RP-HPLC法测定抗骨增生丸中淫羊藿苷的含量
【摘要】 目的:建立抗骨增生丸中淫羊藿苷的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法。结果:淫羊藿苷在0.0618～0.309μg范围内呈良好线性关系（r=1.000），平均加样回收率为99.55%，RSD=0.8%（n=5）。结论:本方法操作简便，重现性好，可作为该制剂的含量测定方法。
【关键词】 反相高效液相色谱法;抗骨增生丸;淫羊藿苷
抗骨增生丸是由熟地黄、淫羊藿、肉苁蓉、狗脊等9味中药材组成的复方水丸制剂，有补腰肾、强筋骨、活血、利气、止痛之功能。原质量标准［1］ 中没有含量测定方法，为了更有效地控制内在质量，本试验尝试用反相高效液相色谱法测定处方中淫羊藿药材中淫羊藿苷的含量，方法操作简便，重现性好，可作为控制该药品内在质量的定量指标。
1 仪器与试药
岛津LC-2010A HT 高效液相色谱仪，紫外检测器;岛津UV-2450紫外分光光度计;sartorius天平;KQ-100型超声波清洗器;甲醇为色谱纯试剂，其它试剂为分析纯;淫羊藿苷对照品（批号为110737-200312，供含量测定用，购自药品生物制品检定所）;抗骨增生丸（市售）。
2 结果与讨论
2.1 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含30.9μg的溶液。
2.2 供试品溶液的制备 取本品50丸，研细，取2g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，滤液作为供试品溶液。
2.3 色谱条件
2.3.1 测定波长的选择 取淫羊藿苷对照品溶液，在200～400nm波长处进行扫描，结果在270nm波长处具有最大吸收，故选择270nm作为检测波长。
2.3.2 系统适应性试验 色谱柱:Diamansil C18 （250mm×4.6mm，5μ）;流动相:乙腈-水（29:71）;柱温35℃;流速:0.81ml.min;测定波长:270nm。根据上述色谱条件，取供试品与对照品溶液分别进样10、5μl，理论塔板数按淫羊藿苷峰应不低于1500。
2.4.1 标准曲线制备 精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别注入液相色谱仪。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。测得回归方程为y=2764551.78x-1120.9（r=1.0000）。表明淫羊藿苷进样量在0.0618～0.309μg内，呈良好的线性关系。
2.4.2 阴性对照试验 按供试品溶液的制备方法制成不含淫羊藿药材的阴性对照溶液，吸取该溶液10μl，注入液相色谱仪中，在与淫羊藿苷相应保留时间处，无干扰峰出现。
2.4.3 稳定性试验 取对照品溶液在0、5、10、15、20h，分别进样5μl，按淫羊藿苷峰面积计，峰面积平均值为424944，RSD为0.2%，结果表明淫羊藿苷对照品溶液在20h内稳定。
2.4.4 精密度试验 取对照品溶液5μl，重复进样5次，淫羊藿苷峰面积的平均值为426412，RSD为0.2%。测定结果表明该方法的精密度良好。
2.4.5 重现性实验 取同批号（批号:050101）的样品按供试品溶液的制备方法平行制备5份，样品和对照品溶液分别进样10、5μl，依法测定，样品中淫羊藿苷含量的平均值为0.33mg.g，RSD为0.8%（n=5），表明本方法重现性良好。
2.4.6 回收率试验 精密称取经同法测定，已知含量的同批号（批号:050101）样品5份，每份1g，再分别加入精密称取的淫羊藿苷对照品适量，按供试品溶液的制备方法处理，样品和对照品溶液分别进样10、5μl回收率，淫羊藿苷的平均回收率为99.55%，RSD为0.8%。表明本方法准确可信。
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［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京:化学出版社，2000:473-474.
