探讨细胞移动抑制因子和p53及MVD在食道鳞癌组织中的表达与意义
摘要：目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、p53和CD34在食管鳞癌组织表达的相关性。方法应用免疫组织化学技术对63例食管鳞癌（ESCC）组织中的MIF、p53的表达，新生血管热区的CD34阳性微血管密度（MVD）进行研究。结果 食道鳞癌MIF、p53总体阳性表达率及MVD分别为93.8％(60／64)、84.3％(54／64)及31.12+12.20／高倍视野，明显高于正常胃粘膜组(P<0．05)，伴有淋巴结转移的癌组织中p53及MVD水平均高于无淋巴结转移的癌组织(P<0.05)， MIF、p53和MVD在低分化食管鳞癌的表达率分别为：100% 、95.2%和40.13±20.04／高倍视野，与高分化食管鳞癌组织差别具有显著性差别(P<0．05)； MIF和p53及MVD表达呈正相关(P<0．05)。结论：MIF、p53和MVD在低分化胃癌、淋巴结转移组织中表达明显增高，且两者的表达有呈明显的正相关。提示MIF是与食道癌密切相关的因子之一。
关键词：巨噬细胞移动抑制因子；食管鳞癌；p53；CD34
Abstrast：Objective To explore the relationship between macrophage migration inhibitory factor 、p53and CD34 in esophageal squamous cell carcinoma(ESCC).Methods：MIF、p53 expression and microvessel density(MVD) from 63 cases of ESCC tissue were researched with immunochemistry technology．Results The expression rate of MIF,p53 and MVD in ESCC were 93.8％, 84.3％and 31.12+12.20／HPF,it is obviously higher than normal stomach(P<0．01)；The expression rate of MIF,p53 and MVD with poorly differentiated were 100% ,95.2% and 40.13±20.04／HPF，it also Was obviously higher than that with well differentiated(P<0．05).The positive expression rates of p53 and the number of MVD in ESCC with lymph node metastasis were, respectively, was significantly higher than that without lymph node metastasis (P<0.05)．Meanwhile, There were positive correlations found for the expression of MIF with p53 and MVD counting，respectively (P<0．05).Conclusion：MIF ,p53 and MVD in ESCC with poorly differentiated,lymph node metastasis obviously increased，furthermore，their expression have positive correlation．It show that MIF may be important cytokine in ESCC．
Key words：macrophage migration inhibitory factor；esophagus squamous cell carcinoma；p53；MVD
食管癌在恶性肿瘤中的发病率居第6位,食管鳞癌是我国主要的食管癌病理类型。目前已经开展了很多关于食管鳞癌形态学和临床病理特征的相关性研究。随着对细胞因子研究的深入，近年巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对肿瘤的影响引起重视。MIF可通过刺激瘤细胞增殖和血管发生，抑制p53基因等机制促使肿瘤发生及浸润转移。我们通过检测食管鳞癌组织中MIF、p53和CD34的表达，观察MIF与微血管生成、MIF与p53的关系，探讨MIF和p53在食管鳞癌发生过程中的作用。
一、材料与方法
1．研究对象：收集2004年8月一2007年1O月在青海大学附属确诊并手术的食道鳞癌共64例。年龄45—72岁，组织学分级：高、中分化43例，年龄52— 72岁。低分化21例，年龄45—65岁，为实验组。同期15例食道活检、病理确诊为食道粘膜慢性炎为对照组，年龄43—68岁。以上病理切片均经同一位有经验的病理科医生复核。
2．免疫组织化学染色：采用SP法。MIF单克隆一抗购自深圳晶美生物有限公司(英国R&Dsystem公司)，p53、CD34一抗及SP免疫组织化学试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。每个蜡块连续切取4张切片，切片厚4 m，1张HE染色用于明确诊断和指示癌细胞区，另3张用于检测MIF、p53蛋白和CD34。MIF工作浓度为1：500。PBS液代替一抗，作为阴性对照。染色步骤按sP试剂盒说明书进行，DAB染色后苏木精对比染色，中性树脂胶封片。
3．结果判定：(1)MIF：细胞膜、质、核呈棕褐着色的为阳性细胞。每张切片随机计数1000个肿瘤细胞，根据阳性细胞占计数肿瘤细胞数的百分比，分为(一)阴性0—19％ ，(+)弱阳性20％ 一49％，(++)强阳性50％ 一100％。(2)微血管密度(MVD)：判别标准：排除出血坏死及纤维硬化区域，凡有着色的内皮细胞或内皮细胞簇，无论腔隙大小均以其断面多少来计数(厚壁血管除外)。测量法：先在低倍镜(×40)下仔细观察，选定微血管高密集区即热点区，再于中倍镜(×200)下随机取3个视野，平均微血管数。(3)p53：胞核呈棕黄色的为阳性细胞。镜下观察(×100)，阳性细胞占切片中细胞总数的百分比，(一)阴性0—5％ ，(+)弱阳性6％ 一50％，(++)强阳性I>50％ 。
4．统计学处理：结果数据用面±s表示，SPSS10．0软件包进行t检验、方差分析、卡方检验和直线相关分析。
二、结果
1．年龄：实验组64例，年龄(52．5±11．9)岁。对照组19例，年龄(46．1±13．8)岁，两组相比差异无统计学意义(P>0．05)。
2．免疫组织化学染色结果：(1)实验组MIF表达总阳性率93.8% (60/64)；实验组与对照组差异有统计学意义(P<0．05)。 (2)MVD(图2)：癌组织内微血管数量增多，形态异常，从小的裂隙样或仅1—2个内皮细胞簇到含大量血细胞的海绵样结构，差异显著，密度分布不均。总体数为31.12+12.20／高倍视野。MIF表达强度与MVD相关(r=0.73，P<0．05)。(3)p53实验组的总阳性率为84.3% (54／64)。而对照组无表达。p53与MIF表达成正相关(r=0.78，P<0．05)。
临床病理因素 n MIF P53 MVD（条／高倍视野） P值
阳性 P值 阳性 P值
组织学类型 P<0．05 P<0．05 P<0．05
Ⅰ级 15 12(80.0%) 10(66.7%) 24.12±9.21
Ⅱ级 28 27(96.4%) 24(85.7%) 31.56±12.21
Ⅲ级 21 21(100%) 20(95.2%) 40.13±20.04
正常食道 19 2(10.5%) P<0．01 0 P<0．01 13.06±4.18 P<0．01
淋巴结转移 P>0．05 P<0．05 P<0．05
有 38 38(100%) 34(89.5%) 38.10±15.11
无 26 24(92.3%) 17(65.4%) 25.32±10.10
三、讨论
巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitoryfactor．MIF)是一种在人体多种组织和器官中组成性表达的细胞因子，其功能与炎症和免疫有关。在细胞增殖的调控、细胞凋亡以及生长因子的表达、恶性肿瘤的演进等方面起着重要的作用，在肺腺癌、前列腺癌以及肝癌组织中等多种恶性肿瘤组织中存在过量的表达，并且在肿瘤组织中的表达多与较差的预后和较高的肿瘤转移危险性密切相关。通过本实验我们发现MIF在食管鳞癌组织中也存在广泛的高水平的表达，在生长分裂活动旺盛的正常的食管黏膜上皮生发层细胞也有少量的表达，但其表达水平远远低于癌组织，并且MIF的表达水平不但与肿瘤的分化程度以及肿瘤的浸润深度与淋巴结转移有关，而且与癌组织中的新生微血管密度有较密切的关系，
肿瘤性血管生成是肿瘤细胞转移前提基础。有研究表明肿瘤组织中的微血管密度可以作为淋巴结转移甚至患者预后预测的新指标。本研究结果也证实了食道鳞癌组织中MVD计数增加。这一结果与Wakisaka在29例鼻咽原发癌组织中观察到的结果一致 。由于MIF阳性组MVD计数较MIF阴性组明显增高，且癌细胞MIF与MVD计数呈正相关关系，因此提示MIF可能具有促进食道癌组织微血管形成的作用。这一作用在人非小细胞肺癌组织中已得到了证实[91。但由于本研究结果显示MIF对促进鼻咽癌细胞淋巴结移和肿瘤性微血管形成有双重作用，因此，MVD与淋巴结转移相关也可能是一种伴随关系，而并非有直接促进作用，这尚需进一步研究证实。
目前的研究证明，生长失控和分化受阻是恶性肿瘤细胞的特征，这与细胞周期中的许多因素有关，野生型P53基因主要通过与P21基因、Bax基因的相互作用促进细胞的凋亡，参与调节细胞的生长周期，现已有研究证实，MIF通过对ERK、PLA2、Cox一2以及PGE2等系列细胞因子的激活来拮抗P53基因引起的细胞凋亡，抑制myc诱导的P53依赖的细胞凋亡，也能使NO诱导的巨噬细胞凋亡明显的减少，而NO能使细胞内的P53蛋白聚集，增加细胞的凋亡。本研究中，食道鳞癌各组突变型p53蛋白的表达均增高，且p53与MIF表达有明显的一致性，提示MIF可能与突变型p53基因的表达相互诱导，导致肿瘤发生。
综上所述，MIF在食道鳞癌组织中的表达增高，以及其与p53和MVD的相关性，提示可能对食道鳞癌的发生发展及肿瘤性微血管生成的重要因素，可能是与食道鳞癌密切相关的一个因子。值得进一步研究探讨。
：
[1] Imtiyaz Murtazat,Dhuha Mushtaql,Mushtaq A Margoobl, el a1．A study on p53 gene alterations in esophageal squamous cell carcinoma and their correlation to common dietary risk factors among population of the Kashmir valley[J],World J Gastroenterol,2006,12(25)：4033-4037．
[2] Xiao Mei Lu,Yue Ming Zhang,Ren Yong Lin,el a1.p53 polymorphism in human papillomavirus-associated Kazakh's esophageal cancer in Xinjiang,China[J].World J Gastroenterol,2004:10f19)：2775-2778.
[3] 李雯,夏金堂,汪谦.巨噬细胞移动抑制因子促进肿瘤发生发展机制的研究进展[J]．中华实验外科杂志，2006，V，23 (1)：1425—1426．
[4] 刘进军,胡川闽.巨噬细胞移动抑制因子分子作用机制的研究进展[J]．国外医学临床生物化学与检验学分册,2005,26(5)：169—80．
[5] 职锦洲,李秀梅,李秀杰,等．P53、MDR基因在食管癌、癌旁组织及化疗检测对比表达的临床研究[J]．河北医学,2004 ,10(9)：804—806．
[6] 赵劲松,廖克龙．MIF在食管鳞癌组织和癌旁组织中的表达[J]. 第三军医大学学报,2007， 29 (8)：740—742
[8]郭健苗,黄循铷,庄则豪.巨噬细胞移动抑制因子与消化系统肿瘤研究进展[J]．误诊学杂志，2007，7(12)：2700—02．
[9] 冯洁.巨噬细胞移动抑制因子在消化系统肿瘤中的作用[J].中国医学文摘·肿瘤学,2006.20 (1)：72—73．
[10] 夏晓艾,何成章.巨噬细胞移动抑制因子与肿瘤关系的研究[J].中国医学文摘·肿瘤学年第卷第期, 2006,2O(1)：64—66．
[11] 夏金堂,李雯,汪建平.巨噬细胞移动抑制因子与消化系肿瘤[J]．中华胃肠外科杂志，2006，9(5)：275—277．
