北五味子中多糖含量的测定

                     作者：谭晓虹 王治宝 李如章 

【摘要】  目的：建立测定北五味子中多糖含量的方法。方法：采用比色法测定北五味子中多糖含量。结果：测得北五味子中多糖含量为6.57%,平均回收率为99.78%,RSD=1.54%。结论：该方法简便，精密度及重现性均较好。

【关键词】  北五味子；多糖；含量测定

    【ABSTRACT】  Objective: To establish a method for the determination of the polysactharide content in Schisandrachinensis Turcz. Methods: The polysaccharide content in Schisandrachinensis Turcz is determined by using the method of comparing colors. Results: The polysachardes content in north Wuweizi is 6.57%, the average recovery rate is 99.78%, and RSD is 1.54%. Conclusion: This method is simple. the result is stable and reproducible. So the result is satisfactory.

    【KEY WORDS】  Schisandrachinensis turcz;Polysaccharide content;Determination of the content

    北五味子（Schisandrachinensis Turcz）是木兰科植物五味子的干燥成熟果实，是中医常用药材之一，具有敛肺、滋肾、生津、收汗、涩精之功效。药理研究证实五味子对中枢神经系统、呼吸系统均有兴奋作用，亦能促进肝糖原异生，加快肝糖原分解，在神经衰弱、肝炎等的药物中应用十分广泛。五味子有南北之分，据《本草纲目》记载“五味子南产者红，北产者黑，入滋补药，必用北者为良”，北五味子的化学成分主要为五味子木脂素、挥发油、五味子醇、多糖等[1]。本文采用苯酚—硫酸法测定北五味子中多糖的含量，得到满意的结果。

    1  仪器与药品

    北五味子购于张家口市药材公司经鉴定为北五味子，其它试剂均为国产分析纯

    UV?752分光光度计（上海第三仪器厂）

    GOA型电热真空干燥箱（天津东郊机械加工厂）

    RE?52A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）

    2  方法与结果

    2.1  葡萄糖标准溶液的配制  精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖25.18mg，用蒸馏水溶解并定容到250ml即为100.72μg/ml的葡萄糖标准溶液。

    2.2  苯酚溶液的配制  取苯酚100g，加铝片0.1g和NaHCO30.05g，蒸馏，收集182℃馏份,称取7.5g，加水150ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。

    2.3  标准曲线绘制  精密量取葡萄糖标准溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6ml置具塞试管中，分别加蒸馏水使成1.0ml，再分别加入5%苯酚溶液1.0ml，摇匀，然后加浓H2SO45.0ml，充分摇匀，于室温下放置5min，置水浴中加热15min，取出冷却至室温。另以蒸馏水同上操作为空白对照，在490nm处测定吸光度，绘制标准曲线，建立回归方程：A=0.06781C+0.00620471，r=0.9989。

    2.4  多糖的提取及精制  北五味子粉碎后，称取500g，用清水洗净，加水4500ｍl，微沸煎煮1h，过滤，滤渣加水2000ｍl，煎煮1h，过滤，合并提取液，加热浓缩至300ｍl。加入乙醇使乙醇含量为80%放置12h，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮洗涤。得到棕色粗多糖。将粗多糖溶于水，用Seveg法除去蛋白，加入0.1%活性炭脱色，抽滤，滤液加入乙醇使溶液含乙醇达80%，静置过夜，抽滤，残渣用无水乙醇、丙酮反复洗涤，真空干燥，即得精制北五味子多糖。

    2.5  换算因子测定  精确称取60℃干燥恒重的五味子多糖20mg，加水溶解后容量瓶中定容在100ml，摇匀，作为多糖储备液。精确量取多糖储备液0.20ml，加水至1.00ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸光度值，根据标准曲线浓度。按下式计算换算因子：f=W/CD式中：W为多糖重量(μg)，C为测试液中据标准曲线计算得到的单糖浓度(μg·ml-1)，D为多糖的稀释因子，测得f=1.691（n=6）。

    2.6  样品含量的测定  精密称取五味子粉末200mg，用80%乙醇浸泡过夜，再于索氏提取器中用80%乙醇回流2h，抽滤，弃去滤液，残渣继续以蒸馏水回流提取2h，抽滤，滤液反复洗至250ml容量瓶中，定容，摇匀成为样品液。测定时，精密吸取样品液1.00ml，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，按下式计算多糖含量（以粗多糖计）：多糖含量%=CDf×100/W。式中：C为样品溶液的葡萄糖的浓度(μg·ml-1)，D为样品溶液的稀释因子，f为换算因子，W为样品的重量(μg)，测得结果为6.57%。2005年12月谭晓虹等：北五味子中多糖含量的测定表1  样品中多糖的含量

    2.7  回收率测定  精密吸取样品液0.5ml（6份）再分别精密加入不同量的标准溶液，依样品测定方法测定吸光度，计算回收率平均值为99.78%，RSD=1.54%。表2  回收率试验

    3  讨论

    3.1  实验结果表明，北五味子多糖含量为6.57%，比报道的稍低[2]，这可能与采用的提取方法和产地，采收季节等因素有关。

    3.2  硫酸—苯酚法测定多糖含量，方法简便易行，重现性好。

    3.3  五味子粗多糖的初步药理研究表明[3]，五味子粗多糖能明显提高小鼠的耐缺氧能力，具有抗疲劳作用，亦能使正常小鼠胸腺和脾脏的重量增加。说明五味子粗多糖能提高机体对环境的适应能力和防御能力。而北五味子多糖含量较高，这可能是北五味子药效较优的原因之一，但是北五味子多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究。

【文献】
  1 应国清，俞志明，单剑峰，等．北五味子有效组分的研究进展[J]．河南中医，2005，25（6）：84

2 徐世忱，李广全，孙莹．北五味子粗多糖的提取与成分分析[J]．吉林医药，1992，（4）：15?18

3 于晓凤，睢大员，吕忠智．五味子粗多糖的初步药理研究[J]．白求恩医科大学学报，1995，21(2)：147?148