胃癌中PTEN、cyclin E蛋白表达及临床意义

                  作者：邵去非 王佩飞 郑聪 陈少杰 陈良英

【摘要】  目的　探讨第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(PTEN)及cyclin E蛋白在胃癌及癌旁组织中的表达及其临床意义。方法　选择70例胃癌及相应距癌组织5cm外的正常胃黏膜组织，采用免疫组织EnVision两步法检测癌及癌旁组织中PTEN、cyclin E蛋白的表达情况。结果　PTEN及cyclinE在胃癌组织中阳性率，与癌旁组织组比较，差异均有统计学意义（χ2分别= 32.46、4.83, P均＜0.05）；PTEN及cyclin E在高分化、中分化、低分化腺癌比较，差异均有统计学意义（χ2分别= 20.59、5.47，P均＜0.05）；PTEN、Cyclin E在胃癌TNM分期中Ⅰ-Ⅱ期的阳性率与Ⅲ-Ⅳ期的阳性率比较，差异有统计学意义（χ2分别= 6.57、4.02, P均＜0.05）；同样在淋巴结有转移的胃癌组织中阳性率与无淋巴结转移的胃癌组织中阳性率比较，差异也均有统计学意义（χ2分别=7.46、5.16, P均＜0.05）。结论　PTEN及cyclin E蛋白表达与胃癌的发生、及生物学行为有关。

【关键词】  PTEN；　cyclinE；　胃癌；　免疫组织化学

    Ａｂｓｔｒａｃｔ   Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ   To explore the expression and significance of PTEN and cyclin E in gastric carcinoma and adjacent tissues. Methods   Immunohistochemical staining EnVision method was used to detect the expression of PTEN and cyclin E in 70 cases of gastric carcinoma and corresponding adjacent normal tissues. Results   There was statistically difference in the expression of PTEN and cyclin E between gastric carcinoma and adjacent tissues（χ2=32.46,4.83, P<0.05）. PTEN and cyclin E were related to histological grade of gastric carcinoma（χ2=20.59,5.47,P<0.05）.  PTEN and cyclin E were correlated with TNM stage（χ2= 6.57,4.02, P＜0.05） and status of lymph node of gastric carcinoma（χ2=7.46,5.16, P<0.05）. Conclusion   The expression of PTEN and cyclin E may be associated with oncogenesis, progression and biologic behavior of gastric carcinoma.

    Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ  PTEN;　cyclin E;　gastric carcinoma;　immunohistochemistry

    近年来研究发现，第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因(phosphatase and tensin homology deleted on chromosome 10，PTEN)突变、缺失及表达异常与人类多种恶性肿瘤的发生发展密切相关[1]。Cyclin E是一种核蛋白质，最初是从酿酒酵母菌中提取出来的[2]， cyclin E的表达受细胞周期调节，并在G1期末达到高峰，激活周期蛋白依赖性激酶2（cyclin-dependent kinase，CDK2），cyclin E/CDK2复合物在细胞进入S期前显示出短暂而强烈的酶活性，并引起Rb蛋白的进一步磷酸化。本次研究主要应用免疫组织化学方法，回顾性研究PTEN、cyclin E在胃癌组织、癌旁组织中的蛋白表达，探讨它们与胃癌的发生发展的关系。现报道如下。

    1　资料与方法

    1.1　一般资料　70例标本取自2005年5月至2008年6月乐清市人民手术切除胃癌组织蜡块、瘤旁黏膜为距肿瘤灶5cm左右的正常黏膜。其中男性41例，女性29例，年龄31~78岁，平均年龄（63.50±2.12）岁。TNM分期：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期分别为11、19、24、16例。高、中、低分化腺癌分别为23、20、27例。有淋巴转移33例、无淋巴转移37例。所有受检病例术前均未经放疗、化疗。

    1.2　方法　组织切片脱蜡至水，高压抗原热修复后，依照EnVision试剂盒说明书进行免疫组化法染色。所用单克隆抗体PTEN、cyclin E以及EnVision试剂盒（由丹麦Dako公司生产）。染色中采用中性磷酸盐缓冲溶液代替－抗作为阴性对照，已知阳性切片作为阳性对照。采用微波抗原修复，设阳性、阴性对照。PTEN阳性位于细胞质，为棕黄色。cyclin E阳性位于细胞核，为棕黄色颗粒，计数5个高倍视野。PTEN阳性（＋），即阳性细胞数＞10%；阴性（－），即阳性细胞数＜10%。cyclin E阳性（＋），即阳性细胞数>5%；阴性（－），即阳性细胞数＜5% [3]。

    1.3　统计学方法　数据均用SPSS 10.0统计软件包处理。计数资料采用χ2检验。设P＜0.05为差异有统计学意义。

    2　结果

    2.1　PTEN、cyclin E在胃癌组织及癌旁组织中的表达比较见表1

    　　由表1可知，PTEN在癌旁组织中阳性率显著高于胃癌组织中阳性率，差异有统计学意义（χ2=32.46，P＜0.05）；Cyclin E在胃癌组织中阳性率明显高于癌旁组织，差异有统计学意义（χ2=4.83, P＜0.05）。

    2.2　不同病理组织类型胃癌中PTEN、cyclin E的表达情况比较见表2

    　　由表2可知，PTEN在高分化腺癌中的阳性率高于中、低分化腺癌中的阳性率，三者之间差异均有统计学意义（χ2= 20.59，P＜0.05）。高分化腺癌中cyclin E的阳性率低于中、低分化腺癌中的阳性率，三者之间差异有统计学意义（χ2 =5.47，P＜0.05）

    2.3　不同TNM分期及有无淋巴转移胃癌中PTEN、cyclin E的表达情况比较见表3

    　　由表3可知，PTEN、Cyclin E在胃癌TNM分期中Ⅰ~Ⅱ期的阳性率与Ⅲ~Ⅳ期的阳性率比较，差异均有统计学意义（χ2分别= 6.57、4.02, P均＜0.05）；同样在淋巴结有转移与无淋巴结转移的胃癌组织中两者的阳性率比较，差异也均有统计学意义（χ2分别=7.46、5.16, P均＜0.05）。

    3　讨论

    　　目前研究认为，肿瘤的发生是多因素、多阶段、多因子作用结果，其中癌基因的激活与抑癌基因的失活是其重要特征。胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展特点在肿瘤学研究中具代表性意义。与细胞支架蛋白tensin同源在PTEN是人类新发现的第一个具有磷酸酯酶活性的抑癌基因，能通过脱磷酸化作用调节细胞内信号传导通路，从而调节细胞正常的生长、发育及抑制肿瘤细胞增殖、粘附、转移。抑癌基因PTEN在胃癌的发生发展中具有重要作用，其编码的蛋白有蛋白性磷酸酯酶活性和脂性磷酸酯酶活性，参与细胞生长调节，并在肿瘤细胞浸润、血管发生及肿瘤转移中起一定作用[4]。

    　　PTEN的抑癌机制由几条途径协同完成：①通过抑制G1-S期进程，影响细胞的周期过程及增殖；②通过对局灶粘附激酶的去磷酸化抑制细胞转移及侵袭；③通过抑制促细胞分裂素激活的蛋白激酶细胞信号传导途径抑制细胞的生长和分化。本次研究结果表明：胃癌组织中PTEN的阳性率明显低于瘤旁组织（P＜0.05），提示PTEN蛋白的表达异常参与胃黏膜恶变转化过程。同时本次研究显示PTEN蛋白的表达与癌组织分化程度、淋巴结转移情况密切相关，随着分化程度降低，表达率降低，阳性率亦低，分化程度越高，阳性率亦高；淋巴结有转移的病例，PTEN阳性率低，淋巴结无转移的则阳性率高，提示PTEN在诱导肿瘤分化过程和转移过程中也起重要作用。

    　　Cyclin E是肿瘤细胞由G1进S期的限速蛋白因子，表达可以促使细胞由G1期向S期过渡，或在G2期异常出现的cyclin E与CDK2复合物，使正常细胞增殖失控导致肿瘤发生。近60%以上的原发胃癌和转移淋巴结有cyclin E的阳性表达，并且cyclin E的阳性表达与淋巴结转移、浸润深度、组织学分期和预后明显相关，与无病发生率和总生存率呈负相关，提示cyclin E可能成为胃癌的预后指标[5]。国内外学者在肺、肾、胰腺、胃、结肠及子宫、睾丸等肿瘤的研究中发现认为cyclin E可能是一个致癌基因，在肿瘤组织中它的表达在质和量上均有异常[2]。本次研究资料显示cyclin E在肿瘤组织中表达阳性率明显高于瘤旁组织（P＜0.05），并且与胃癌的分化程度、淋巴结转移情况相关。

    　　在对胃癌预后影响因素的研究中，目前均注重肿瘤分化程度、浸润深度及淋巴结转移情况，而PTEN及cyclin E在这几种情况下均表现出显著的差异性，提示着对恶性肿瘤预后的影响，也提示对肿瘤术后化疗放疗方案的设计，同样将来可以通过转基因来防止术后复发，根治恶性肿瘤。

【】
  １ Li, Yen C, Liaw D. PTEN, a pulative protein tyrosine

phoshhatase gane mulated in human brain, breast, and pro-

state cancer[J]. Science, 1997, 275(50): 1943-1947.

2 孔郁, 朴熙绪, 张媛, 等. 胃癌及癌前病变中p27和cyclin

E蛋白的表达意义[J]. 世界华人消化杂志, 2006, 14（13）：

1300-1304.

3 Xiangming C, Natsugoe S, Takao S, et al. The cooperative

role of p27 with cyclin E in the prognosis of advanced gastric

carcinoma[J]. Cancer, 2000, 89(6):1214-1219.

4 郑华川, 陈颖, 况立革, 等. PTEN编码产物在胃癌发生发

展不同阶段中的表达及意义[J]. 中华肿瘤杂志, 2003, 25

（1）：13-16.

5 Sakaguchi T, Watanabe A, Sawada H. Prognostic value of

cyclin E and p53 experssion in gastric carcinoma[J]. Cancer,