中药逆转卵巢癌多药耐药的研究进展

　　【摘要】 多药耐药( multidrug resistance , MDR)指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药产生耐药性后 ,对结构与作用机制不同的抗肿瘤药产生交叉耐药的现象。这种现象可以是先天的 ,也可以是化疗诱导产生的。目前认为其共同的生物学基础是 MDR1 基因产物 P2糖蛋白(P2 gp) 过量表达 ,与肿瘤内药物结合或直接从细胞膜上排除抗肿瘤药物 ,从而降低药物对肿瘤细胞的毒性所致。MDR 是目前化疗的主要障碍 ,是肿瘤细胞产生耐药的重要原因。?
　　【关键词】 中药； 卵巢癌； 多药耐药； 逆转
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　　卵巢癌是当前死亡率最高的妇科恶性肿瘤之一。手术辅以化疗是其主要的原则。然而化疗耐药严重影响了卵巢癌患者的化疗效果和生存质量, 使患者5年生存率大大下降。多药耐药( multidrug resistance, MDR)指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药产生耐药性后,对结构与作用机制不同的抗肿瘤药产生交叉耐药的现象。目前,卵巢癌化疗多药耐药的研究既是热点问题,又是难点问题。因此发掘专一性的耐药逆转剂及从中药中筛选出特别有效的耐药逆转药物，都会给患者带来新的生命,新的希望。?
　　中药因其药理作用广泛,疗效明显,而不良反应少,已成为目前肿瘤多药耐药研究的热点。中药抗肿瘤作用的机制 概括起来有:①中药通过对肿瘤细胞周期的抑制作用和(或)对肿瘤细胞凋亡的诱导,减缓肿瘤细胞的增殖,或导致肿瘤细胞的死亡,从而起到抑制肿瘤增长的作用;②中药通过对免疫系统的调节作用提高机体免疫力,保护正常细胞,延长带瘤生存期;③中药与化疗药合用, 可明显提高化疗药物的敏感性,达到有效杀伤肿瘤细胞的目的。本文对相关中药单体及复方进行整理，围绕以上几个机制对中药逆转卵巢癌的研究进展作一综述。?
　　1 中药单体?
　　1．1 人参皂苷Rg3 许天敏等^[2]通过体内、体外实验观察了20(S)-人参皂苷Rg3对卵巢癌生长的影响,并初步探讨其抗卵巢癌的机制。体外实验显示Rg3对SKOV3细胞生长有明显抑制作用。并且随着Rg3作用浓度的增加,抑制作用明显增大。卵巢癌皮下移植瘤动物模型的体内实验,也证实Rg3能明显抑制实体肿瘤的生长,并且随着给药剂量的增加抑制作用增强,说明Rg3有较好的抗卵巢癌作用。并推测Rg3抗卵巢癌的作用机制可能是通过抑制卵巢癌周围新生血管的形成而实现的。?
　　1．2 蟾蜍毒素 蟾酥是传统中药，李艳荣等^[3]研究发现蟾蜍毒素粗提物对卵巢癌细胞OVCAR-3作用细胞24,48,72 h,半数抑制浓度分别为0．62、0．24、0．09 μg/ml。细胞经0．5、5μg/ml蟾蜍毒素粗提物处理1,6 h,细胞生存率均>95%,集落抑制率与对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)。流式细胞仪分析表明,0．5μg/ml蟾蜍毒素粗提物明显增加G2/M期的比例,同时观察到分裂期细胞明显增多,提示蟾蜍毒素粗提物使OVCAR-3细胞周期阻滞于M期。但其确切机理有待进一步研究。?
　　1．3 黄芩素 黎丹戎等^[4]实验表明黄芩素在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转A2780/ADM对ADM的耐药性;ADM与黄芩素合用时,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。采用无细胞毒性浓度的黄芩素能使A2780/ADM细胞内ADM的积累增加3倍,与异博定的效果相当,提示其逆转机制可能是与化疗药物竞争P-Gp上的结合位点,从而降低化疗药物的外流,增加细胞内化疗药物的积累。?
　　1．4 姜黄素 英焕春等^[5]研究发现姜黄素能诱导COC1/DDP细胞凋亡, DDP与姜黄素联用诱导细胞凋亡的能力比单用DDP或姜黄素明显增加，顺铂的浓度在1． 25~5 μg/ml时加入姜黄素20 μmol/L后耐药细胞生存率下降明显(P<0．05),尤以顺铂2． 5μg/ml和姜黄素。20 μmol/L联合作用时,耐药细胞生存率下降最明显; COC1/DDP中顺铂与姜黄素联合用药与单独用顺铂相比,凋亡率明显增加(P<0．05)。其机制可能与降低Bcl-2、Survivin基因的表达,增加Caspase-3基因的表达有关。?
　　1．5 雄黄 陈文雪等应用流式细胞术、荧光显微镜、透射显微镜和免疫组织化学等技术,以细胞凋亡和VEGF为主要观测指标,观察中药雄黄对荷人卵巢癌裸鼠移植瘤抗肿瘤作用。证明雄黄可诱导荷人卵巢癌裸鼠移植瘤细胞凋亡,抑制荷瘤裸鼠肿瘤的生长,阻止血管生成抑制细胞DNA的合成,并可延长小鼠存活时间，具有广阔的应用前景。?
　　1．6 砒霜 砒霜的有效成分三氧化二砷(As203)近年来成为抗肿瘤药物研究的热点。郑建华等^[6]研究发现0．5～4．0 umo1/L As203明显抑制SKOV3细胞的增殖，并呈剂量和时间依赖性；透射电镜观察可看到较为典型的细胞凋亡的形态学改变；流式细胞仪检测出现DNA含量小于G1峰的亚二倍体凋亡峰，同时出现G2/M期阻滞。As203对卵巢癌细胞株SKOV3的生长有明显的抑制作用，诱导凋亡是其主要作用机制之一。?
　　1．7 去甲斑蝥素（NCTD） 唐龙英等^[7]实验表明：NCTD对3AO和AO细胞有较强抑制作用,并呈浓度和时间依赖性,两种细胞的IC50分别为20、10 μg/ml。通过体外杀伤实验再次证实了NCTD的抗癌作用,其作用结果与大多数报道NCTD对其他癌细胞的杀伤作用一致。但其对卵巢癌作用的具体机制尚不清楚,有待进一步研究。?
　　1．8 川芎嗪 高婷等运用RT-PCR技术检测22例卵巢恶性肿瘤患者PBMC中Th1类细胞因子(IFN-γ,IL-2)、Th2类细胞因子(IL-4I、L-10)及转录因子T-bet、GATA3的mRNA表达水平，证明了卵巢恶性肿瘤患者出现典型的Th1/Th2漂移现象与T-bet和GATA3的表达水平有相关性。川芎嗪能降低Th2类细胞因子和GATA3的表达,提高Th1类细胞因子和T-bet的表达。?
　　1．9 苦参碱 侯华新等研究发现氧化苦参碱对SKOV3细胞生长有明显的抑制作用,且这种抑制作用呈浓度依赖性。细胞经0．189 mmol/L和0．378 mmol/L的氧化苦参碱作用48 h后,即呈现典型的细胞凋亡形态学变化和DNA片段的梯形条带。说明氧化苦参碱在一定浓度下能促进肿瘤细胞的凋亡,其抗癌机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。?
　　此外，李大成等通过体外细胞实验,从32种中药制剂中筛选出的Ams-11、Fw-13、Tul-17等3种中药逆转剂,能明显增强MDR细胞对抗癌药物的敏感性,而且其逆转作用呈剂量依赖关系,能有效逆转P-gp高表达细胞的人卵巢癌细胞SKVLB对长春花碱的耐药性。?
　　2 中药复方制剂?
　　中药复方制剂,可通过增强机体免疫功能、逆转MDR等多种机制,提高肿瘤临床疗效,减轻化疗的不良反应。大量的临床试验证明，中药在肿瘤放化疗中有增敏、增效、减毒的作用，是中医克服化疗耐药的重要手段。?
　　2．1 参芪扶正败毒丸 于华香等针对临床中,中、晚期卵巢癌以气血不足、脾肾两虚为多见的情况，拟定了具有补益气血、解毒利湿、消痰散结、理气化瘀之功的参芪扶正败毒丸与化疗药物配合治疗卵巢癌。临床能够显著提高化疗完成率,改善临床症状,提高患者的生活质量,增强机体的免疫功能,延长患者的生存期。治疗后局部病灶变化(CR+PR+NC),明显优于对照组的(P<0．01);3年、5年的生存率,显著优于对照组的(P<0．05,P<0．01)。? 　　2．2 扶正消瘤颗粒 贾彤等应用扶正消瘤颗粒在体外有一定的抗肿瘤作用，并有增效之功。MMT显示本方有一定量效关系和时效关系，浓度愈大，作用时间愈长，效果愈明显;TUNEL和透射电镜及FCM均提示了细胞凋亡的发生，而Westemblot的结果则显示了细胞凋亡的发生与bcl一2儿ax比率的下调有关，使细胞增殖受到抑制。?
　　2．3 理冲生髓饮 韩凤娟等随机设单纯化疗组和理冲生髓饮加化疗组针对NK细胞活性、T淋巴细胞亚群、红细胞C3b受体等指标进行临床研究。临床观察证明本方不但可以减轻化疗药物的毒副反应,保障化疗的顺利进行,而且在增强卵巢癌患者细胞免疫、体液免疫功能的同时达到抗肿瘤的作用。?
　　2．4 益气养阴煎 齐聪等应用益气养阴煎合并化疗有助于提高卵巢癌患者的机体免疫状况。经服益气养阴煎合并化疗后,OKT4及OKT4/OKT8比值明显提高(P<0．01)。?
　　2．5 中药消积煎剂 潘玉真等研究发现消积煎剂与顺铂之间存在着协同增敏作用，其作用强度呈现对药物浓度的正相关性。形态学观察可看到，实验处理后人卵巢癌CAOV3/cDDP细胞出现典型的凋亡现象。其作用机制可能与消积煎剂诱导肿瘤细胞凋亡有关。?
　　2．6 海马生髓丸 韩凤娟等通过对移植瘤的抑瘤率、光、电镜技术及细胞凋亡调控基因P53,BCL-2等免疫组化的研究，表明海马生髓丸具有一定的抗肿瘤作用，可以抑制S180荷瘤鼠的肿瘤生长，明显增强SKOV3卵巢癌模型鼠DDP的杀伤肿瘤作用，对肿瘤细胞的凋亡具有明显促进作用。并且海马生髓丸能够上调p53蛋白表达；而可显著下调BCL-2蛋白表达，说明海马生髓丸同p53这种抑癌基因具有协同作用。?
　　2．7 增免抑瘤合剂 黄宗瀚等实验发现化疗组、合并组、中药组大鼠的bcl-2阳性面积、OD值及bcl-2/bax比值均较模型组明显下降(P<0．01),而化疗合并中药后bcl-2下降最显著(P<0．01),提示中药合并化疗能明显促进细胞凋亡,其原因可能与中药能增强化疗药物敏感性,降低耐药有关。?
　　2．8 鸦乳剂 崔勇志等研究提示适当浓度的鸦乳剂可提高化疗药物对CAOV3细胞的毒性作用，其机理可能为鸦乳剂中的不饱和脂肪酸使癌细胞的-SH基含量低下，细胞膜变薄，从而增加对抗癌药物的通透性，提高药物在癌细胞内的浓度，增强细胞毒性作用。也可能由于鸦乳剂的小油滴与癌细胞有较好的亲和力，有助于药物与癌细胞的接触，增加抗癌药向癌细胞内渗入的机会，产生杀灭或抑制癌细胞的效果。?
　　2．9 扶正祛邪方药 张军等应用中药血清药的实验方法,利用大鼠制备含药血清,采用细胞排染法和3H掺入法观测含药血清对39例卵巢癌新鲜实体瘤细胞增殖的作用。结果显示：实验所用复方中药可抑制人卵巢癌新鲜实体瘤细胞的增殖。各病理类型中,随含药血清浓度的增加,抑制率增高,P<0．05。同一种卵巢肿瘤病理类型中,含药血清处理组细胞增殖cpm值明显低于空白血清组,P<0．05;而且不同浓度含药血清组cpm值比较差异有统计学意义(P<0．05)。?
　　3 结语?
　　目前中药逆转肿瘤多药耐药的实验研究越来越多,但主要以体外实验研究为主,单体从药物研究的角度出发,按照对肿瘤耐药有效药物的同科属或化学结构相似进行筛选,复方从经验方或对现有的国家批准的中药制剂进行逆转多药耐药的研究,探讨其新的药理作用。?
　　中药在肿瘤的治疗中，有增敏、增效、减毒的作用，其逆转肿瘤细胞耐药的研究已取得一定的成果，具有重要的理论与实用价值。由于肿瘤产生耐药的机制相当复杂，如不同肿瘤细胞对同一种药物可以有不同的耐药机制，而同一肿瘤对同一种药物也可能有多种耐药机制。目前已经证明具有逆转作用的中药的研究大多集中在单体成分目前大多数的研究均为体外试验，许多试验结果还需动物实验及临床的验证。尤其是着力于复方中药逆转剂多靶点、多阶段的研究对提高化疗效果，延长癌症患者的生存期和生活质量，具有深远的意义。?
　　
　　
　　［1］ 欧阳兵,季旭明,李文华. 中药复方逆转肿瘤多药耐药研究的基本思路和方法.山东中医药大学学报, 2002, 26(6):472-473.?
　　［2］ 许天敏, 崔满华, 谷丽萍, 等.220(S)-人参皂苷Rg3对卵巢癌生长抑制作用的实验研究. 实用妇科与产科杂志,2007,23(2).?
　　［3］ 李艳荣, 卢香兰, 刘云鹏, 等.蟾蜍毒素粗提物诱导卵巢癌OVCAR-3细胞M期阻滞. 中国医科大学学报,2004,33(2).?
　　［4］ 黎丹戎, 张玮, 唐东平, 等.黄芩素对卵巢癌耐药细胞株A2780/ADM逆转作用实验. 肿瘤,2004,24(2).?
　　［5］ 英焕春, 张淑兰, 吕靖. 姜黄素逆转卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP耐药性及机制的研究. 肿瘤医学,2007,15(5).?
　　［6］ 郑建华.中药砒霜(AS2O3)在卵巢癌体外作用及肝细胞生长因子表达的研究. 黑龙江中医药大学博士学位.?
　　［7］ 唐龙英, 宓鹤鸣. 去甲基斑蝥素治疗卵巢癌的实验研究. 肿瘤, 2000，20（2）：96-99.