E?cadherin在涎腺粘液表皮样癌的表达及其与浸润转移的关系
作者：李秀娟 王淑强 赵志刚 赵立辉 李鹏
【摘要】 目的：细胞粘附功能下降是恶性肿瘤的关键因素，为探讨E?cadherin在涎腺粘液表皮样癌发病机制中的作用，我们研究了E?cadherin在涎腺粘液表皮样癌的表达情况，并分析其与临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学S?P法对46例涎腺粘液表皮样癌进行E?cadherin的检测。结果：E?cadherin在涎腺粘液表皮样癌中的表达强弱与癌组织的分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)，而与患者的性别、年龄无关(P>0.05)。结论：E?cadherin表达与涎腺粘液表皮样癌的浸润转移有关，可作为一种新的肿瘤标志物，其表达对判断预后有一定的价值。
【关键词】 E钙粘着糖蛋白；涎腺癌；癌/粘液表皮样；免疫组织化学
【ABSTRACT】 Objective：To examine the expression of E?cadherin in mucoepidetr moid carcinoma and analyze the relationship of tumor characteristics.For altered cell adhesion,it has a critical role in the development of epithelial cancers.Methods：The expression of E?cadherin proteins was detected by immunohistochemistry S?P method in 46 cases with mucoepidermoid carcinoma in salivary gland.Results：The expression of E?cadherin correlated well with the degree of differentiation and mucoepidermoid carcinoma in salivary gland(P<0.05).E?cadherin had no relationship with age and sex(P>0.05).Conclusion： E?cadherin is associated with invasion and metastasis in mucoepidermoid carcinoma,which suggests E?cadherin is a new marking of carcinoma.Measurement of E?cadherin expression is valuable in evaluating the prognosis of mucoepidermoid carcinoma.
【KEY WORDS】 E?cadherin；Salivary Gland Cancer；Carcinoma/Mucoepidermoid;Immunohistochemistry
癌细胞分离被认为是导致恶性肿瘤浸润及转移复杂过程中的第一步。在细胞间粘附因子中，有几个重要的分子已被证实，其中包括钙依赖分子“E钙粘着糖蛋白（E?cadherin）”[1]，它被认为在细胞粘附过程中起决定作用。根据粘附蛋白的结构和功能，它被分成几个亚型，它不仅促进细胞间的相互粘附，而且还能维持正常上皮细胞的形态特征[2]，它在人类多种恶性肿瘤细胞中表达减弱甚至消失。钙粘蛋白的存在与恶性肿瘤的分化程度及淋巴结转移有关，本实验就是通过免疫组化方法来研究E?cadherin在涎腺粘液表皮样癌中的表达与涎腺粘液表皮样癌的分化程度及淋巴结转移的关系。
1 材料与方法
1.1 材料 收集1990～2002年来我院首次手术的涎腺粘液表皮样癌46例，手术切除标本46例，其中男性25例，女性21例；发病高峰为40～60岁，中位年龄49岁；有淋巴结转移的9例，无淋巴结转移的37例。对手术切除的46例标本进行取材，经10%中性甲醛溶液固定，梯度酒精脱水，石蜡包埋切片厚度4μm，HE染色，重新光镜下观察确诊。
1.2 试剂 采用武汉博士德生物工程工司提供的鼠抗人E?cadherin单克隆抗体。S?P试剂盒，DAB显示剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 方法 采用S?P免疫组织化学方法，染色过程严格按试剂盒规范程序进行，切片常规脱蜡至水，经0.3%过氧化氢10min，枸橼酸盐缓冲液加热抗原修复20min，正常羊血清封闭10min。吸去多余血清后滴加第一抗体（鼠抗人E?cadherin单克隆抗体）4℃孵育过夜，清洗后滴加第二抗体，37℃30min，清洗后滴加第三抗体37℃30min，DAB显色，用已知免疫组化染色阳性切片做阳性对照，以PBS代替第一抗体做阴性对照。
1.4 判断标准 光镜下观察E?cadherin阳性物质分布于涎腺粘液表皮样癌细胞膜上，呈棕黄色颗粒状，每张切片取10个高倍镜视野并计细胞数。阳性细胞数<10%为（-），阳性细胞数10%～25%为（+），阳性细胞数25%～75%为（++），阳性细胞数>75%为（+++）。
1.5 统计学处理 应用SPSS11.0统计软件进行统计分析，组间比较采用χ２检验，当P<0.05时认为差异具有显著性。
2 结果
E?cadherin表达与涎腺粘液表皮样癌病理指标之间的关系（见表1）。E?cadherin在涎腺粘液表皮样癌中表达强弱与癌组织的分化程度及淋巴结转移有关（P<0.05），而与患者的性别、年龄无关（P>0.05）。表1 E?cadherin表达与涎腺粘液表皮样癌病理指标之间的关系 注：△组间比较P<0.05。
3 讨论
上皮型E?cadherin是近年研究最深入，也是最重要的一类E?cadherin，它主要存在于人的上皮细胞膜，是维护上皮细胞形态和组织结构完整性的重要分子。E?cadherin是相对分子量为1.2×105钙依赖性跨膜糖蛋白，能介导同种上皮互相粘附，基因定位于16号染色体。人类E?cadherin基因组cDNA长达100kb，含16个外显子，于1995年由Berx[3]首次克隆。
E?cadherin基因是一个重要的肿瘤转移抑制基因，该基因突变或该基因启动因子(promoter)区的高度甲基化[4]是上皮细胞E?cadherin表达下降、丧失或分布异常从而导致上皮细胞获得去分化和高度侵袭性的首要环节。
癌的发生和侵袭转移是一个复杂多步骤的连续过程。首先在致癌因子诱发下细胞生长异常、分化失控、原发灶形成，然后在游动因子作用下，癌细胞间粘附蛋白缺失，导致细胞间连续紊乱，细胞互相分离，粘着于基底膜，降解并浸出基底膜，继而发生侵袭转移[5]。通过实验观察癌细胞生长过程中上皮细胞E?cadherin的变化发现，涎腺粘液表皮样癌细胞的侵袭转移潜能与上皮细胞E?cadherin表达量成反比，E?cadherin表达量水平高者比水平低者的侵袭转移发现晚，用上皮细胞E?cadherin抗体封闭其受体可降低癌细胞的侵袭能力。不少报道证实癌分化程度降低与E?cadherin表达降低之间存在显著的相关性[6]。大量研究证据表明E?cadherin减少丧失使细胞间粘附减弱，癌细胞易分开而脱离原发灶，这是癌浸润的首要环节。癌细胞一旦获得转移的其它必要条件，如E?cadherin粘附功能受抑制使尿激酶型纤维蛋白溶酶原活性因子分泌，导致细胞间质蛋白的水解，癌细胞就可以进入高浸润转移状态[7]。
细胞间粘附分子的缺失，是许多肿瘤发生、过程中的常见现象。在实验中发现，E?cadherin在粘液表皮样癌的表达位于细胞膜上，这也反映这种粘附分子的正常功能定位。粘液表皮样癌组织中普遍存在基因的失活和表达缺陷，致使维持细胞间的粘附功能丧失，从而导致粘液表皮样癌细胞增殖、分化失控，转移能力的增强 。研究表明，保留较多来源上皮形态的分化较好的粘液表皮样癌E?cadherin表达量多，而且较少来源上皮形态和分化较差的粘液表皮样癌E?cadherin表达量较少。E?cadherin在高分化癌组织中呈阳性或强阳性表达，而在低分化癌组织中的表达明显下降，高分化癌和低分化癌E?cadherin表达有显著性差异，表明癌组织的分化依赖于E?cadherin维持[8]。本组资料还显示，E?cadherin表达与涎腺粘液表皮样癌患者的年龄、性别无关(P>0.05)，无显著性差异。
本组46例涎腺粘液表皮样癌组织中，有淋巴结转移组9例，无淋巴结转移37例，无转移组E?cadherin高表达，无转移组E?cadherin表达显著高于有淋巴结转移组(P<0.05)，有显著性差异，与报导一致[9，10]。提示E?cadherin表达与涎腺粘液表皮样癌淋巴结转移有关。
故检测涎腺粘液表皮样癌组织中的E?cadherin表达对判断肿瘤的恶性程度，预测淋巴结转移趋势，指导临床方案，以及改善患者预后均有重要意义。
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