乳腺癌腋淋巴结微小转移与C?erbB?2，nm23基因表达关系的相关性研究

                          作者：王玉 景娜 永强 王晋芬 

【摘要】  目的：探讨乳腺癌腋淋巴结微小转移与C?erbB?2，nm23基因表达的关系。方法：采用免疫组织化学S?P法对78 例淋巴结常规HE染色无癌转移的乳腺癌淋巴结1 269枚进行上皮细胞角蛋白(CK?19)表达和癌组织进行C?erbB?2，nm23基因表达的检测。结果：淋巴结CK?19阳性率为4.25％，其病理阳性率为28.2％，C?erbB?2阳性率为43.6％，nm23阳性率为80.8％，CK?19阳性组的C?erbB?2阳性率明显高于CK?19阴性组(P＜0.05)。CK?19阳性组的nm23阳性率明显低于cK?19阴性组(P＜0.05)。CK?19阳性率与患者月经状况、病理类型、临床分期、激素受体状况无关(P＜0.05)。结论：乳腺癌腋淋巴结CK?19表达与癌组织C?erbB?2基因表达呈正相关，与癌组织nm23基因表达呈负相关，与患者月经状况、临床分期、病理类型、激素受体状况无关。

【关键词】  乳腺癌 腋淋巴结 微小转移 C?erbB?2 nm23

    Abstract  Objective：To investigate micrometastasis in axillary lymph nodes and its relationship with c?erbB?2，nm23 genes expressin of the tumor tissue in breast cancer.Methods：Total of 1 269 lymph nodes and carcinoma tissues from 78 lymph node?negative cases comfimed by routine pathology were examined by immunohistochemical staining using CK?19 and c?erbB?2，nm23 respectively.Results：The positive rate of CK?19 of axillary lymph node was 4.25％.Micrometastasis were observed in 22 cases of the 78 patients (28.2％).The positive rate of c?erbB?2 was 43.6％，the positive rate of nm23 was 80.8％in breast cancer tissues.The positive rate of c?erbB?2 in the patients with micrometastasis was significantly higher than that in the patients without micrometastasis(P＜0.05).The positive rate of nm23 in the patients with micrometastasis was significantly lower than that in the patients without micrometastasis(P＜0.05).There was no significant relationship with patient menstruation condition，clinical stage，pathologic type，hormone condition irrelevant to CK?19 expression.Conclusion：The expression of CK?19 of axilliariy lymph node is positive relevant to C?erbB?2 gene with cancer，neganative relevant to nm23 gene with cancel The expression of CK?19 of axilliariy lymph node is irrelevant to patient menstruation condition，clinical stage，pathologic type，hormone condition.

    Key words  breast cancer；axillary lymph node；micrometastasis；c?erbB?2；nm23

    近年来，随着分子生物学的和应用，对于癌转移机制的研究也更加深入，国内外对乳腺癌淋巴结转移，C?erbB?2基因，nm23基因研究的报道不完全一致，本文应用免疫组织化学法，对78 例常规HE染色无癌转移的乳腺癌淋巴结及原发组织分别进行了C?erbB?2和细胞角蛋白(CK)?19，nm23检测，重点探讨乳腺癌淋巴结CK?19阳性率与C?erbB?2，nm23基因表达的关系及与乳腺癌患者月经状况、临床分期、病理类型、激素受体状况的关系。

    1  资料与方法

    1.1  材料

    标本取我院2004年1月—2006年5月间收治的淋巴结常规HE染色无癌转移的乳腺癌病例78 例，均经病理证实为乳腺癌。均为女性，年龄25～72 岁。其中绝经前53 例，绝经后25 例，根据国际抗癌联盟乳腺癌TNM临床分期，Ⅰ期31 例，Ⅱ期35 例，Ⅲ期11 例，Ⅳ期1 例。按WHO乳腺肿瘤组织学分类，浸润性非特殊类型型癌58 例，浸润性特殊类型癌8 例，非浸润性癌12 例。ER(＋和/或PR(＋54 例，ER(－)和PR(－)24 例。全部病例均经过了以手术为主的综合。

    1.2  方法

    采用过氧化酶标记的链酶卵白素染色方法(S?P法)。鼠抗人CK?19，C?erbB?2，nm23单克隆抗体及相关试剂购自北京中山生物技术有限公司。

    1.3  结果判定

    CK?19抗原位于细胞浆内，阳性细胞为细胞浆内存在棕黄色颗粒，阴性细胞不着色，结果判断依据：淋巴结内发现单个或不超过5个阳性细胞视为微转移阳性淋巴结；只要有1个阳性淋巴结者就视为阳性病例。C?erbB?2，nm23阳性染色为位于细胞浆的棕黄色颗粒。结果判定依据：一为阴性病例，整个细胞未见细胞染色或着色细胞数在20％以下；(＋为阳性病例，着色细胞数≥20％。

    1.4  统计学方法

    应用SPSS11.0统计软件包进行χ2检验。P＜0.05为差异显著性。

    2  结    果

    2.1  CK?19与C?erbB?2及nm23基因的关系

    CK?19阳性淋巴结数54个，阳性率为4.25％(54/1 269)。CK?19阳性病例数22 例，阳性率为28.2％(22/78)；C?erbB?2阳性率为43.6％(34/78)，nm23阳性率为80.8％(63/78)。CK?19与C?erbB?2、nm23的关系见表1。表1  CK?19与C?erbB?2，nm23基因的关系

    2.2  CK?19的表达与乳腺癌病理、临床资料的关系(见表2)表2  CK?19与月经状况、病理类型、激素受体的关系由表2显示，CK?19阳性率与患者的月经状况、病理类型、临床分期、激素受体状况无关(P＞0.05)。

    3  讨    论

    淋巴结转移是无远处转移乳腺癌TNM分期的重要依据。淋巴结有转移或转移数目越多，肿瘤分期越晚预后越差。肿瘤分化程度也是影响乳腺癌预后的重要因素。组织细胞分化越低，肿瘤恶化程度越高，预后越差。肿瘤细胞某些分子的表达与否和表达的高低是细胞分化程度的具体表现。因此，许多学者通过检测乳腺癌肿瘤细胞的某些分子表达来评价疾病的预后［1，2］，肿瘤转移的初期表现为微小癌灶，在常规检测中容易被忽视，临床常见部分常规检测淋巴结阴性患者手术后短期内出现肿瘤扩散，应用特异性标记物检测，有助于提高对癌症患者淋巴结转移真实情况的判断。

    细胞角蛋白(CK)广泛存在于上皮细胞，在细胞恶性转化和肿瘤发生过程中，角蛋白继续存在于上皮肿瘤内，这一特点为角蛋白的应用提供了理论依据。由于乳腺癌绝大多数来源于上皮组织，上皮组织的某些特异性标记物就可以作为淋巴结中微转移病灶的标记物。其中CK?19在乳腺癌中有较稳定的表达。报道，常规病理HE染色无癌转移的乳腺癌经IHC检测微小转移病灶阳性率为10％～30％，淋巴结数阳性率约4％［3］。本研究结果CK?19病例阳性率为28.2％(22/78)，淋巴结数阳性率为4.25％(54/1 269)，与文献报道相近。本研究结论认为，术后淋巴结微小转移的检测是很有必要的，建议作为一种常规检查应用于临床。本研究显示：CK?19阳性组中C?erbB?2阳性率明显高于CK?19阴性组(P＜0.05)，提示乳腺癌腋淋巴结微小转移的发生于C?erbB?2表达呈正相关，预后不良。本研究还提示CK?19表达与乳腺癌患者的月经状态、临床分期、病理类型、激素受体状况无关(P＞0.05)。

    C?erbB?2基因又称HER?2或neu，它位于17号染色体的长臂，为185 KD的跨膜蛋白，与人类表皮生长因子受体具有高度的同源性。目前认为C?erbB?2基因与乳腺癌发生密切相关，参与肿瘤细胞的生长调控，增殖与分化。多数学者认为其过度表达提示肿瘤恶性程度高，预后差［4，5］。本研究中，CK?19的表达情况与C?erbB?2的表达有关，提示C?erbB?2阳性的肿瘤组织中细胞角蛋白的合成增加。

    nm23基因是从转移潜力不同的鼠黑色素瘤中分离出来的一种被认为与肿瘤转移能力相关的基因，位于17号染色体长臂远端(7/q21.3)，有结构功能密切相关的基因簇构成。人类nm23基因中存在两个亚型，即nm23H1和nm23H2，其氨基酸序列具有88％同源性，编码的蛋白产物为核苷二磷酸激酶(NDPK)，主要存在与细胞质和质膜上，是一种能催化多种反应具有复杂生物学功能的酶，主要通过影响微管装配，信号传导，转译调节及细胞黏附而维持细胞的正常分裂状态，从而抑制癌细胞的转移。在人乳腺癌中，nm23基因的缺失较常见。Belev等［6］研究发现，nm23的表达率与腋窝淋巴结转移呈负相关。刘红等［7］，认为nm23基因表达与乳腺癌远处转移与腋淋巴结转移呈显著负相关，可作为一个独立的预测肿瘤远处转移的指标［8］。在CK?19阳性组中，nm23阳性率明显低于CK?19阴性组，说明淋巴结转移的发生于nm23基因的丢失呈负相关，与文献报道一致［9］。

【文献】
  ［1］谢树瑞，谢培仕，谢艳芳.Bcl?2，C?erbB?2和ER在乳腺癌和癌旁组织中的表达及意义［J］.广东医学，2004，25(8)：947?948.

［2］王玉，王晋芬.Ki?67和PCNA在乳腺癌的表达［J］.临床医药实践，2008，17(5)：334?335.

［3］郭文斌，白晓刚，庄熙晶，等.I期乳腺癌腋淋巴结微小转移与nm23表达的研究［J］.中华普通外科杂志，2000，15(9)：547?549.

［4］Tsutsui S，Ohno S，Murakami S，et al.Prognostic value of c?erbB?2 expression in breast cance［J］.Surg Oncoi，2002，79(4)：216?231.

［5］刘祖宏，徐文兵，谢丽霞.乳腺癌C?erbB?2基因与雌激素和激素受体的关系及其意义［J］.肿瘤医学，2004，12(1)：25?26.

［6］Belev B，Alefic I，Vrbanec D，et al.Nm23 gene product expression in invasive breast cancer immunohistochemical analysis and clinicopathological correlatiorl［J］.Acta Oncol，2002，41(4)：355?361.

［7］ 刘红，毛慧生，傅西林，等.nm23基因表达与乳腺癌远处转移及预后相关性的研究［J］.中华肿瘤杂志，2001，23(3)：224?227.

［8］黄俊辉，海健，李洋，等.乳腺癌组织中c?erbB?2，nm23的表达及其意义［J］.普通外科杂志，2004，13(11)：63?65.

［9］王玉杰，郭文斌，姜清华，等.乳腺癌腋淋巴结微小转移灶与nm23基因表达的研究［J］.中国普通外科杂志，2003，12(5)：351?353.