紫杉醇埋植剂对小鼠H22肝癌细胞淋巴结转移的治疗作用

【摘要】  目的:对比研究紫杉醇注射液和紫杉醇埋植剂对小鼠H22肝癌细胞淋巴结转移的作用。方法：将小鼠随机分为无治疗组、空白埋植剂组、紫杉醇注射液组和紫杉醇埋植剂组。治疗12 d，各组一半小鼠取淋巴结称质量并行组织学病理检查，另一半取淋巴结制成无菌匀浆，接种于正常小鼠的腹腔，进行生存分析。结果：无治疗组小鼠淋巴结质量为（96.9±16.4）mg，空白埋植剂组为（95.4±13.6）mg，紫杉醇注射液组为（78.4±14.2）mg，紫杉醇埋植剂组为（32.3±9.4）mg。无治疗组半数生存期为15 d，空白埋植剂组为15.5 d，紫杉醇注射液组为23.5 d，紫杉醇埋植剂组为28 d。结论：紫杉醇埋植剂对淋巴结转移性肿瘤有较好的疗效。

【关键词】  紫杉醇 埋植剂 淋巴道转移 化学治疗 肿瘤

    淋巴结转移是恶性肿瘤常见转移途径，但常规剂型的化疗药物给药后不易转运至淋巴结，治疗效果常常不理想，并且易导致严重的全身不良反应。紫杉醇是具有独特抗肿瘤活性的化疗新药，用紫杉醇类药物治疗卵巢癌和乳腺癌疗效独特，但紫杉醇对淋巴结没有选择性。埋植剂是一种抗癌药物的新剂型，选择有淋巴特异性的载体，可以显著提高淋巴结的药物浓度，从而提高抗癌药物对淋巴结转移性肿瘤的疗效。作者就紫杉醇注射液和紫杉醇埋植剂对小鼠H22肝癌细胞淋巴结转移的治疗结果进行对比研究，探讨紫杉醇埋植剂的淋巴导向性及其对小鼠H22肝癌细胞淋巴结转移性肿瘤的疗效。

    1  材料和方法

    1.1  实验动物

    H22肝癌腹水型荷瘤小鼠购于医学院药物研究所（北京）。昆明种小鼠购于东南大学医学院实验动物中心，雌雄各半，质量20～22 g，由东南大学医学院实验动物中心饲养、管理，各组动物分笼饲养，饮水和饲料来源相同。

    1.2  药物及试剂

    紫杉醇埋植剂由江苏省药物研究所提供，为无菌干制剂，以聚乙二醇为基质，活性炭为载体，每克含紫杉醇10 mg。药物体外溶出参数：t50%为8.5 h，t90%为26.5 h。紫杉醇由中国医学科学院药物研究所协和药厂提供。

    1.3  动物实验

    1.3.1  动物模型的制备  抽取H22肝癌腹水型荷瘤小鼠的腹水接种于昆明种小鼠腹腔，连续接种7代，使瘤细胞在昆明种小鼠体内稳定。选接种后7 d的腹水型荷瘤昆明种小鼠，抽取乳白色黏稠腹水，稀释后调整瘤细胞数为2.5×108 ml-1。将瘤细胞悬液接种于小鼠左后肢爪垫皮下组织，接种容积为0.04 ml，接种完成后剩余的瘤细胞悬液在光镜下计数，活瘤细胞数>95%。共接种80只小鼠，经病理证实为小鼠H22肝癌细胞淋巴结转移。

    1.3.2  治疗实验一  选取合格小鼠动物模型40只，随机分成4组：A组，无治疗组；B组，空白埋植剂组，无紫杉醇，其他成分相同，制备工艺相同，瘤床部位埋植给药，每只10 mg；C组，紫杉醇注射液组，尾静脉注射，紫杉醇用量5 mg·kg-1；D组，紫杉醇埋植剂组，瘤床部位埋植给药，每只10 mg（紫杉醇用量5 mg·kg-1）。治疗12 d后处死全部动物，取左腹股沟淋巴结称质量。

    1.3.3  治疗实验二  选取合格小鼠动物模型40只，按上述分组和给药方案，治疗12 d后处死全部动物，无菌条件下取出左侧腹股沟淋巴结，用玻璃匀浆器制成匀浆。另选取正常雄性昆明小鼠40只，体质量20～22 g，分成4组，分别将上述4组制成的匀浆接种在正常小鼠的腹腔内，观察60 d，记录受体小鼠的生存时间。

    1.4  统计学处理

    应用SAS 8.0统计软件，用对数秩检验方法检验统计学意义，每组小鼠半数生存期，并绘制生存曲线图。

    2  结    果

    2.1  治疗实验一

    治疗后，无治疗组小鼠左腹股沟转移淋巴结质量为（96.9±16.4）mg，空白埋植剂组为（95.4±13.6）mg，紫杉醇注射液组为（78.4±14.2）mg，紫杉醇埋植剂组为（32.3±9.40）mg。方差分析显示，F=19.62，P<0.001。结果表明，紫杉醇埋植剂组及紫杉醇注射液组与无治疗组相比均有显著性差异（P<0.05），空白埋植剂组与无治疗组相比无显著性差异（P>0.05）。紫杉醇埋植剂组与紫杉醇注射液组相比也有显著性差异（P<0.05），前者淋巴结平均质量要小于后者。实验过程中，小鼠局部和全身未见明显的毒副反应发生。

    2.2  治疗实验二

    不同治疗组经过治疗后的淋巴结匀浆接种于正常小鼠腹腔，无治疗组半数生存期为15 d，空白埋植剂组为15.5 d，紫杉醇注射液组为23.5 d，紫杉醇埋植剂为28 d。各组小鼠的生存曲线见图1。结果表明，紫杉醇埋植剂组半数生存时间明显延长，通过对数秩检验（log?rank test），其生存曲线相对于无治疗组、空白埋植剂组有显著差异（P<0.05），与紫杉醇注射液组相比也有显著差异（P<0.05）。之后，从生存曲线图目测判断、半数生存期比较来检验各组效应的大小，无治疗组和空白埋植剂组的生存曲线交错延伸，生存时间最大值仅20 d，而紫杉醇埋植剂组和这两组的生存曲线明显分离，其生存时间明显延长，最大值在35 d，且紫杉醇注射液组的生存曲线与紫杉醇埋植剂组差别亦较明显，证实紫杉醇埋植剂组的治疗效果与其他各组有显著差异。

    3  讨    论

    为了提高化疗药物对肿瘤细胞的选择性，20世纪80年代出现了一些恶性肿瘤的新思路，即针对肿瘤“靶”而设计的导向治疗，这给肿瘤淋巴结转移的化疗提供一条新的思路。所谓肿瘤的导向治疗是指借助高度特异性的亲肿瘤物质作为载体，以有细胞毒性的物质，如化学物质等作为弹头，依靠载体的特异性和对肿瘤的亲合力，将弹头物质尽量集中于肿瘤细胞，籍此发挥稳定的杀伤作用而对宿主毒性甚小的治疗方法[1]。其导向载体分为抗体类和非抗体类，非抗体类包括脂质体和微球等。目前，肿瘤的导向治疗已取得了许多进展[2?3]。

    埋植剂是一种新的药物剂型，和其它常规的给药方法相比，埋植给药系统有其独特的优点。第一，缓释作用。其释药期可长达数月甚至数年，避免了频繁用药的麻烦。第二，恒释作用。系统中药物常呈恒速释放，可较平稳地维持血药浓度，达到长期维持有效治疗目的。第三，还可以避免首过效应，提高生物利用度[4]。这种给药系统在避孕技术中的应用较为成熟，其中以Norplant?Ⅱ为代表在临床应用中取得了较为理想的效果[5]。在治疗肿瘤方面，人们对埋植剂治疗局部肿瘤进行了较多的探索[6?8]，而对淋巴结转移性肿瘤的治疗尚未见报道。

    我们使用的紫杉醇埋植剂是以聚乙二醇为基质、活性炭为载体制备，对比研究紫杉醇注射液和紫杉醇埋植剂对小鼠H22肝癌细胞淋巴结转移的治疗作用。结果显示，不论是从淋巴结转移肿瘤的质量，还是从组织病中肿瘤细胞侵犯淋巴结的范围来比较，紫杉醇埋植剂对淋巴结转移性肿瘤的治疗较之空白对照组均有显著性的差异，与其他治疗组相比也明显好于后者。而经过治疗后的淋巴结转移肿瘤制成匀浆后接种正常小鼠的生存分析更是从统计学意义、生存曲线图目测判断和半数生存期比较等方面证明了紫杉醇埋植剂较其它剂型的优越性。紫杉醇埋植剂具有良好的淋巴导向性和缓释性，与活性炭载体有关。活性炭具有良好的淋巴导向性和很强的吸附性已被证实[9?10]，利用活性炭这一特性将紫杉醇导入淋巴结，而活性炭微粒吸附的抗癌药物浓度与其周围的抗癌药物浓度之间具有动态平衡，这一特性使局部癌组织中的抗癌药物长期维持较高浓度，而血药浓度却很低，有利于杀死肿瘤细胞，而较少损伤正常组织。

    紫杉醇埋植剂利用其载体的导向作用，将大量的抗癌药选择性地导入淋巴系统，既可提高区域淋巴结内的药物浓度，延长其作用时间，又使进入血液循环的药物减少，降低毒副作用。它解决了常规剂型的化疗药物不易被转运至淋巴结的问题，为淋巴结转移性肿瘤的治疗提供了新的途径。将紫杉醇埋植剂埋植于已切除原发灶的部位，可有效地防治肿瘤的局部复发和其所引流淋巴结的转移，方法简单易行，从实验过程来看小鼠局部和全身无明显的毒副反应发生，是一种安全可靠的治疗方法，因此其前景令人鼓舞。

【】
  [1]汤钊猷.肿瘤学[M].2版.上海：上海医科大学出版社，2000：533.

[2]SHARMA A，MAYHEW E，BOLCSAK L，et al.Activity of paclitaxel liposome formulations against human ovarian tumor xenografts[J].Int J Cancer，1997，71(1)：103?107.

[3]方瑾，王芸庆，宋今丹.大肠癌免疫脂质体导向紫杉醇的实验研究[J].免疫学杂志，1998，14(3)：198?200.

[4]陆彬.药物新剂型与新技术[M].北京：人民卫生出版社，1998：502?503.

[5]杜明昆，邵庆翔，周晓飞，等.长期使用Norplant皮下埋植剂妇女血清左炔诺孕酮水平的测定[J].中华产科杂志，1999，34(6)：363?365.

[6]VOGELHUBER W，SPRUB T，BERNHARDT G，et al.Efficacy of BCNU and paclitaxel loaded subcutaneous implants in the interstitisl chemotherapy of U?87MG human glioblastoma xenografts[J].Int J Pharm，2002，238(12)：111?121.

[7]FUNG L K，EWEND M G，SILLS A，et al.Pharmacokinetics of interstitial delivery of carmustine，4?hydroxy?cyclophosphamide and paclitaxel from a biodegradable polymer implant in the monkey brain[J].Cancer Res，1998，58(4)：672?684.

[8]PARK E S，MANIAR M，SHAH J C，et al.Biodegradable polyanhydride devices of cefazolin sodium，bupivacaine，and taxol for local drug delivery：preparation and kinetics snd mechanism of in vitro release[J].J Control Rel，1998，52(1?2)：179?189.

[9]SALALURA C，TAKAKHASHI T，SAWAI K，et al.Enhancement of therapeutic efficacy of aclarubicin against lymph node metastases using a new dosage form：aclarubicin adsorbed on activated carbon particles[J].Anticancer Drugs，1992，3(3)：233?236.

[10]刘文志，王舒宝，张靖.应用自制微粒子活性炭指导胃癌淋巴结清除术[J].中国肿瘤临床，2000，27(9)：690?691.