幽门螺杆菌抗体组分与特发性血小板减少性紫癜发病的相关性分析
作者：季素芳 郭晓珺 丁韧烨 曾慧 吴海兵 李园 颜敏超
【摘要】 目的 分析幽门螺杆菌（HP）抗体组分与特发性血小板减少性紫癜（ITP）发病的相关性。方法 应用免疫印记法检测73例ITP患者和51例对照者的血清HP抗体组分：细胞毒素相关基因A(CagA) 128、CagA116、CagA110、空泡毒素蛋白A(VacA) 95、VacA91、尿素酶A(UreA)、尿素酶B(UreB),同时进行14C尿素呼气试验（14C -UBT）。结果 ITP组患者14C -UBT检测阳性率高于对照组，差异有统计学意义（χ2=3.88，P＜0.05）；两组HP抗体组分CagA110、VacA91水平比较，差异均有统计学意义（χ2分别=13.51、12.49， P均<0.05）；而两组CagA128、CagA116、VacA95、UreA、UreB水平比较，差异均无统计学意义（χ2分别=1.65、3.41、1.59、0.63、3.37， P均>0.05）。结论 HP 抗体组分CagA110、VacA91与ITP发病相关。
【关键词】 幽门螺杆菌 抗体组分 特发性血小板减少性紫癜
Study on relationship between helicobacter pylori antibody components and idiopathic thrombocytopenic purpura JI Sufang， GUO Xiaojun， DING Renye, et al. Department of Hematology, the First Affiliated Hospital of Jiaxing Medical College, Jiaxing 314000?熏 Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ To analyze the relationship between helicobacter pylori (HP) antibody components and idiopathic thrombocytopenic purpura (ITP). Methods HP serum antibody components：cytotoxin-assoiated gene product A(CagA) 128, CagA116, CagA110, vacuolating cytotoxin protein A (VacA) 95, VacA91, urease A (UreA), urease B (UreB) were measured by immunoblot (IBT) methods in 73 cases of ITP and 51 cases of healthy controls. At the same time, 14C -UBT were also tested. Results The incidence rate of HP infection was significantly higher in patients with ITP than that of control group（χ2=3.88，P＜0.05）. Seropositivity to component CagA110, VacA91 in ITP group was significantly higher than that in healthy control group（χ2=13.51, 12.49，P＜0.05）.The serum levels of other antibody components (CagA128,CagA116,VacA95,UreA,UreB) had no difference between the two groups（χ2=1.65, 3.41, 1.59, 0.63, 3.37，P>0.05）. Conclusions HP antibody components CagA110 and VacA91 are associated with ITP.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ helicobacter pylori; antibody component; idiopathic thrombocytopenic purpura
幽门螺杆菌（helicobacter pylori, HP）感染与特发性血小板减少性紫癜（idopathic thrombocytopenic purpura,ITP）发病关系目前仍有争论。HP抗体具有抗细胞毒素相关基因A(cytotoxin-assoiated gene product A，CagA)、空泡毒素蛋白A(vaculating cytotoxin protein A，VacA)、尿素酶A(urease A， UreA)、尿素酶B(urease B，UreB)等不同的抗体组分，何种抗体组分与ITP发病最为密切，国内少有报道。本次研究对73例ITP患者进行血清HP抗体组分检测及14C尿素呼气试验（14C -UBT），并与51例体检者作一对照，研究HP及其不同抗体组分与ITP发病的关系。现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选择 2006年3月至2008年2月嘉兴学院医学院附属第一收治的73例ITP患者，均符合ITP的诊断标准[1]，排除继发性血小板减少症患者。其中男性24例，女性49例，年龄21～ 57岁，平均年龄（36.52±8.73）岁。选择同期血小板计数正常51例体检者作为对照组，其中男性19例，女性32例，年龄20～65岁，平均年龄（34.15±8.21）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P均＞0.05）。
1.2 研究方法 HP检测采用14C-UBT,用液体闪烁检测仪检查14C的CPM量，样品的放射活度与本底值的比≥3.0倍为阳性；对比值2.9~1.3进行复查，比值≤1.2即为阴性。对50例14C-UBT检测阳性的ITP患者中42例行HP清除，抗HP治疗采用经典的三联药物治疗，即奥美拉唑胶囊20mg口服，1日2次，克拉霉素片500 mg口服，1日2次，阿莫西林胶囊500 mg口服，1日4次，疗程1周。
HP抗体组分检测采用免疫印记法（immunoblot, IBT）。HP特异性抗体显色带含有128KD、116KD、110KD、95KD、91KD、66KD及30KD等条带, CagA抗体组分的显色区带为128KD、116KD、110KD, VacA 抗体组分的显色区带为95KD、91KD、UreA为30KD,UreB为66KD。所用药盒系深圳伯劳特生物制品有限公司生产。
1.3 监测指标 检测ITP组与健康对照组HP感染率及其抗体组分CagA128、CagA116、CagA110、VacA95、VacA91、UreA、UreB水平。
1.4 统计学方法 采用SPSS １0.0统计软件对资料进行统计学处理。计量资料用t检验，计数资料用χ2检验。设P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 ITP组与对照组HP感染率及其抗体组分CagA128、CagA116、CagA110、VacA95、VacA91、UreA、UreB阳性率比较见表1
由表１可见，ITP组患者14C -UBT检测阳性率高于对照组，差异有统计学意义（χ2=3.88，P＜0.05）； ITP组患者HP抗体组分总阳性率（75.34％）与对照组（56.86％）比较，差异有统计学意义（χ2=4.69，P<0.05）。两组HP抗体组分CagA110 、VacA91水平比较，差异有统计学意义（χ2分别= 13.51、12.49，P均<0.05），
42例HP阳性的ITP患者行HP清除，其中29例（69.05%）血小板计数有不同程度上升，其治疗前后血小板计数分别为（16.44±12.19）×109/L、（42.78±33.51）×109/L，两者差异有统计学意义（t=2.21，P<0.05）,其中３例达到持续缓解。
3 讨论
ITP是临床上最为常见的出血性疾病，约占出血性疾病总数的30%，是由于抗血小板自身抗体产生,导致血小板破坏增多,使病人有出血倾向的自身免疫性疾病。其发病的确切机制尚不完全清楚，国内外学者认为某些病毒和革兰氏阴性细菌感染可能在ITP的发病过程中起重要作用。近年来研究表明, HP感染可能在ITP发病机制中发挥重要作用。1998年Gasbarrini等[2]首先提出HP感染与ITP的发病有关，继之，HP与ITP关系的文章相继见于报道。多数文章报道HP与ITP关系密切[3~6]，他们的资料表明， 部分HP阳性的ITP患者经HP清除治疗后血小板计数明显上升。 HP在胃内呈不均匀性和灶性分布，通过胃镜活检诊断存在取样误差可能，而14C -UBT检测可反映全胃HP感染情况，并能定量检测，本次研究采用14C -UBT检测，结果显示ITP患者HP感染率明显高于对照组。本次研究同时显示，HP抗体组分总阳性率明显高于对照组，进一步提示HP感染与ITP密切相关。本次研究对42例HP阳性的ITP患者行HP清除治疗，其中29例（69.05%）血小板计数有不同程度上升，部分患者血小板计数达到持续缓解，提示HP感染与ITP的发生、有密切相关，清除ＨＰ治疗对ＨＰ感染后ITP患者是一种有效的治疗方法。
HP通过多种机制致病, 包括细菌的粘附、各种毒力因子对胃黏膜细胞的直接损伤以及机体对菌株的免疫反应而导致的免疫炎症性组织损伤等。HP菌株含有CagA、VacA、UreA、UreB及鞭毛等多种抗原成分，根据HP毒力因子表达不同而将HP菌株分为两种类型：I型(高毒力型)和II型(低毒力型)。HP I型患者其抗体组分检测表现为CagA、VacA抗体同时阳性或任意一种阳性，其致病力强，感染后易引起胃部疾患; HP II型患者仅出现Ureas抗体阳性，其毒力较弱，感染后一般无临床症状。HP菌株不同毒力可能是HP感染患者是否发病或发生何种疾病的重要原因。研究证实，含有CagA、VacA抗原成分的I型HP菌株在消化系统中具有很强的致病作用，其致病途径主要为细菌局部损害胃黏膜引起。那么， HP感染机体后何种抗体组分与ITP发病关系最为密切？本次研究发现：含有CagA110、VacA91抗原成分的I型HP菌株与ITP发病最为密切。CagA是一种亲水性的细菌表面蛋白，具有高度的抗原性。CagA阳性HP菌株感染者血清中具有高滴度的抗CagA抗体存在，推测可能通过免疫途径引起ITP发病。VacA也可能通过其介导的免疫反应，破坏机体免疫的自稳状态，诱导发生自身免疫性血小板减少性紫癜，其确切的发病机制有待于进一步研究探讨。本次研究提示含有CagA110、VacA91抗原成分的I型HP菌株与ITP发病有关，而II型则否，这可能可以解释早期在日本、意大利等不同国家资料报告HP清除治疗后疗效不一的原因，可能就是因为不同地区HP菌株类型分布不同所致。
含有CagA110、VacA91抗原成分的I型HP菌株与ITP发病密切相关，因此，对ITP患者进行HP抗体组分检测很有必要, 建议I型HP相关性ITP患者及早行HP清除治疗。
ITP是一种免疫介导的血小板减少性疾病，其病因涉及到多种因素，本次研究提示I型HP菌株与ITP发病相关，HP清除治疗是部分HP感染后ITP患者行之有效的一种非免疫治疗方法，但尚需更大样本、更长时间的疗效观察以作更深入的研究。
【文献】
１ 张之南, 沈悌． 血液病诊断及疗效标准[M]． 第3版. 北京： 技术出版社，2007. 172-173.
2 Gasbarrini A, De Luca A, Fiore G, et al. Beneficial effects of helicobacter pylori eradication on migraine[J]. Hepato- gastroenterology, 1998, 21(3):765-770.
3 Emilia G, Longo G, Luppi M, et al. Helicobacter pylori eradication can induce platelet recovery in idiopathic thro- mbocytopenic purpura [J]. Blood, 2001, 97(3):812-814.
4 Kohda K, Kuga T, Kogawa K, et al. Effect of helicobacter pylori eradication on platelet recovery in Japanese patients with chronic idiopathic thrombocytopenic purpura and se- condary autoimmune thrombocytopenic purpura [J]. Br J Haematol, 2002, 118(2):584-588.
5 Takahashi T, Yujiri T, Shinohara K, et al. Molecular mimicry by helicobacter pylori cagA protein may be involved in the pathogenesis of helicobacter pyloriassociated chronic idiopathic thrombocytopenic purpura [J]. Br J Hae- matol, 2004, 124(1):91-96.
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