慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3表达及与甾体激素关系的研究

【摘要】  【目的】研究慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3的表达，并分析其体内甾体激素与整合素αvβ3表达的相关性。【方法】选取25例慢性盆腔炎性不孕症患者，同时选择15例具有正常生育能力的育龄妇女，分别设为实验组和对照组，采用流式细胞荧光标记测量技术对子宫内膜中整合素αvβ3的表达进行定量检测。在同期内取血清检测实验组及对照组体内雌孕激素水平，分析甾体激素与子宫内膜整合素αvβ3表达在植入窗口期（种植期）的相关性。【结果】（1） 两组黄体中期血清雌二醇(E2)水平及雌二醇/孕酮(E2/P)比值比较均无显著性差异(P＞0.05 )，而血清P水平比较有显著性差异（P＜0.05）。（2） 两组黄体中期（分泌中期）子宫内膜整合素αvβ3表达比较差异有显著性意义（P＜0.05）。（3）雌激素与子宫内膜整合素αvβ3无相关性，而孕激素与整合素αvβ3显示正相关性，孕激素的表达水平越高，整合素αvβ3表达水平相应也越高。【结论】整合素αvβ3在正常育龄妇女子宫内膜种植窗期的表达高于慢性盆腔炎性不孕患者；整合素的表达水平与卵巢分泌的甾体激素孕激素的表达呈一致性，孕激素影响着整合素αvβ3表达的水平。

【关键词】  子宫附件炎； 不育，女性； 整合素αvβ3； 流式细胞计量术

    整合素是粘附分子五大家庭成员之一,主要介导细胞与细胞外基质（ECM）(如纤粘连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白等)以及细胞与细胞的粘附,使细胞得以附着。组织的成形及分化主要依靠细胞与细胞及细胞与ECM相互作用的协调。整合素参与受精、植入、胚胎发育、免疫应答、创伤愈合、恶性肿瘤转移等一系列重要生理和病理过程。

    已发现整合素在胚胎及子宫内膜上均有表达,且有时空分布特征。一些研究证明,整合素在女性月经周期子宫内膜的表达和分布呈周期性特征,尤其是整合素α4β1、αvβ3的表达与"着床窗"开放时间相吻合,且对于整合素表达方式的研究进一步证实了整合素可以被公认为评价子宫内膜容受性的良好指标，特别是αvβ3在子宫内膜的腔上皮和腺上皮中均有表达，并高度显现表达于着床期，是更可靠的"植入窗口"开放的标志，它的表达延续至妊娠期。而在黄体功能不足、子宫内膜异位症、多囊卵巢综合征（PCOS）以及输卵管疾病等时常出现异常表达，即多表现为低表达［1-7］。在众多相关的研究中，对于慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3表达的研究却不多，笔者对由慢性盆腔炎引起的不孕患者子宫内膜整合素的表达进行了研究，现将结果报道如下。

    1  资料与方法

    1.1  研究对象  本研究以慢性盆腔炎性不孕患者为研究对象。

    1.1.1  诊断标准  ①符合《中药新药临床研究指导原则》［8］中慢性盆腔炎诊断标准；②育龄妇女婚后有正常性生活，男方生殖功能正常，未避孕同居2年而未能受孕者。

    1.1.2  排除标准  ①年龄在22岁以下或42岁以上者；②先天性生理缺陷或畸形所致不孕；③无排卵所致不孕；④黄体不健所致不孕；⑤经检查证实为子宫内膜异位症、子宫肌腺病、子宫肌瘤、子宫发育不良所致不孕；⑥男方生殖功能异常；⑦近1个月内使用过抗生素或/和3个月内使用激素等药物者；⑧合并有心血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病，精神病患者；⑨不符合纳入标准，或因资料不全等影响结果和统计者。

    1.2  研究指标 

    1.2.1  子宫内膜整合素αvβ3  用REF END026型子宫内膜取样器取月经周期第20～24天（参照既往月经周期及基础体温曲线，即基础体温升高后第7～10天）的子宫内膜组织100～150 mg，经过消化、过滤、洗涤、分离等将组织分离打散成单个细胞后，加入含有免疫荧光染色剂的抗体，采用流式细胞荧光标记测量技术对子宫内膜中整合素αvβ3的表达进行定量检测。

    1.2.2  雌二醇（E2）、孕酮（P）  早晨静脉取血，以酶标法检测。抽血时间选在月经周期第20～24天，即植入窗口期（种植期）。

    1.3  一般资料   实验组：选择广州中医药大学妇科门诊及病房的患者25例（就诊时间为2006年5月至2007年1月），年龄为22～37岁，平均年龄29.12岁；不孕年限为2～10年，平均年限为4年。经检查诊断为慢性盆腔炎性不孕，且性生活正常，其中继发性不孕15例，原发性不孕10例。对照组：选择具有正常生育能力的育龄女性15例，年龄为25～45岁，平均年龄31.67岁，己婚现未妊娠，但有正常生育史。两组月经，基础体温双相；基础内分泌正常；近1个月内未使用过抗生素或/和3个月内未使用激素等药物者。两组年龄构成、月经基本情况见表1。统计结果显示，两组年龄、平均月经周期、平均月经持续天数比较，差异均无显著性意义(P＞0.05 ),具有可比性。

    1.4  统计方法  采用SPSS 12.0统计软件进行数据的统计分析。表1  两组年龄构成、月经基本情况比较

    2  结果

    2.1  两组黄体中期血中E2、P水平及E2/P比值比较  表2结果显示，实验组患者血中E2水平及E2/P比值与对照组比较，差异无显著性意义 (P＞0.05 )，而血中P水平与对照组比较有显著性差异（P＜0.05）。

    2.2  两组分泌中期子宫内膜整合素αvβ3表达比较  表3结果显示，实验组患者分泌中期子宫内膜整合素αvβ3水平较对照组显著性降低（P＜0.05）。表2  两组黄体中期血中E2、P水平和E2/P比值比较 统计方法：t检验;① P＜ 0.05，与对照组比较表3  两组子宫内膜整合素αvβ3表达比较统计方法：t检验;① P＜ 0.05，与对照组比较

    2.3  慢性盆腔炎性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3与雌孕激素的关系  双变量相关分析结果示：雌激素与子宫内膜整合素αvβ3不存在正相关关系(P＞0.05 )，而孕激素与整合素αvβ3存在正相关关系（P＜0.01），即孕激素表达水平越高，整合素αvβ3表达水平相应也越高。

    3  讨论

    慢性盆腔炎性不孕占不孕症妇女的30%～50%。炎症不仅引起输卵管堵塞，而且因瘢痕形成，使输卵管壁僵硬和输卵管周围粘连，输卵管扭曲，改变其与卵巢的关系，影响输卵管的拾卵。目前西医慢性盆腔炎性不孕的方法较多，如抗生素治疗,宫腔注药,输卵管介入复通术,腹腔镜手术,显微外科手术等。尽管通过各种方法力图恢复输卵管的正常解剖结构，但疗效不尽理想，仍有一定比例的患者不能正常受孕，最终求助于体外受精-胚胎移植（IVF?ET）等辅助生殖技术，但目前IVF?ET的成功率仅在20%～30%之间，且流产率高，这可能与患者体内的内环境并没有得到有效的改善有关。受孕者的内环境必须适合胚胎着床、生长发育，才能完成正常的妊娠过程。成功的着床是子宫内膜容受性和胚泡滋养层细胞侵入性同步发育的结果,其中子宫内膜的容受性是胚泡着床的基础。子宫内膜受卵巢激素的周期性调节而发生相应的变化,子宫内膜整合素表达异常使子宫内膜对胚胎的容受性发生了改变而导致不孕。

    本研究发现，正常育龄妇女着床期子宫内膜整合素αvβ3的表达高于慢性盆腔炎性不孕妇女的表达，推测慢性盆腔炎性不孕妇女，除了输卵管解剖结构的异常，还因炎症改变了子宫内膜环境，使子宫内膜局部调节失衡而影响整合素的表达，提示整合素αvβ3在着床期的低表达可能是造成着床障碍而致不孕的原因。Meyer等［9］发现,患有输卵管积水的不孕妇女,在体外受精时,其胚胎移植成功率降低,检测α1β1、α4β1和αvβ33种整合素标记物在子宫内膜着床窗口期的表达时,发现αvβ3较对照组明显减少,而这种影响在患者行手术治疗后大部分可逆转。说明炎症长期存在，可以导致子宫内膜容受性下降，整合素呈现低表达，进一步影响受精卵的着床发育。

    本研究还发现，慢性盆腔炎性不孕患者体内雌激素水平与整合素αvβ3表达无相关性，而孕激素水平与整合素αvβ3的表达却存在正相关性，提示孕激素影响着整合素αvβ3表达的水平，慢性盆腔炎性不孕患者体内孕激素水平的下降可能是导致不孕的一个不容忽视的原因。

    进一步研究希冀通过使用中医药以改善慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3的表达，提高种植窗期子宫内膜的容受性，提高着床率和受孕率。

【】
  ［1］Lessey B A, Damjanovich L, Coutifaris C, et al. Integrin adhesion molecules in the human endometrium:correlation with the normal and abnormal menstrual cycle［J］.J Clin Invest，1992,90（1）：188.

［2］Lessey B A, Castelbaum A J, Buck C A, et al. Further characterization of endometrial integrins during the menstrual cycle and inpregnancy［J］. Fertil Steril,1994,62（3）:497.

［3］Lessey B A，Ilesanmi A O,Lessey M A, et al. Luminal and glandular endometrial epithelium express integrins differentially throughout the menstrual cycle: implications for implantation, contraception, and infertility ［J］.Am J Reprod Immunol, 1996，35(3):195.

［4］Lessey B A, Castelbaum A J. Integrins and implantation in the human［J］. Rev Endocr Metab Disord，2002,3:107.

［5］Lessey B A, Gui Y, Apparao K B C, et al.Heparin?binding EGF-like growth factor (HB?EGF) in the human endometrium: A potential paracrine role during implantation［J］.Mol Reprod Dev，2002，62:446.

［6］Apparao K B C, Murray M J, Fritz M A, et al.Osteopontin and its receptor αvβ3 integrin are coexpressed in the human endometrium during the menstrual cycle but regulated differentially［J］. J Clin Endocrinol Metab，2001,86:4991.

［7］Lessey B A, Castelbaum A J, Sawin S J, et al.Aberrant integrin expression in the endometrium of women with endometriosis［J］. J Clin Endocrinol Metab，1994,79:643.

［8］国家食品药品监督管理局.中药新药临床研究指导原则［S］.北京：医药科技出版社，2002.

［9］Meyer W R, Castelbaum A J, Somkuti S, et al. Hydrosalpinges adversely affect markers of endometrial receptivity［J］. Hum Reprod，1997,12:1393.Relationship Between Endometrial Integrin?αvβ3 Expression and