还氧化酶2在大肠癌中表达的临床意义
作者：宋章法 曹国芳 黄学锋 何超
【关键词】 大肠癌 还氧化酶2（Cox-2） 免疫组化
大肠肿瘤的发病率逐年增高，许多流行病学研究证实长期服用非甾体类消炎药（nonsteroidd anti-inflammatory drugs，NSAIDS）可以使人群的结直肠癌的发生率减少40%～50%，且对家族性腺瘤性息肉病患者的息肉数目和大小减少 ［1］ 。有人认为是NSAIDS阻断了还氧化酶（Cyclooxygonase2，Cox-2）的活性，最近实验证实Cox-2抑制了细胞凋亡 ［2］ ，调节血管形成等 ［3］ 。本研究目的在于了解大肠癌中Cox-2的表达以及与临床病及预后之间的关系。
1资料和方法
1.1一般资料 邵逸夫肛肠外科2001年手术切除的84例结直肠癌组织、部分癌旁组织及距切缘5cm正常黏膜组织。其中男性患者37例，女性47例，年龄28～70岁，平均年龄（52.25±10.68）岁;经病理证实包括结肠癌48例、直肠癌36例。Dukes'分期:A期16例、B期19例、C期44例、D期15例。细胞分化程度:高分化10例、中分化67例、低分化7例。所有患者术前均未放疗和化疗，有完整的临床、病理资料，平均随访时间为（58.43±4.64）月。新鲜标本用10%福尔马林液固定，石蜡包埋。
1.2方法免疫组化Envision二步法，一抗为小鼠抗人Cox-2单克隆抗体（由Cayman公司生产）。实验 ［摘要］目的了解还氧化酶2（Cyclooxygenase2，Cox-2）在大肠肿瘤中表达的意义。方法手术切除的84例结直肠癌组织、部分癌旁组织和正常组织，通过免疫组织化学方法检测Cox-2的表达，并分析其表达与肿瘤临床病理学及生存时间的相关性。结果在大肠癌组织中Cox-2的阳性表达明显高于癌旁组织和正常黏膜的表达，且差异有统计学意义（χ 2 =24.36，P<0.05）。Cox-2的表达与大肠癌的浸润深度、淋巴结转移及远处转移密切相关，且差异均有统计学意义（χ 2 分别=4.56、3.93和6.63，P均<0.05）。Cox-2阳性表达的患者比阴性表达患者生存时间短，差别有统计学意义（χ 2 =4.45，P<0.05）。结论 Cox-2在大肠癌中的表达与肿瘤临床病理学及预后相关。
步骤如下:石蜡切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢封闭内源性过氧化酶30min，微波修复抗原10min，加入一抗（1:200）4℃度过夜，PBS洗片后加入二抗40min，DAB显色，苏木素复染，脱水、透明、封片。以PBS代替一抗作为阴性对照，人结肠癌标本作阳性对照。
1.3 结果评定 所有切片由两位病理科医生评定。分别按以下比例记分:染色强度用0（阴性）、1（弱阳性）、2（阳性）、3（强阳性）来表示。肿瘤细胞染色程度记分为0（1%～4%）、1（5%～25%）、2（26%～50%）、3（51%～75%）、4（76%～100%）。染色分数为染色程度与染色强度评分的总和来表示，总分大于等于3分为阳性 ［4］ 。
1.4统计学处理采用SPSS11.0统计软件。Cox-2的表达与临床病理学之间关系采用chi-square检验;生存分析采用Kaplan-Meier分析。设P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 大肠癌组织、癌旁组织及正常黏膜组织中COX2的表达见封三图9、表1。
由表1可见，在大肠癌组织中Cox-2的阳性表达明显高于癌旁组织和正常黏膜的表达（χ 2 值分别为24.36和28.32，P<0.05）。
2.2大肠癌组织中Cox-2的表达与临床病之间的关系见表2。
如表2所示，本研究表明Cox-2的表达与大肠癌浸润深度、淋巴结转移及远处转移密切相关，且均有统计学意义（P均<0.05）;
2.3的表达与生存率的相关性见图2
由图2可见，Cox-2表达阳性患者比表达阴性患者其预后较差，差异有统计学差别（χ 2 =4.45，P<0.05）。
3讨论
还氧化酶是花生四烯酸合成前列腺素过程的一个重要限速酶。人们认为Cox-2是前列腺素合成的主要催化酶，也是NSAIDS的作用靶。在正常状态下Cox-2活性很低，在多数组织中一般检测不到，但在细胞因子、生长因子、癌基因等的刺激下，Cox-2可诱导性表达，并参与炎症、细胞增殖过程 ［5］ 。目前有研究认为，Cox-2在大肠癌中表达比正常黏膜高，这被认为是与Cox-2基因活性增加有关。本研究结果证实了这个观点，84例大肠癌组织的表达明显高于正常组织及癌旁组织，表明Cox-2在大肠癌的发生过程中起了重要作用。同时发现并不是所有的大肠癌都表达阳性，可能是Cox-2在基因水平的转录已经启动，但翻译受到了障碍或翻译出的蛋白质被降解。Cox-2并不表达与所有的大肠癌，如在结肠癌细胞株HCA-7高度表达Cox-2，而在细胞株HCT-116中则不表达，而且并不是所有的癌细胞都均匀表达Cox-2，往往是在众多中度染色的细胞中有部分细胞强染色，这些强染色主要分布在间质交界处或者浸润至固有膜如肌层的细胞中，这与Cox-2具有激活侵袭性蛋白酶的作用相关。
有研究发现，Cox-2在各种类型的肿瘤的新生血管形成，浸润以及转移潜能中起重要作用 ［6］ 。本研究结果表明，Cox-2与大肠癌的淋巴结转移和远处转移 表2Cox-2的表达与大肠癌临床病理参数之间的关系拔出腔镜，拧下Trock上半接头，直视下用直钳夹住标本袋口将标本取出，而无需换5mm腔镜。我们还对一部分不愿接受全麻的病人施行连硬加强化麻醉，取得了良好效果，术中病人无不良反应。以上举措均大大减少病人的住院费用，更有利于LA的普及推广。
腹腔镜手术并非适合所有的阑尾炎患者，如以下情况仍宜行剖腹手术:①有下腹部手术史，腹腔粘连严重的;②妊娠;③伴有弥漫性腹膜炎或严重感染中毒症状，肠腔胀气明显的;④阑尾周围脓肿或阑尾炎性包块;⑤心肺等主要脏器功能障碍者。
本次研究资料LA组与LA组并发症对比因例数太少差异未有统计学意义。罗荆舒等报道LA组并发症明显少于OA组 ［6］ ，差异有统计学意义。
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