宫颈癌前病变与女性 HPV 生殖道感染关系的探讨

【摘要】  目的：探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒（HPV）与宫颈癌前病变的关系。方法：收集 688 例宫颈糜烂患者宫颈外口、颈管的脱落细胞，采用 AutoCyte PREP 液基细胞学检查，诊断按 TBS 标准。HPV 检测采用基因芯片技术。结果：HPV 阳性组（320 例）液基细胞学检查呈正常细胞抹片 160 例（50.00%），HSIL 24 例（7.50%），LSIL 88 例（27.50%），ASCUS 48 例（15.00%）；HPV 阴性组（368 例）液基细胞学检查呈正常细胞抹片者 316 例（85.87%），HSIL 0 例，LSIL 16 例（4.35%），ASCUS 36 例（9.78%）。两组比较差异极显著。结论：女性生殖道 HPV 感染者较易发生宫颈癌前病变，提示积极防治 HPV 感染对于预防宫颈癌发生有重要意义。

【关键词】  宫颈糜烂；人乳头瘤病毒；液基细胞学；宫颈癌

    〔Abstract〕 Objective   To  investigate  the  relation  between  HPV  infection  of  female  reproductive  tract  and  cervical  precancerosis.    Methods   The  cast  off  cells  were  collected  from  the  exterior  orifice  of  cervix  and  cervical tube  of  688  patients  of  cervical  erosion  and  examined  by  Thinprep  liquor  base  cytological  method.  The  diagnosis was  in  accordance  with  TBS  standard and  HPV  was  tested  with  gene  chip  technique.    Results     In  HPV  positive group  (320  cases)  there  were  160  cases  of  normal  by  cytological  test,  24  cases  (7.5%)  of  HSIL,  88  cases  (27.5%) of  LSIL  and  48  cases  (15%)  of  ASCUS.  In  HPV  negative  group  (368  cases)  there  316  cases  (85.87%)  were  normal  by  cytological  test,  no  HSIL,  16  cases  (4.34%)  of  LSIL  and  36  cases  (9.75%)  of  ASCUS.  There  is  significant  difference  between  the  two  groups.    Conclusion     HPV  infection  of  female  reproductive  tract  would  lead  to  cervical  precancerosis  suggesting  that  preventing  cervical  cancer  is  important  in  the  control  of   HPV  infection.

    〔Key  Words〕    Cervical  erosion;  Human  papilloma  virus(HPV);  Liquid  based  cytology;  Cervical  cancer

    　　宫颈糜烂是女性生殖道最常见的疾病，其病因与病毒、细菌、衣原体等感染有关。定期检查宫颈脱落细胞，对了解病情预防宫颈癌发生有重要意义。本文作者采用 AutoCytePREP 液基细胞学方法对 688 例宫颈糜烂者检查其脱落细胞，同时用基因芯片技术检测人乳头瘤病毒（HPV），比较 HPV 阳性组和阴性组的细胞学改变，现将结果予以报道。

    1    对象与方法

    1.1    研究对象    选择 2005 年 9 月 - 2006 年 9 月来我院妇科就诊的宫颈糜烂患者 688 例，年龄最小者 20 岁，最大者 61 岁。所有患者均常规作液基细胞形态学检查及应用基因芯片分型检测系统检查 HPV。

    1.2    液基细胞标本采集处理及分析方法    液基细胞标本采集处理：采用塑料刮板收集宫颈外口、颈管的脱落细胞，将所收集的细胞立即注入盛有AutoCyteprep 细胞保存液瓶中。保存液中的标本经AutoCyteprep 系统程序化处理，即将标本中的黏 液、血液和炎症细胞、上皮细胞分离后转移到静电处理过的载玻片上制成薄层细胞涂片，由电脑程序控制染色，用树胶封片。分析方法：采用 TBS（The Bethesda System）分级诊断标准[1]。具体描述方式有正常细胞抹片、未确定意义的非典型鳞状细胞改变（ASCUS）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）、高度鳞状上皮内病变（HSIL）。

    1.3    HPV 检测实验方法    采用基因芯片分型检测系统[2]。检测试剂盒（科研用）由亚能生物技术（深圳）有限公司提供。每例均检测 HPV 23 个亚型。具体分 5 个步骤：①样本 DNA 提取：将漂洗过棉拭子的生理盐水转移到 1.5 mL 微量离心管中， 1 300 r/min，离心 10 min，弃去上清，保留管底的细胞块。然后加入 50   L 裂解液悬浮沉淀，100℃ 加热10 min，13 000 r/min，离心 10 min。保留上清待用。②PCR 扩增：参照试剂盒使用要求，取 PCR 反应管于 5 000 r/min 离心 2 s 后，分别加入已提取的待测样品 DNA 5   L，反应总体系为 25   L。按以下条件进行扩增：50℃ 15 min；95℃ 10 min；94℃ 30 s；50℃ 90 s；72℃ 30 s；35 cycles；72℃ 5 min。③杂交：取 15 mL 塑料离心管，加入 A 液 8 mL 及 PCR 产物 20   L，置于沸水中加热 10 min 后放入 53℃ 杂交箱杂交 1 h。取 1 只 50 mL 塑料管加入 40 mL B 液于 53℃ 杂交箱或温箱中进行预热。④洗膜：取出膜条，移至装有预热 B 液的 50 mL 管中，于 53℃ 轻摇洗涤 15 min。⑤显色：取出膜条，置于 A 液配制 1:4 000 的 POD 溶液中，室温中轻摇浸泡 30 min，弃去 POD 溶液。用 A 液在室温中摇洗 2 次，每次 5 min。用 C 液在室温中洗膜 1~2 min，同时配制显色液。将膜条浸泡于显色液中避光显色 5 min 左右即可见斑点显现，显色时间勿超过 10 min。

    1.4    统计学分析用 检验。宫颈糜烂者 HPV 阳性组和阴性组液基细胞学检查比较详见表 1。

    2    结    果

    2.1    宫颈糜烂患者 HPV 阳性组和阴性组液基细胞学检查结果    从表 1 中可看出 HPV 阳性组和阴性组液基细胞学检查结果显示发生癌前病变的机率HPV 阳性组明显大于 HPV 阴性组（    =30.99，P < 0.01）。HPV 阴性组没有 1 例发现 HSIL，病变为LSIL 者阳性组也明显多于阴性组。

    2.2    癌前病变与 HPV 分型的关系    320 例 HPV 阳性者液基细胞形态学检查结果显示 ASCUS 者 48 例，其中 36 例 HPV 为高危型；LSIL 88 例及 HSIL 24 例 HPV 均为高危型。可见癌前病变与 HPV 高危型感染有着密切联系。

    3    讨    论

    3.1    HPV 检测是早期发现宫颈癌及癌前病变的有效方法    大量的研究已经表明 HPV 感染是宫颈癌的主要病因。随着分子生物学枝术的，人们不仅可从宫颈病变组织中分离到 HPV，而且对 HPV DNA 进行分型，目前已分出 100 余种 HPV 亚型，其中 30 余种与宫颈感染和病变有关。根据其致病力的大小分为高危型和低危型两种。低危型包括 HPV 6、11、42 等 12 种，主要引起生殖道、肛周皮肤及阴道下部的外生性湿疣类病变，扁平湿疣类病变和低度子宫颈上皮内瘤样变（CINL）。高危型主要为HPV 16、18、33、56、58 等 20 多种，可导致 CIN Ⅱ、Ⅲ病变和宫颈癌发生[3]。本文作者报道宫颈糜烂患者 HPV 阳性和 HPV 阴性的两组病例，显示 HPV 阳性组发生 ASCUS、LSIL 及 HSIL 的机率明显高于 HPV 阴性组，表明 HPV 阳性者更易出现癌前病变。已经出现癌前病变的病例所检出 HPV 几乎都是高危型。因此在疫苗未能用于预防之前，HPV 的筛查仍是目前人们早期发现宫颈癌和癌前病变的有效手段。

    3.2    宫颈糜烂患者已确定有癌前病变者应定期作脱落细胞形态学检查    宫颈癌的发生和发展是一个缓慢、渐进的过程。众多的研究业已证明宫颈癌发生之前有一系列的前驱病变，它的发生、发展是由量变到质变、渐变到突变，通常是由子宫颈不典型增生（轻→中→重）→原位癌→早期浸润癌→浸润癌的连续发展过程。这些前驱病变可存在多年，而且宫颈具有极其有利的解剖学基础，易于暴露，便于观察、触诊及取材，如能在前驱病变阶段被确诊，即可进行进一步的和监测，且早期病变的治疗效果远比宫颈癌的治疗效果好得多。故有宫颈糜烂已确定有癌前病变者应定期作宫颈脱落细胞形态学检查，对防治宫颈癌的发生有重要意义。

【】
  〔1〕National cancer institute Workshop. The 1998 Bethesda sytem for reporting cervical/vaginal cytological diagnosis〔J〕. JAMA, 1989, 262(7):931-934

〔2〕蔡虹. 深圳市育龄妇女HPV感染状况调查〔J〕. 妇幼保健, 2004,19(9):90-92

〔3〕Dell G, Gaston K. Human papilloma viruses and their role in cervical cancer〔J〕. Cell Mol Life Sei, 2001, 58(12-13): 1923-1942