针刺五脏俞调五脏神针法对失眠大鼠脑内抑制性递质GABA及GABAA的含量影响

【摘要】  目的：研究针刺五脏俞调五脏神针法对失眠大鼠脑内抑制性递质GABA及GABAA含量的影响。方法:采用对氯苯丙氨酸(PCPA)腹腔注射的方法制备大鼠失眠动物模型，将大鼠随机分成4组:空白组、模型组、安定组、针刺组。采用酶联免疫法检测下丘脑内抑制性递质GABA和GABAA的含量。结果:该针法可明显增加PCPA所致失眠大鼠下丘脑内抑制性递质GABA及GABAA的含量。结论:针刺五脏俞调五脏神针法可以增加深慢波睡眠量，从而失眠证。

【关键词】  针刺；五脏俞穴；调治；五脏神；失眠；大鼠

　　本实验以临床观察以及公认的失眠动物模型——对氯苯丙氨酸(PCPA)腹腔注射制备失眠大鼠动物模型,观察针刺五脏俞调五脏神针法对大鼠下丘脑内抑制性递质GABA和GABAA的影响，研究针刺五脏俞调五脏神针法干预失眠的机制，为调五脏神治疗失眠学说提出临床及实验依据。

　　1  临床观察

　　1.1  一般资料  本实验观察20例患者均为我院(2006年7月—2007年1月)针灸科门诊患者，均表现为入睡困难或睡后易醒，醒后不能再入睡，或常伴有头痛、头晕、心悸、健忘等症状。全部病例均经相关仪器检查，排除器质性病变。

　　1.2  诊断标准  根据国际标准依国内实际情况而制定的失眠症的诊断标准即精神障碍分类与诊断标准(第3版)(CCMD-3)：①几乎以失眠为唯一的症状，包括难以入睡、睡眠不深、多梦、早睡，或睡后不易觉，醒后不适感、疲乏，或白天困倦。②具有失眠和极度关注失眠结果的优势观念。③对睡眠的数量和质量的不满引起明显的苦恼和社会功能受损。④至少每周发生3次，并至少已1个月。⑤排除躯体疾病和精神障碍症状导致的继发性失眠。

　　1.3  治疗方法  取双侧五俞穴，常规消毒后，采用不锈钢毫针0.35 mm×20 mm，直刺6 mm，留针30 min。每日1次，10 d为1个疗程，2个疗程后疗效。

　　1.4  治疗结果  临床治愈8例，显效5例，有效7例，总有效率100%。

　　2  试验研究

　　2.1  材料与仪器  FSH-ZA型可调高速匀浆机；DDL-5型冷冻离心机；Multiskan MK3型自动酶标仪；PCPA标准品；GABA酶联免疫法试剂盒；GABAA酶联免疫法试剂盒；安定。

　　2.2  实验动物  Wistar大鼠，雄性，体重180-220 g,长春高新动物实验中心提供，许可证号：SCKE-(吉)2003，在长春中医药大学附属新药研究开发实验室常温下饲养1周后用于实验。

　　2.3  实验方法

　　2.3.1  动物分组  取大鼠40只，按随机数字表法分为空白组：空白对照；模型组：腹腔注射PCPA；针刺组：腹腔注射PCPA后，连续5 d给予针刺；安定组：腹腔注射PCPA后，连续5 d给予安定灌胃治疗。

　　2.3.2  造模方法  PCPA临用前按大鼠450 mg/kg用量，用弱碱性生理盐水配置成混悬液备用。除空白组外，其余3组腹腔注射PCPA混悬液(1 mL/100g)，连续注射2 d，正常组不做任何处理，于第1次腹腔注射28-30 h后，大鼠出现昼夜节律消失，白天夜晚活动不停，表明模型复制成功。

　　2.3.3  针刺方法  取穴：肺俞(双)、心俞(双)、脾俞(双)、肾俞(双)。操作:常规消毒后用华佗牌不锈钢毫针0.35 mm×20 mm，直刺6 mm，留针30 min，为1个针刺周期，连续重复5个针刺周期，共计2.5 h，出针后0.5 h处死大鼠。

　　2.4  给药方法  安定片，按成人催眠剂量10 mg/d，用大鼠给药剂量体表面积公式算出大鼠给药剂量为0.92 mg/kg。

　　2.5  大鼠脑内抑制性递质GABA和GABAA含量的测定  脱颈椎处死大鼠,在枕骨大孔处迅速剪断延髓，去颅骨，完全暴露脑组织，取出脑组织，在冰平皿上分离出下丘脑后，在冰冷生理盐水中洗去血液，组织称重后，在冰浴条件下充分匀浆，离心(3000 r/min,10 min)，取上清液待用，应用酶联免疫法进行检测。

　　3  实验结果
   
　　实验结果见表1。

　　表1  针刺对失眠大鼠下丘脑内GABA和GABAA含量的影响（略）

　　注：与模型组比较，★P＜0.05
   
　　表1可见，模型组下丘脑内GABA和GABAA含量明显下降，与空白组比较有显著性差异(P＜0.05)；安定组下丘脑内GABA和GABAA含量升高，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)；针刺组下丘脑内GABA和GABAA含量升高，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)；安定组与针刺组比较差异不明显，但针刺组含量略高于安定组。

　　4  讨论
   
　　失眠不仅是单一的疾病，也是很多疾病的伴发症状。近年来，失眠的发病率呈逐渐上升的趋势，失眠已经成为影响人类身心健康，降低人类生活质量的主要疾病之一，是亟待解决的医学问题。“针刺五脏俞调五脏神”针法通过五脏的背俞穴，调节五脏气血，恢复五脏正常功能，改变人体的病理状态，使阴阳气血平衡，神有所安，继而治疗失眠。GABA是中枢神经系统特有的物质，为中枢神经系统的最重要的抑制性神经递质，对神经系统的神经元具有普遍的抑制作用，具有抗焦虑、抗惊厥、镇痛、调节内分泌等功能。GABA含量的增加对兴奋性和抑制性传导的平衡起着关键作用，进而间接导致对睡眠发生产生特殊影响。实验测定脑内GABA和GABAA的结果表明：①在本研究中，失眠大鼠注射PCPA后，下丘脑内GABA及GABAA受体的含量明显减少，说明PCPA造模后，影响了GABA及GABAA受体的分泌，成为大鼠失眠的原因之一。②经“针刺五脏俞调五脏神”针法治疗5 d后，降低GABA及GABAA受体的含量明显增高，几乎达到正常水平。说明针刺五脏俞，调阴阳五脏针法能调节GABA及GABAA受体的含量，增加深慢波睡眠量，从而达到治疗失眠的目的［1-2］。

【】
  　　［1］魏志榕,王 健.健脑安神针刺法对脑卒中后抑郁大鼠体重及行为学影响的研究［J］.长春中医药大学学报,2007,23(2)：12-13.

　　［2］罗仁洁,黄学军,张小丽,等.电针与帕罗西汀治疗焦虑症的疗效观察［J］.长春中医药大学学报,2007,23(7)：36-37.