针药结合干预大鼠局灶性脑缺血组织ＡＴＰ酶活性及能量代谢的研究

                      作者：严文广，谢雪姣，黄政德，司友琴

【摘要】  目的 探讨针药结合干预大鼠局灶性脑缺血组织ＡＴＰ酶活性及能量代谢的研究。方法 将大鼠大脑中动脉阻塞（ＭＣＡＯ）持续脑缺血模型为研究对象，实验设假手术组、模型组、血塞通组、针刺组、针药组，观察术后４、２４、７２ ｈ的神经功能缺损评分，比较各组的脑梗死体积，用分光光度法检测钠钾离子泵（Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ）、钙离子泵（Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ）、镁离子泵（Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ）的活性，用高效液相色谱法检测三磷酸腺苷（ＡＴＰ）、总腺苷酸（ＴＡＮ）的含量。结果 ①各组梗死灶体积明显小于模型组（Ｐ＜０．０１）；针药组梗死灶体积明显小于血塞通组、针刺组（Ｐ＜０．０１）。②除假手术组外，各组动物从４ ｈ至７２ ｈ神经功能缺损评分均有所降低，其中针药组神经功能缺损评分较针刺组低（Ｐ＜０．０１）。③假手术组、治疗组Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性均较模型组高（Ｐ＜０．０５）；针刺组与假手术组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），针药组、血塞通组与假手术组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。④模型组、血塞通组、针刺组ＡＴＰ均较假手术组低（Ｐ＜０．０１），针药组ＡＴＰ值比假手术组低，但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），与模型组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；针药组ＡＴＰ较血塞通组、针刺组高（Ｐ＜０．０５）。模型组、血塞通组ＴＡＮ较假手术组和针药组低（Ｐ＜０．０５）。结论 血塞通组、针刺组、针药组均能改善急性脑缺血大鼠神经功能。针药组优于针刺组和血塞通组。

【关键词】  针刺；血塞通；脑卒中；大鼠；缺血模型；督脉；风府；人中

    〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｙ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｆｏｒ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈａｔ ｏｎ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｉｇｈｔｙ ＳＤ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ５ ｇｒｏｕｐｓ： ｆａｋｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｇｒｏｕｐ， ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ， Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｇｒｏｕｐ， ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ， Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｓｃｏｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｎｅｕｒａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｔ ４ｔｈ， ２４ｔｈ ａｎｄ ７２ｔｈ ｈｏｕｒ ａｆｔｅｒ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ； Ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ； Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｎａ＋， Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ， Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ ａｎｄ Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＡＴＰ， ＡＤＰｍ， ＡＭＰ ａｎｄ ＴＡＮ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ． Ｒｅｓｕｌｔｓ ① Ｔｈｅ ｖｏｌｕｍｅｓ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｎｆａｒｃｔｓ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）． Ｔｈａｔ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）． ② Ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ ｅｘｃｅｐｔ ｆｏｒ ｆａｋｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｇｒｏｕｐ， ｔｈｅ ｎｅｕｒａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｇｒａｄｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｇｒａｄｅｓ ｗｅｒｅ ｒｅｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ４ｔｈ ｔｏ ７２ｔｈ ｈｏｕｒ． Ｔｈｅ ｎｅｕｒａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｇｒａｄｅｓ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）． Ｔｈｅ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｇｒａｄｅｓ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ＋ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０５）． ③ Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｎａ＋， Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ， Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ ａｎｄ Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ ｉｎ ｆａｋｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｇｒｏｕｐｓ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０５）； Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｆａｋｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）； Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｗｉｔｈ ｆａｋｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＞０．０５）． ④ Ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ＡＭＰ ａｎｄ ＡＤＰ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｉｎ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ （Ｐ＞０．０５）； Ｔｈｅ ＡＴＰ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ， Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｆａｋｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０１）， ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｍ ｗａｓ ｎｏｔ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＞０．０５）， ｂｕｔ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）； ＡＴＰ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０５） ａｎｄ ＴＡＮ ｉｎ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｇｒｏｕｐ ｗｅｒｅ ｌｏｗｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｆａｋｅ ｓｕｒｇｅｒｙ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０５）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ａｌｌ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ， ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｉｎｇ ｉｎ ｐｏｉｎｔ Ｒｅｎｚｈｏｎｇ， Ｂａｉｈｕｉ， Ｆｅｎｇｆｕ ａｎｄ Ｄａｚｈｕｉ， Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ａｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｔｏ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｎｅｒｖｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｌｏｃａｌ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｒａｔｓ． Ｔｈｅ ｃｕｒａｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ＋ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｉｓ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ ｏｒ ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ ｏｎｌｙ．

    〔Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ〕 ａｃｕｐｕｎｃｔｕｒｅ； Ｘｕｅｓａｉｔｏｎｇ； ｃｅｒｅｂｒａｌ ｓｔｒｏｋｅ； ｒａｔｓ； ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｍｏｄｅｌ； Ｍｅｒｉｄｉ

    中风病（Ｓｔｒｏｋｅ）是人类三大死亡原因之一，致残率高居第一位［１］。我国中风病的年发病率为１１０～１８０／１０万，每年新发病例约１３０万人，死于中风者近１００万人，患病人数高达５００万人以上，约３／４的幸存者有不同程度的残疾，且近年来发病率有逐步上升的趋势［２］。缺血性脑卒中（ｃｅｒｅｂｒａｌ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ， ＣＩＳ）又称脑梗死，是好发于中老年人的一种常见病，其高发病率、高致残率给社会和家庭带来了沉重的负担。笔者前期研究发现中药血塞通对缺血性脑卒中有较好的治疗效果［３］，为进一步观察其与针刺督脉经穴（人中、百会、风府、大椎）合用的治疗效果，探讨了不同的干预方法对急性局灶性脑缺血模型的调节及可能的作用机制，现将实验方法及结果报道如下。

    １ 材料与方法

    １．１  材料

    １．１．１  动物  ４～６月龄ＳＤ系大鼠８０只，雌雄各半，体质量２００～２５０ ｇ，由湖南中医药大学实验动物中心提供，合格证号：２０－００４。

    １．１．２  药物及试剂  血塞通注射液为黑龙江珍宝岛药业有限公司产品（批号０４０５０５），红四氮唑（ＴＴＣ）、ＡＴＰ酶试剂盒、考马斯亮兰（Ｇ－２５０）、标准牛血清蛋白为武汉博士德生物试剂公司产品（批号分别为０３０１１６、０４０８１６、０３０９１３、０４０７１７）。

    １．１．３  仪器  Ｇ６８０５－Ａ型电针刺激仪（上海医疗仪器厂）；７２１Ｂ型紫外分光光度计（上海仪器三厂）；ＬＣ－６Ａ高效液相色谱仪（日本岛津公司）；ＭＩＡＳ医学图像分析管理系统（北航）；ＡＥＵ－２１０分析天平（湘仪天平仪器厂）。

    １．２  方法

    １．２．１  分组  将大鼠随机分为假手术组、模型组、血塞通组、针刺组、血塞通＋针刺组（下称针药组）共５组，每组１６只，雌雄各半。

    １．２．２  造模  插线制备：插线选用进口高碳素钓鱼线，直径０．２２～０．２６ ｍｍ，长度４０～５０ ｍｍ，并在距前端１５ ｍｍ、２０ ｍｍ处作标记，以液态硅胶处理后置肝素盐水中浸泡备用。

    模型制备：参照Ｋｏｉｚｕｍｉ的方法［４］，制备模型。术后各组大鼠切口严格络合碘消毒，青霉素肌注（每次４万Ｕ／只）抗炎。

    １．２．３  给药方法  各组均从造模后１０ ｍｉｎ开始腹腔注射给药，２次／ｄ，连续３ ｄ。假手术组、模型组和针刺组，每天分２次腹腔注射相应体积生理盐水，血塞通组和针药组腹腔注射血塞通５０ ｍｇ／ｋｇ，剂量按人鼠体表面积折算，均相当于成人临床等效剂量，所有大鼠均单笼饲养，自由饮水摄食。

    １．２．４  针刺方法  根据报道［５］，选用治疗缺血性脑卒中最常使用的督脉经穴（风府、人中、百会、大椎）４个穴位。实验过程中，针刺组、针药组所有大鼠均于造模后１０ ｍｉｎ开始电针治疗，刺法参照《实验针灸学》[6]。以１寸毫针，沿皮斜刺人中、百会、风府、大椎四穴，将针柄分别连接至电针仪的电极上，频率５～１０次／ｓ， 电针刺激强度以肌肉轻微抽动或耳廓轻微抖动为度，一般３～５ Ｖ，时间持续３０ ｍｉｎ，２４ ｈ重复１次，共３次。

    １．２．５  神经功能缺损评分方法  神经功能缺损评分［７］：在造模前、造模后４、２４、４８、７２ ｈ分别进行评分，评分标准为：０分，无神经损伤症状；０．５分，竖毛，轻度运动低下；１分，前肢屈曲，运动障碍；２分，行动不协调，屈曲姿势，旋转运动；３分，偏瘫，不能站立行走；４分，痉挛，嗜睡；５分，死亡。本实验入选实验动物评分均为１～３分。

    １．２．６  脑梗死体积的检测  各组实验动物均取６只，于造模后７２ ｈ造成神经功能缺损后，立即断头取脑，用生理盐水洗净，放入冰箱冷藏５ ｍｉｎ后取出，平放于鼠脑垫上，拿出两片刀片，将其中一片固定一端，另一刀片沿鼠脑垫垂直均匀切片，每片厚２ ｍｍ，将其放入盛有２％红四氮唑溶液中，置于３７ ℃恒温箱中水浴孵育３０ ｍｉｎ后，置于４％中性多聚甲醛溶液中固定，梗死部分呈白色，正常部分呈红色。取出平置于载玻片上，以刻度尺标记，电镜摄像， 病理图像分析软件出脑梗死体积，占同侧大脑半球百分比例。

    １．２．７  Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性测定

    各组实验动物１０只，断头取脑后，用生理盐水洗净，冰上分离取海马，吸干水分，取约２／３海马组织，迅速置天平上称量，记录后用冻存管保存于－８０ ℃超低温冰箱，用作ＡＴＰ酶检测。迅速取出冻存管，将标本放入匀浆管，按１０ ｍｇ／１００ μＬ加入匀浆液，置高速匀浆机充分匀浆后取上清备用。取标准牛血清蛋白配成４８０ μＬ标准对照品；Ｂｒａｄｆｏｒｄ法［８］配制蛋白质浓度检测液：５０ ｍｇ考马斯亮兰（Ｇ－２５０）溶于２５ ｍＬ ９５％乙醇中，加入５０ ｍＬ ８５％（Ｖ／Ｖ），双蒸水稀释到５００ ｍＬ。根据ＡＴＰ酶试剂盒说明书配制试剂和０．５ ｍｍｏｌ／Ｌ标准磷应用液（应为浅黄色，若无色则试剂失效，若为蓝色则为磷污染，定磷剂现用现配），按照规范操作步骤完成（１）酶促反应：将上清液分别加入不同试剂，混匀，３７ ℃水浴准确反应１０ ｍｉｎ；再将试剂混匀，３ ０００～４ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ取上清２００ μＬ定磷。（２）定磷：取上清液与试剂混匀，３７ ℃水浴准确反应３０ ｍｉｎ，冷却至室温，在６６０ ｎｍ处，蒸馏水调零比色，在５９５ ｎｍ处采用Ｌｏｗｒｙ法检测蛋白质浓度。计算公式

    组织中ＡＴＰａｓｅ活性ｕｍｏｌＰｉ／（ｍｇｐｒｏｔ·ｈ）＝×标准管浓度（０．５ｕｍｏｌ／ｍＬ）×反应体系中样本稀释倍（２．５）×

    计算出Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ值，其中ＯＤ值用紫外分光光度计测定。

    １．２．８  ＡＴＰ，ＴＡＮ含量的测定  各组实验动物断头取脑后，取海马的另１／３，在冻结状态下破碎，称取１０ ｍｇ脑组织于离心管中，加入经预冷的０．４２ ｍｏｌ／Ｌ高氯酸５００ μＬ混匀，旋涡振荡置冰箱中，间断振荡３次，提取１５ ｍｉｎ，于－１０ ℃以３ ８００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取２００ μＬ上清液加８５ μＬ ＫＯＨ（１ ｍｏｌ／Ｌ），旋涡振荡１ ｍｉｎ，再于－１０ ℃以４ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，取２０ μＬ上清液上样，进行高效液相色谱分析。色谱条件为：色谱柱系Ｄｉａｍｓｏｎｉｌ Ｃ１８（２００ ｍｍ×４．６ ｍｍ，ｉ．ｄ． ５ μｍ，迪马公司），流动相：１００ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｋ２ＨＰＯ４／ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ６．０，内含５ ｍｍｏｌ／Ｌ四丁基硫酸铵）：甲醇（８６∶１４），应用前经过０．４５ μｍ的过滤膜过滤，超声脱气，流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，进样量为２０ μＬ，柱温为２７ ℃，检测波长：２５４ ｎｍ。

    １．３  统计学分析

    数据以均数±标准差（ｘ±ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ １３．０统计软件包进行统计学分析。神经功能缺损评分采用重复测量设计的两因素方差分析，脑梗死体积、Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ，ＡＴＰ，ＴＡＮ多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用ＳＮＫ－ｑ法，组间比较采用析因设计的方差分析。

    ２ 结果

    ２．１  各组神经功能缺损评分比较

    与模型组同时间点比较：各组４、２４ ｈ神经功能缺损评分差别无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；４８、７２ ｈ时血塞通组、针刺组、针药组均有降低，差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。各组组内比较：４８ ｈ 与４ ｈ 比较，血塞通组、针药组差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；７２ ｈ与４ ｈ、２４ ｈ比较，血塞通组、针刺组差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５），针药组差别有显著统计学意义（Ｐ＜０．０１）；７２ ｈ与４８ ｈ比较，针刺组、针药组差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。在７２ ｈ时，针药组与针刺组差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表１。

    ２．２  各组脑梗死体积比较

    模型组大鼠经ＴＴＣ染色后，均发现左侧ＭＣＡ供血区出现梗死边界清晰、范围较恒定的苍白梗死灶，梗死灶占同侧大脑比例为（３４．０６±７．３３）％；血塞通组、针刺组和针药组梗死灶边界模糊不清，边界线不规则，梗死灶占同侧大脑比例分别为（１９．１７±４．７４）％、（１７．３３±５．４８）％和 （１１．２４±４．１６）％，均明显小于模型组（Ｐ＜０．０１）；针药组脑梗死体积与血塞通组、针刺组显著缩小，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。模型组、血塞通组、针刺组、针药组经析因设计的方差分析，发现血塞通组与针刺组之间存在交互作用（Ｐ＜０．０１）。见表２。

    ２．３  各组Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ结果

    假手术组、血塞通组、针刺组、针药组Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性均较模型组高（Ｐ＜０．０５）；血塞通组、针药组Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ与假手术组比较均有不同程度下降，但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）；针刺组Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｍｇ２＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ与假手术组比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。见表３。

    ２．４  各组ＡＴＰ，ＴＡＮ含量测定结果

    模型组、血塞通组、针刺组ＡＴＰ均较假手术组低（Ｐ＜０．０１）；针药组与模型组、血塞通组、针刺组比较，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；针药组，ＴＡＮ较血塞通组、针刺组高（Ｐ＜０．０５）；模型组、血塞通组ＴＡＮ较假手术组低；说明血塞通和针刺有协同效用。见表４。

    ３ 讨论

    急性缺血性脑卒中是临床常见病，预后差，病情复杂，又缺乏特异有效的方法。ＡＴＰ酶活性下降和能量供应障碍是急性脑缺血的重要机理之一，可引发和加重脑水肿及脑梗死。脑组织中高能化合物ＡＴＰ为维持脑功能和细胞内外离子恒定所必须，其含量变化是反映脑组织能量生成及利用的重要指标。在缺血缺氧时，脑细胞内ＡＴＰ逐渐耗竭，依靠ＡＴＰ运转的离子泵（ＡＴＰａｓｅ）活性因能量障碍而受到抑制，同时因为钠、钾泵（Ｎａ＋，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ）、钙泵（Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ）等活性降低，导致胞内Ｎａ＋、Ｃａ２＋等超载，引起迟发性细胞损伤。

    针刺疗法作为早期治疗和早期康复的积极有效的手段，有研究表明［９－１１］，无论出血性中风，还是缺血性脑卒中，在急性期针刺，其疗效优于在恢复期针刺。针刺治疗能够增加脑血流量，改善脑氧代谢，缩小梗死体积，抑制脑细胞凋亡，对缺血的脑组织起到一定的保护作用［１２］。具有扶正固本，疏通经络，调理气血，活血化瘀，扩张血管，改善微循环的作用。而血塞通注射液是三七提纯制成的，主要成分三七总皂苷（Ｐａｍｘ Ｎｏｔｏｇｉｎ ｓｅｎｏｓｉｄｅｓ，ＰＮＳ）。它具有成分明确，纯度高，剂量准确，疗效稳定，使用方便的特点，是一种很有前途的新型神经保护剂。

    实验结果显示，血塞通组、针刺组、针药组各项指标均优于模型组，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）；而针药组神经功能缺损改善优于针刺组（Ｐ＜０．０１），也优于血塞通组，但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），可能与样本含量不够有关；针药组脑梗死体积小，均与针刺组和血塞通组差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；针药组ＡＴＰ、ＴＡＮ含量均较其余各治疗组和模型组升高（Ｐ＜０．０５）。与司全明［１３］报道相一致。说明血塞通和针刺督脉经穴均能改善急性脑缺血损伤，且两者之间有协同效用，其疗效显著优于单纯血塞通或针刺治疗。其可能的作用机制是血塞通有消肿、止痛的功效，能诱导神经干细胞特异性分化成非成熟神经元，可以明显提高成熟神经元比例［１４］。二者协同作用，标本兼治，在疾病发生、演变、转归中发挥了多靶点、多效应的有效治疗，从整体上改善损伤后神经修复再生，对缺血后脑组织起保护作用。因而有提高治愈率，减少病死率和病残率的显著疗效。

【】
  ［１］ Ｋｌｉｊｎ ＣＪ， Ｈａｎｋｅｙ ＧＪ． Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｉｓｃｈａｅｍｉｃ ｓｔｒｏｋｅ：ｎｅｗ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ ｓｔｒｏｋｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｔｒｏｋｅ Ｉｍｉｔｉａｔｉｏｎ． Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ， ２００３，２（１１）：６９８－７０１．

［２］ 包 华．尿激酶静脉溶栓治疗脑梗死研究．综合临床，２００２，１８（１）：５５－５６．

［３］ 严文广，黄政德，司友琴． 血塞通对急性局灶性脑缺血大鼠的治疗作用． 中医药导报，２００６，１２（１０）∶５－９．

［４］ Ｋｏｉｚｕｍｉ Ｊ， Ｙｏｓｈｉｄａ Ｙ， Ｎａｋａｚａｗａ Ｔ， ｅｔ ａｌ． Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ｂｒａｉｎ ｅｄｅｍａ：Ａ ｎｅｗ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍｉｄｅｌ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｅｍｂｄｉｓｈ ｉｎ ｒａｔｓ ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｒｅｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｉｓｃｈｅｍｉｃ ａｒｅａ．Ｊｐｎ Ｊ Ｓｔｒｏｋｅ，１９８６，８：１－４．

［５］ 石学敏．针灸治疗学． 北京： 中国中医药出版社，２００３．

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