灵芝孢子粉在治疗重症急性胰腺炎方面的作用
【摘要】 ［目的］探讨灵芝孢子粉对重症急性胰腺炎（SAP）的作用。［方法］采用胆胰管逆行注射5%牛磺胆酸钠法造成SAP模型；SD大鼠随机分为假手术组、模型组、奥曲肽治疗组、灵芝孢子粉治疗组及灵芝孢子粉奥曲肽联合治疗组；术后分时段观察血清淀粉酶含量的变化，并于给药 7d后处死大鼠,检测血浆内毒素水平，并将胰腺作病检查。［结果］SAP时血清淀粉酶含量和血浆内毒素水平均明显升高，胰腺组织损害严重。经治疗发现，灵芝孢子粉与奥曲肽合用效果更好，与其它治疗组相比差异显著（P<0.05）。［结论］灵芝孢子粉对SAP具有一定的治疗作用，为中西医结合治疗SAP增添新方法。
【关键词】 重症急性胰腺炎 灵芝孢子粉 内毒素
重症急性胰腺炎(SAP)是一种严重危害人类健康的疾病，病情凶险，病死率高，为临床常见急腹症之一。在其治疗方面仍以非手术治疗为主，西药和中药各有优势。本研究旨在探讨灵芝孢子粉和奥曲肽合用的效果，以期为临床治疗提供新思路。
1 材料与方法
1.1 材料 动物：选择成年SD大鼠70只，雌雄各半，体重为220g～280g，由佳木斯大学动物中心提供。药物与试剂：牛磺胆酸钠，美国Sigma公司；奥曲肽，印度太阳药业有限公司；灵芝孢子粉，上海康舟真菌多糖有限公司；淀粉酶（AMS）测定试剂盒，南京建成生物工程研究所；鲎试剂测试盒：上海伊华临床医学科技公司。主要仪器：多管架自动平衡离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；760CRT双光束紫外可见分光光度计，上海精密仪器有限公司。
1.2 方法
1.2.1 动物分组及模型制备 将70只大鼠随机分为五组，每组14只：Ⅰ组为假手术组，Ⅱ组为SAP模型组（简称模型组），Ⅲ组为奥曲肽治疗组（简称奥曲肽组），Ⅳ组为灵芝孢子粉治疗组（简称灵芝组），Ⅴ组为灵芝孢子粉和奥曲肽联合治疗组（简称奥灵联合组）。术前均禁食12h，自由饮水。25%乌拉坦溶液腹腔注射麻醉（4ml/kg）。将其常规备皮、消毒铺巾后，沿腹白线切开入腹，沿十二指肠找到胰腺，确认胆胰管。先将肝门处胆总管暂时结扎，然后在胆胰管开口十二指肠系膜缘对侧肠壁上选一无血管区，用微量注射器（4号针头）穿刺进入胆胰管1cm 左右，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组均以0.1ml/min的速度缓缓推入5%牛磺胆酸钠(ST)0.1ml/100g，推注结束后，拔出注射器轻压穿刺点处持续10min，然后解除肝门处结扎，并确认腹腔无破损；逐层关腹即可。Ⅰ组仅注入生理盐水，剂量和速度同牛磺胆酸钠。
1.2.2 给药方法 （1）各组动物均于术后即时开始给药；（2）Ⅰ、Ⅱ组仅给予生理盐水1ml/100g灌胃，2次/ d；（3）Ⅲ组除生理盐水1ml/100g灌胃外，腹腔注射奥曲肽10μg/kg，2次/d；（4）Ⅳ组除补充生理盐水外，灵芝孢子粉灌胃2g/kg，2次/d；（5）Ⅴ组在补充生理盐水，腹腔注射奥曲肽的同时，灵芝孢子粉灌胃2g/kg，2次/d。
1.2.3 血清淀粉酶(AMS)含量的检测 各组大鼠于术后6h、12h、24h分别检测AMS含量。用乙醚将大鼠浅麻醉后，从其眼内眦静脉处取血，装于洁净试管内，3000rpm离心10min，取血清检测。具体操作步骤按淀粉酶测定试剂盒说明书进行。公式为：
血清淀粉酶AMS（u/dL）=（空白管吸光度-测定管吸光度）/空白管吸光度×800
1.2.4 血浆内毒素含量的检测 大鼠断髓后，将其固定放于超净工作台内，充分暴露心脏，直视下用无菌注射器采集心脏血置于无菌肝素化的试管中，500rpm离心5min后，取血浆置于无热源试管中待检，其它操作步骤严格按照说明书进行。按计算公式A=As-（Ab-Abb）求得吸光度A值，再查对内毒素标准曲线求得内毒素含量。
1.2.5 胰腺组织病理学检查 取出动物胰腺组织，用 10%福尔马林溶液固定，石蜡包埋切片，HE染色后，用光镜观察。
1.2.6 数据统计分析方法 将各组存活动物的所有实验数据都以 “均数±标准差（x±s）” 表示，应用SPSS10.0 统计学软件，采用两样本t检验和多个处理组间单因素方差分析，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 AMS含量的检测结果
2.1.1 模型组与假手术组AMS的定量检测 结果见表1。正常大鼠循环血中含有一定量的淀粉酶，SAP时血清淀粉酶含量显著上升（P<0.05）。
表1 假手术组和模型组在不同时间段血清淀粉酶含量的比较结果（略）
与假手术组比较，*P<0.05
2.1.2 各组与模型组AMS的定量检测 结果见表2、3。奥曲肽组和奥灵联合组均能使血清淀粉酶含量明显下降，与模型组、灵芝组相比，差异显著（P<0.05），说明在降低血清淀粉酶方面这两组均有效，且与奥曲肽组比较，奥灵联合组效果更好（P<0.05）。灵芝组在6h、12h时，血清淀粉酶含量与模型组比较，无统计学意义（P>0.05），在24h时可降低其含量（P<0.05），说明单用灵芝孢子粉不能及时有效降低血清淀粉酶。
表2 模型组和各治疗组在不同时间段血清淀粉酶含量的比较结果（略）
表3 各治疗组间及其与模型组间在不同时段血清淀粉酶含量的显著性比较（略）
在各组间进行显著性比较时，假手术组用 “JS” 表示，模型组用 “MX” 表示，奥曲肽组用 “AQ” 表示，灵芝组用 “LZ” 表示，奥灵联合组用 “AL” 表示
2.2 血浆内毒素含量的检测结果
2.2.1 模型组与假手术组血浆内毒素含量的定量检测 结果见表4。假手术组大鼠体循环内存在极微量的内毒素，SAP模型组与假手术组相比，血浆内毒素含量明显升高（P<0.05）。
表4 模型组与假手术组血浆内毒素含量的检测结果比较（略）
与假手术组比较，*P<0.05
2.2.2 各治疗组与模型组血浆内毒素含量的定量检测 结果见表5。各治疗组与模型组比较，均能使血浆内毒素水平降低（P<0.05）；奥灵联合组与其他治疗组相比，效果更明显，差异显著（P<0.05），说明在降低内毒素水平方面，灵芝孢子粉与奥曲肽合用效果更好。
表5 各治疗组与模型组血浆内毒素含量的检测结果比较（略）
各组间显著性比较均为，P<0.05
2.3 胰腺组织病检查结果 SAP模型组胰腺结构不清，点状或局灶性坏死；炎性细胞大量浸润,红细胞渗出极明显。经奥曲肽和灵芝联合应用治疗后，病变明显减轻。
3 讨论
重症急性胰腺炎发病机制复杂，随着肠屏障功能受损，引起细菌及内毒素移位，从而造成胰腺及胰周坏死感染［1］。在SAP病程中，由于多种因素可造成肠缺血，肠壁血管通透性增加，乃至发生肠麻痹肠梗阻，继发肠道细菌过度生长和肠黏膜屏障破坏，一方面肠道细菌移居至坏死胰腺组织和其他脏器并释放内毒素，另一方面肠道内毒素通过受损的肠黏膜屏障吸收，导致内毒素血症。内毒素既可加重原有胰腺损害，又可诱发全身代谢和血液动力学紊乱，参与多种并发症的发生、，严重影响胰腺炎患者的预后［2］。临床观察表明，内毒素血症的程度与急性坏死型胰腺炎的严重度密切相关。因此，促进肠蠕动，调整肠道微生态，加强内毒素排泄，保护肠道屏障功能，从而减轻内毒素血症成为急性胰腺炎治疗的有效手段之一。
奥曲肽是临床治疗胰腺炎的常用药，其能迅速、有效地阻止胰酶的释放和活化，阻断胰腺自身组织的消化［3］。灵芝孢子粉是灵芝的繁殖器官，集中了灵芝的精华，因而具有比灵芝更好的药理作用。研究已证实了灵芝孢子粉具有抗癌、免疫、保肝、抗炎、清除自由基、活血化瘀和改善胰脏血液循环等功能［4?5］。本研究结果显示，经灵芝孢子粉与奥曲肽联合应用治疗后，胰腺腺泡明显恢复。因此推测其SAP的机制可能为：保护肠道屏障功能、活血化瘀、保护胰腺细胞等。
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［4］ 金春花，等.灵芝多糖活血化淤作用实验研究［J］.中草药，1998，29(7)：470.
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