野生型和栽培型土三七总酚酸的含量比较
作者：付煜荣 张红芬 张小红
【摘要】 河北省技术研究与指导计划项目（编号：06276431）；河北省厅科学研究计划项目（编号：2004403）【摘要】 目的：比较张家口产野生型和人工栽培型土三七药材中总酚酸的含量，并分析两者是否有显著性差异。方法：采用分光光度法，以没食子酸为对照品，以0.6%FeCl3?0.9%K3[Fe(CN)6]（1∶0.9）混合溶液为显色剂，在720 nm波长处进行测定。结果：总酚酸分析的线性范围为0.228μg·mL-1～1.14μg·mL-1（r=0.9993），平均回收率为96.6%，RSD为1.9%（n=6）。野生型土三七中总酚酸含量为78.3 mg·g-1,RSD为5.5%（n=5）。人工栽培型土三七中总酚酸含量为82.4 mg·g-1，RSD为2.5%（n=5）。结论：野生型土三七和人工栽培型土三七中总酚酸含量无显著性差异。
【关键词】 景天三七 总酚酸 分光光度法
【ABSTRACT】 Objective:To analyze the content of total phenolic acid in wild and planted type Sedum Aizoon L.which were collected from Zhangjiakou.Methods:Total phenolic acid was analyzed by spectrophotometry at 720nm.The colour?developing agent was the mixture solution of 0.6% FeCl3? 0.9% K3[Fe(CN)6](1∶0.9). Results: Calibration curve was constructed in the range of 0.228μg·mL-1～1.14 μg·mL-1 (r=0.9993)for total phenolic acid.The average recovery was 96.6% for total phenolic acid and the RSD of the methods was 1.9%(n=6).The average contents were 78.3mg·g-1 for wild type（n=5)and 82.4mg·g-1 for planted type（n=5).The RSDs of the two methods were 5.5% and 2.5% respectively.Conclusion:Dealt with statistics,the determination of total phenolic acid had no significant difference between wild type and planted type Sedum Aizoon L.
【KEY WORDS】 Sedum Aizoon L.,Total Phenolic Acid,Spectrophotometry
土三七（Sedum Aizoon L.）为景天科景天属植物，别名景天三七、费菜、血散、养心草；性平，味甘，微酸，无毒，有凉血止血、散瘀、消炎、安神、镇痛等作用。该药含有没食子酸等多种酚酸和谷甾醇等成分[1,2]，试验证明，能缩短动物的凝血时间，对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌均有抑制作用。本品还有明显的促进血液循环、化瘀降压作用,可防治心脏病、高血压、高血脂、血管硬化等。我们测定了野生型和人工栽培型土三七中总酚酸的含量，并比较了其含量差异。
1 材料与方法
1.1 仪器
721分光光度仪（上海），A/D分析天平（1/10万，日本），万分之一天平（上海）。
1.2 试药
野生土三七采自河北省张家口市区，由王德富老师鉴定。人工栽培型土三七由野生型土三七的叶经组织培养，再移入土壤栽培而成[3]。没食子酸对照品购自生物制品检定所。其余试剂均为分析纯，试验用水为二次去离子水。
1.2 实验方法
1.2.1 分析方法
取适量待测样品置于25mL比色管，加无水乙醇至5mL，加0.3%十二烷基磺酸钠2mL及0.6% FeCl3?0.9% K3[Fe(CN)6]（1∶0.9）混合溶液1mL，混匀，在暗处放置5min，加0.1mol·mL-1 HCl至刻度，混匀，在暗处放置20min。 用721分光光度计，以显色剂为空白，在720nm波长处测定吸光度A，根据标准曲线含量[4,5]。
1.2.2 对照品溶液制备及标准曲线的绘制
取一定量没食子酸对照品，精密称定，用乙醇溶解，定容，配成22.8μg·mL-1没食子酸储备液。 分别取对照品溶液0.25mL，0.50mL，0.75mL，1.00mL，1.25mL，1.50mL置于25mL容量瓶，同“1.2.1分析方法”项下进行显色和测定，记录吸光度A，以A为纵坐标，以含量C为横坐标，作图，得没食子酸标准曲线。经统计学处理，得回归方程为：A=0.5579C+0.0888，r =0.9993（C：μg·mL-1）。结果表明没食子酸含量在0.228μg·mL-1～1.14μg·mL-1范围内，呈现良好线性关系。
1.2.3 供试液的制备
将野生型和人工栽培型土三七干燥粉碎，取粉末各0.2g，精密称定，分别加入15mL水浸泡过夜，于沸水浴中提取三次（40min，30min，10min）。吸取上清液，合并三次提取液，定容至50.00mL，摇匀备用。
2008年10月付煜荣等：野生型和栽培型土三七总酚酸的含量比较第5期2008年10月河北北方学院学报（医学版）第5期
2 结果
2.1 含量分析
取各提取液50μL，同“1.2.1分析方法”项下进行显色和测定，并根据标准曲线计算总酚酸含量，结果见表1。表1 样品测定结果注:t检验，与野生型土三七相比*P>0.05
2.2 精密度试验
取0.2g栽培型土三七粉末，精密称定，按“1.2.3供试液的制备”项下进行提取，同“1.2.1分析方法”项下进行显色和测定，记录吸光度A，吸光度A的RSD为0.17%（n＝6）。
2.3 重现性试验
取0.2g同一批药材5 份，精密称定，按“1.2.3供试液的制备”项下进行提取，同“1.2.1分析方法”项下进行显色和测定，记录吸光度A，经数据处理，得样品含量，RSD为2.5%（n＝5）。
2.4 稳定性试验
取一份人工栽培型土三七药材，精密称定，按“1.2.3供试液的制备”项下进行提取，同“1.2.1分析方法” 项下进行显色和测定，每隔5min测定一次A。经数据处理得总酚酸含量，含量的RSD为0.74%。结果表明样品在70min内稳定。
2.5 回收率试验
取已知总酚酸含量的人工栽培型土三七6份，精密称定，分别加入高、中、低量的没食子酸对照品，按“1.2.3”项下制得供试液后，按“1.2.1”项下进行显色和含量测定，计算没食子酸的回收率，平均回收率为96.6%，RSD为1.9%（n=6），结果见表2。表2 回收率测定结果（n=6）
序号样品重（g）样品含量（mg）加入量（mg）测得量（mg）回收率（%)XRSD（%)10.09828.2510.918.695.020.09918.3210.818.594.230.10088.468.0716.295.896.61.940.09948.348.5016.798.350.10058.446.0414.498.760.10008.406.5614.897.6
3 讨论
3.1 土三七的营养及药用价值较为广泛，试验证明，能缩短动物的凝血时间，对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌均有抑制作用。本品还可防治心脏病、高血压、高血脂、血管硬化；用鲜全草炖猪心可神经衰弱、失眠、烦躁不安等[6] 。此外，还可采用景天三七鲜草治疗老年中风，且种植容易、产量大、收益高、见效快，有广阔的应用前景，但是，目前研究较少，一定程度上限制了它的应用，故有待于进一步深入探究。
3.2 本文分析了野生型和人工栽培型土三七的总酚酸含量，经统计学处理，两种来源药材的均值无显著性差异（P>0.05）。
3.3 在试验过程中发现，显色剂不稳定，放置时间超过一天已不能使用，应在每次实验前临时配置，否则，对实验结果会造成较大影响。
3.4 有报道注射用丹参总酚酸对缺血性中风瘀血阻络证确有较好疗效[7]，注射用丹参多酚酸盐治疗冠心病心绞痛（心血瘀阻证）[8]。有关土三七中总酚酸的药理作用尚未见报道，有待于进一步研究。本文测定栽培型可代替野生型土三七药用，故可用栽培型土三七作后续研究。
土三七含多种有效化学成分，因此，对野生型和人工栽培型有效成分的比较，对于扩大其药用价值,保护日趋减少的野生资源具有重要意义。
【】
1 国家医药管理局中草药情报中心站.植物药有效成分手册[M].北京：人民卫生出版社,1986.476
2 谢宗万.中药材品种论述·上册[M].第2版.上海:上海技术出版社,1989.79?80
3 芮和恺，顾慧芬，忻晓君,等.四种药用植物的组织培养简报[J].中药材，1987，10（5）：11
4 刘瑞玲，李维维，杨维嘉.丹参及其注射液中水溶性总酚酸的测定[J].药物分析杂志，1983，3（3）：163
5 付煜荣，张万明，陈桂敏,等.景天三七中没食子酸和总分酸含量测定[J].中成药，2006,28（7）：1016?1018
6 车苏容,郭素华,竺叶青.景天三七的药学研究进展[J].福建中医药,2004,35(3)：51?53
7 韩景献，韩力.注射用丹参总酚酸治疗缺血性中风瘀血阻络证临床研究[J].天津中医药,2005,22(4):287
8 苗阳，高铸烨，徐凤芹,等.丹参多酚酸盐治疗冠心病心绞痛（心血瘀阻证)的临床观察[J].中药研究与信息，2005，7(10):23
