几种无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响

                           作者：许光明，罗跃，彭延古，雷田香

【摘要】  目的 研究全蝎中无机阳离子对全蝎抗凝活性的影响。方法 以凝血酶时间为指标，分别在全蝎提取液中加入相应不同浓度的无机阳离子，考察其对全蝎抗凝活性的影响。结果 加入无机阳离子后，明显缩短了全蝎的凝血酶时间（Ｐ＜０．０１）。结论 铵离子等无机阳离子对全蝎提取液抗凝活性有明显的影响。

【关键词】  全蝎；抗凝活性；凝血酶时间；无机阳离子

    〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｉｏｎｓ ｉｎ ｓｃｏｒｐｉｎ ｏｎ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｃｏｒｐｉｎ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ ａｓ ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔｓ，ｔｈｅ ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｍｉｘｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｃｏｒｐｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｃｏｒｐｉｎ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔ Ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ ｗａｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ（Ｐ＜０．０１） ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｉｏｎｓ ｊｏｉｎｉｎｇ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Tｈｅ ｉｏｎｓ ａｒｅ ｖｅｒｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｏ ｔｈｅ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｃｏｒｐｉｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ．

    〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 ｓｃｏｒｐｉｎ; ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｎｇ ａｃｔｉｖｅ; ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｔｉｍｅ; ｉｎｏｒｇａｎｉｃ ｉｏｎｓ

    全蝎作为传统的中药材，具有熄风止痉、解毒散结、通络止痛等功效。全蝎除了含蝎毒素、三甲胺、牛磺酸、甜菜碱、胆甾醇、卵磷脂、甘油酯、棕榈酸、硬脂酸、铵盐１７种氨基酸等，还含有Ｃａ、Ｍｇ、 Ｆｅ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｍｎ、Ｐｂ等元素［１，２］１４１５。实验证明全蝎提取液具有明显的抗凝、抗血栓及促纤溶作用［３，１０］。为进一步研究全蝎抗凝活性的影响因素，本文探索了８种无机阳离子（ＮＨ４＋、Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋、Ｆｅ２＋、Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｐｂ２＋）对全蝎抗凝活性的影响，为临床应用提供依据。

    １ 实验材料

    １．１  仪器

    Ｓｔａｒｔ－４半自动四通道血凝仪（法国ｓ１１ＡＧＯ公司）；４３００－Ｐｒｏ紫外分光光度计（瑞士安玛西亚公司）；ＨＲ２８３８型匀浆机（菲利普公司）；移液枪。

    １．２  试药

    全蝎（购自老百姓大药房），凝血酶（上海太阳生物技术有限公司），血浆（自制），生理盐水；ＮＨ４Ｃｌ，ＮａＣｌ，ＣｕＣｌ２，ＣａＣｌ２，ＭｇＣｌ２，ＦｅＣｌ２，ＭｎＣｌ２，ＰｂＣｌ２，ＺｎＣｌ２，无水乙醇，均为分析纯。

    ２ 方法与结果

    ２．１  供试品溶液的制备［３，１０］

    筛去尘渣，称取全蝎５０ ｇ，用８倍量的蒸馏水浸泡过夜，用匀浆机以１０ ０００ ｒ／ｍｉｎ匀浆，然后煎煮３次（均为８倍量蒸馏水），每次３０ ｍｉｎ，过滤，合并滤液，水浴浓缩至含生药１ ｇ／ｍＬ，３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心２０ ｍｉｎ，分别加无水乙醇至６０％的浓度，４ ℃放置过夜，３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心２０ ｍｉｎ，取上清液，水浴浓缩至含生药１ ｇ／ｍＬ溶液，３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心２０ ｍｉｎ，取上清液于４ ℃低温冰箱中保存备用。

    ２．２  凝血酶时间的测定方法［４，５］

    先取凝血酶用生理盐水稀释至一定的倍数，然后取待测血浆（参比血浆）０．１ ｍＬ，３７ ℃保持２ ｍｉｎ，加入３７ ℃预温凝血酶０．１ ｍＬ摇匀，立即开始测定，记录凝固时间，调节凝血酶时间，使空白时间在２０～２２ ｓ。

    ２．３  ＮＨ４＋Cl对全蝎抗凝活性的影响

    分别取ＮＨ４Ｃｌ供试液，加至ＮＨ４＋的浓度为０、０．０１４、０．０２８、０．０４２、０．０５６、０．０７０、０．１４０、０．４２０、０．７００、０．９００、１．１２５、１．５４０ μｍｏｌ／ｍＬ中。加入血浆，全蝎提取液０．１ ｍＬ，凝血酶０．１ ｍＬ，测凝血时间。每个浓度重复测５次。结果如表１。通过对照在全蝎提取液中加入ＮＨ４Ｃｌ前后的凝血时间表明，明显缩短了全蝎提取液的抗凝时间（Ｐ＜０．０１）。

    ２．４  ＮＨ４＋影响全蝎抗凝活性的确认

    由于用ＮＨ４Ｃｌ提供ＮＨ４＋，为了确定其中的Ｃｌ－对全蝎提取液的抗凝活性的是否产生影响，用０．０１、０．１４、１．５４ μｍｏｌ／ｍＬ的ＮＨ４Ｃｌ、ＮａＣｌ溶液，加入全蝎提取液中，按“２．３”项下方法加血浆、凝血酶，测凝血时间，每个浓度重复测５次，取平均值。结果发现ＮａＣｌ溶液对全蝎提取液的抗凝活性无影响，ＮＨ４Ｃｌ明显降低了其抗凝作用，缩短了凝血时间。这表明是ＮＨ４＋而不是Ｃｌ－对全蝎抗凝时间有影响（Ｐ＜０．０１），降低了全蝎抗凝活性。如图１。

    ２．５  ＮＨ４＋自身抗凝作用测定

    为了确定ＮＨ４＋本身是否对血浆有抗凝活性，加入ＮＨ４＋至０、０．０１４、０．０２８、０．０４２、０．０５６、０．０７０、０．１４０ μｍｏｌ／ｍＬ，用生理盐水代替全蝎提取液，其余同方法“２．３”，测凝血时间。发现凝血时间还稍有增加，见表２。经过数理统计分析，ＮＨ４＋并无抗凝作用（Ｐ＞０．０５）。

    ２．６  其他无机元素对全蝎抗凝活性的影响

    按“２．３－２．５”项下的方法，分别探讨了加入Ｐｂ２＋，Ｍｎ２＋，Ｍｇ２＋，Ｃｕ２＋，Ｆｅ２＋，Ｚｎ２＋，Ｃａ２＋至０．１，０．２，０．３，０．４，０．５ μｍｏｌ／ｍＬ后对全蝎抗凝活性的影响，通过测凝血时间，发现在我们的浓度范围，凝血时间都明显缩短了（Ｐ＜０．０１），但不同无机阳离子缩短的程度稍有差别。结果如图２。

    ３ 讨论

    许多中药材里的微量无机阳离子对药材的药性药效有很大的影响。全蝎的主要活性成分是蛋白质、氨基酸等物质，其中蛋白质含量最高［６］，是主要活性物质。全蝎的抗凝作用与其中的蛋白质有关［３］１１。在实验中，所试验的无机阳离子本身无抗凝作用（Ｐ＞０．０５），虽然无机阳离子使凝血时间稍有增加（９ ｓ以内），有轻微的促凝性，但与加到全蝎提取液中缩短的凝血时间（１１７ ｓ以上）相比是很小的。不难看出，不是无机阳离子的轻微促凝作用抵消了全蝎提取液抗凝作用，而是这些无机阳离子加入到全蝎提取液中后与之发生作用使凝血时间缩短，明显降低了其抗凝活性（Ｐ＜０．０１）。

    每克全蝎中含有微克级的Ｃａ、Ｍｇ、 Ｆｅ、Ｃｕ、Ｚｎ、Ｍｎ、Ｐｂ及铵离子等［１］１４１５，这些微量离子的存在可能影响了全蝎毒蛋白结构，从而影响全蝎的药效作用。在实验中，全蝎中加入微克级的这些离子后，全蝎的抗凝作用明显降低了。不同来源的全蝎所含无机阳离子的量有所变化［１］［７］１４１４，实验中加入微量元素的量在其变化范围内，全蝎中含有的无机阳离子很可能会减低全蝎抗凝活性。在实际应用中尽量避免与这些无机阳离子混用，可提高全蝎的抗凝药效。

【】
  ［１］ 张继平，姚 晖，蔡丽云，等．鲜品炮制全蝎与市售全蝎药材宏量和微量元素含量的比较研究． 中成药，２００５（１２）：１ ４１４－１ ４１６．

［２］王 芳，金昌东，王振月，等．全蝎的微量元素分析． 微量元素与健康研究，１９９５，１２（４）：３４－３６．

［３］彭延古，雷田香，付东云，等． 全蝎抗凝活性成分的定性分析． 湖南中医学院学报，２００５，２５（６）：１０－１１．

［４］彭延古，许光明，徐爱良，等． 全蝎抗凝活性成分的研究． 湖南中医学院学报，２００６，２６（１）：１６－１７．

［５］郝晓元，彭延古，肖长江．全蝎提取液对血液凝固的影响．血栓与止血杂志，２００１，７（４）：１５８－１５９．

［６］高广生．全蝎不同炮制品中氨基酸含量分析． 山东医药，２０００，１９（６）：１７－１８．

［７］周祖文． 影响中药微量元素的相关因素研究概况． 微量元素与健康研究，２００２，９（ｌ）：６６－６８．