哈蟆油对免疫力低下小鼠体内脂肪酸含量的影响
【摘要】 目的：观察不同剂量哈蟆油水溶液对小鼠脾脏中脂肪酸含量的影响。方法:20只小鼠随机分为4组(高、低剂量组、模型对照组及正常对照组)，分别灌胃不同剂量哈蟆油水溶液及生理盐水，10 d后，高、低剂量组及模型对照组深部X射线照射，造成免疫力低下模型，24 h后，断头处死，取脾；皂化法提取脾中脂肪酸,气相色谱测定含量。结果：与模型组比较，高、低剂量组中的两种单不饱和脂肪酸n-7与模型组含量均有极显著性差异，n-3及n-6系脂肪酸与模型组有显著性差异。结论：在小鼠免疫力低下时，哈蟆油具有调节其免疫器官中脂肪酸含量的作用，从而提高其免疫功能。
【关键词】 哈蟆油；脂肪酸含量；免疫功能；小鼠
哈蟆油(Oviductus Ranae)系蛙科动物林蛙(Rana temporaria chensinensis)雌蛙的输卵管干制品［1］,为我国名贵滋补中药，含有氨基酸、脂肪酸等多种营养成分，具有抗应激［2］、抗衰老［3］、防治小儿哮喘［４］、增强免疫力［５］等药理作用。目前，已有实验证明机体免疫力和体内脂肪酸含量有关。本实验主要观察了哈蟆油对小鼠免疫器官中脂肪酸含量的影响，在此基础上探讨其对免疫功能的影响作用。
1 材料
哈蟆油，采于吉林省桦甸市；ICR小鼠，购于吉林大学动物实验室，雌性,体重(20±2)g；深部X射线机，X.S.S-Z型，贵州医疗器械厂制造；气相色谱仪，GC-14C型，日本岛津生产。
2 方法
2.1 哈蟆油溶液的制备 精确称取哈蟆油粉末0.5 g、1.0 g两份，各加50 mL生理盐水(100 mg生药/kg体重、200 mg生药/kg体重),60～70℃水浴加热24 h，常温后匀浆成稀浆液［6］，冰箱保存。
2.2 小鼠的喂养及处理 20只小鼠随机分为4组，每组5只，各组每日灌胃2种剂量哈蟆油溶液(0.1 mL/10g)及生理盐水，隔天称重。10 d后，高、低剂量组及模型对照组深部X射线照射(0.5Cu，1.0Al，5GY)［7］，24 h后，称重，断头处死，无菌取脾。
2.3 脂肪酸提取方法 本实验采用皂化法提取脾脏中脂肪酸：取脾与KOH-乙醇混合加热30 min后，采用乙酸乙酯与正己烷的混合液萃取其中脂肪酸，萃取液与HCl-甲醇加热30 min(100℃)，甲基化后氮气吹干，残留物用100μL正己烷溶解，气相进样1μL测定。
2.4 气相条件 岛津GC-14C气相色谱仪，装配氢火焰离子化检测器,色谱柱为DB-23石英毛细管柱(30×0.25×0.25)，进样口温度为230℃，检测器温度230℃，起始柱温170℃,恒温4 min，再以4℃/min程序升温至220℃，恒温20 min。采用Sigma公司标准脂肪酸进行定性分析鉴定脂肪酸组份，浙大2000色谱数据工作站按峰面积内标法脂肪酸各组份含量。
3 实验结果
根据StatView软件分析25种脂肪酸相对含量,运用统计学方法处理数据,结果见表1。
4 小结与讨论
4.1 从表1可以看出，模型组与正常对照组比较，除饱和脂肪酸及单不饱和脂肪酸中分别有两项外，各项值均与模型组有显著性降低，说明小鼠造成免疫力低下模型后，免疫器官脾中的各种脂肪酸含量均显著下降，由此我们得出结论，机体内的脂肪酸含量与机体免疫功能有密切关系。
4.2 与模型组比较，低剂量组中的两种n-7系单不饱和脂肪酸均与模型组有极显著性差异;n-3系脂肪酸中的十八碳三烯酸、DHA及总量与模型组有显著性差异；高剂量组与模型组比较，其中两种n-7系单不饱和脂肪酸亦与模型组有极显著性差异；n-3系脂肪酸中的十八碳三烯酸、EPA 、DHA及总量与模型组有显著性差异；在n-6系脂肪酸中,十八碳二烯酸及总量与模型组有显著性差异。
4.3 高剂量组与低剂量组相比数值略有提高，但差异不显著；高剂量组与模型组比较，有显著性差异的脂肪酸种类要高于低剂量组，说明哈蟆油对机体免疫力的调节作用与用量成正比例关系；高、低剂量组和模型组同时与正常对照组比较，高、低剂量组的脂肪酸含量接近正常值，说明哈蟆油有助于恢复照射后小鼠的免疫功能。
表1 小鼠脾脏中25种脂肪酸相对含量（略）
注:与正常对照组比较△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较#P＜0.05，##P＜0.01
4.4 从总体来看，哈蟆油确有抵抗放射线照射的伤害及调节免疫力低下小鼠免疫器官中脂肪酸含量的作用，从而提高其免疫功能，但哈蟆油对调节人体免疫力的确实有效剂量，及在多大剂量范围内与用量呈正比关系，尚待研究。
【】
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