降低，右心室肥厚、肺小动脉壁肥厚、肺部炎症反应均减轻，差异具有显著性意义，以FFXBC高剂量组效果显著。FFXBC由薤白、栝蒌、半夏、黄连等组成，经过药学研究进行提取，工艺经正交试验优化，并采用喷雾干燥、干法制粒等新工艺制成胶囊（专利产品，专利号：ZL02160139.9，规格：0.35g・粒-1)，具有解痉平喘、止咳化痰、抗菌消炎等作用。本实验研究表明，FFXBC能有效降低MCT诱导的HP模型大鼠肺动脉压。其作用机制可能是通过减少ET、TNFα产生，减轻MCT引起的炎症反应，抑制肺小动脉、右心室肥厚，改善其重构，提示FFXBC将是防治COPD HP的很有前途的中药，值得深入研究。

    [文献]

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