上皮型钙黏素E和β?连环蛋白在胰腺癌中的表达情况

【摘要】  目的：研究上皮型钙黏素E(E?cad)和β?连环蛋白(β?cat)在胰腺癌中的表达情况及其临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测上皮型钙黏素E和β?连环蛋白在胰腺癌中及癌旁非肿瘤胰腺组织中的表达情况。并分析其与临床病理因素的关系。结果：上皮型钙黏素E和β?连环蛋白在胰腺癌组织中的表达明显低于癌旁非肿瘤胰腺组织。结论：上皮型钙黏素E和β?连环蛋白的低表达可能参与胰腺癌的转移，联合检测对判断胰腺癌的诊断和预后有一定价值。

【关键词】  胰腺癌 免疫组织化学 上皮型钙黏素E β?连环蛋白

    Abstract  Objective：This experiment is to explore the expression and clinical significance of β?catenin and E?cadherin in pancreatic cancer tissue and cells.Methods：The expression of β?catenin and E?cadherin in pancreatic carcinomas and adjacent noncancer tissues were studied by immunohistochemistry，and their relationship to clinicopathological characteristics were analyzed.Results：In pancreatic carcinomas tissues showed reduced β?catenin and E?cad expression which compared with adjacent non?cancer tissues.Conclusion：The expression of β?catenin and E?cadherin may together be involved in the development and progression of pancreatic cancer.The combined measurement of these two proteins may be useful for determination of metastatic potency of pancreatic carcinoma.

    Key words  pancreatic carcinoma；immunohistochemistry；E?cadherin；β?catenin

    胰腺癌是常见的胰腺肿瘤，确诊时多属晚期，失去根治性手术时机，确诊后患者1年生存率不到10％，5年生存率＜1％，是预后最差的恶性肿瘤之一。本文探讨上皮型钙黏素E和β?连环蛋白在胰腺癌组织中的表达以及与胰腺临床分期、淋巴结转移、组织浸润等生物学特征的关系，为其在胰腺癌的预防、早期诊断中的作用提供依据。

    1  资料与方法

    1.1  一般资料

    选择山西医科大学第一病理科2002年—2007年胰腺癌根治术后存档蜡块63 例，经组织病证实为导管腺癌。所有病例术前均未行放疗化疗。男40 例，女23 例；年龄38～69 岁。高分化癌14 例，中分化癌26 例，低分化癌23 例。临床病理分期按照国际抗癌联盟(UICC)联合制定的TNM分期方案进行。其中Ⅰ期9 例，Ⅱ期18 例，Ⅲ期25 例，Ⅳ期11 例，26 例癌旁非肿瘤胰腺组织作为对照组。

    1.2  试剂

    兔抗人β?cat单克隆抗体、E?cad单克隆抗体，DBA显色试剂盒，辣根酶标记链霉卵白素均购自博士德生物工程有限公司；免疫组织化学玻片山西医科大学寄生虫教研室提供。

    1.3  胰腺癌组织的免疫组织化学

    每一蜡块标本连续切片2张，厚4 μm。切片脱蜡，水化后行免疫组化染色。严格按照说明书操作。抗体工作浓度为1∶100，后用二氨基联苯氨(DAB)染色，苏木素复染。以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗设为阴性对照，已知阳性标本作为阳性对照。阳性标本显色后，立即全部终止反应。

    1.4  结果判断

    每张切片在400倍光学显微镜下连续找5个视野，每个视野计数100个上皮细胞。E?cad和β?cat表达分为阳性表达和阴性表达：超过90％的肿瘤细胞呈现胞膜均质性着色视为阳性表达；阳性细胞＜90％、无阳性细胞和胞浆着色均视为阴性表达。

    1.5  统计学方法

    结果以SPSS13.0软件进行χ2检验以及Spearman等级相关分析。P＜0.05为差异有显著性。

    2  结    果

    2.1  上皮型钙黏素(E?cad)和β?连环蛋白(β?cat)

    β?cat在胰腺癌中的阴性表达率为61.90％，癌旁非肿瘤胰腺组织中均呈现阳性表达，阴性表达率为0.00％，两者差异有显著性(P＜0.05)。E?cad在胰腺癌组织中阴性表达率为57.14％，癌旁非肿瘤胰腺组织均呈现阳性表达，阴性表达率为0％，两者差异有显著性(P＜0.05)。

    2.2  β?cat和E?cad的表达与胰腺癌临床病理因素的关系

    β?cat，E?cad阴性表达率在低分化组和高中分化组之间差异无显著性(P＞0.05)。两者的阴性表达率随着TNM分期增高；Ⅲ、Ⅳ期远高于Ⅰ、Ⅱ期(P＜0.05)；有淋巴结转移组阴性表达率远高于无淋巴结转移组(P＜0.05)(见表1)。表1  β?cat、E?cad的表达与胰腺癌临床病理因素的关系

    2.3  β－cat和E?cad表达的相关性

    β?cat阴性表达同时E?cad阳性表达者8 例，β?cat阴性表达而E?cad阴性表达者32 例，β?cat阳性表达而E?cad阳性表达者21 例，β?cat阳性表达同时E?cad阴性表达者4 例。β?cat和E?cad表达均呈正相关(χ2＝25.502，r＝0.626，P＜0.05)。

    3  讨    论

    E?cadherin属于钙依赖黏附素家族，是一类介导同种细胞间相互黏附的钙依赖性跨膜糖蛋白，在调节胚胎形态发生和维持组织结构完整性与极性方面起着重要作用［1］。在肿瘤细胞的培养液中加入E?cad抗体抑制其功能后，癌细胞由聚集状态变为散在性生长并发生成纤维细胞样改变，细胞运动增强，侵袭性增加，说明E?cad对肿瘤细胞的浸润有抑制作用。β?连环蛋白(β?catenin)的正常表达位于细胞膜下的细胞与细胞连接处，是一种重要的胞内糖蛋白，其相对分子质量为92 000，与连环蛋白家族中的α?catenin，??catenin和P120ctn在氨基酸组成中具有数个相同序列的结构域，其作用是与细胞表面E?cadherin的胞内肽段结合，再通过α?catenin与细胞内的肌动蛋白细胞骨架连接，介导细胞与细胞间的黏附［2］。

    在肿瘤的研究中β?catenin的降解减少，在细胞内积聚并进入细胞核与Tcf/Lef结合成β?cat?Tcf/Let复合物时，激活靶基因包括C?mg?c基因C?jun基因，和fru?l基因等原癌基因及CyclinDl基因。同时因β?cat基因变异或者是β?cat的异位磷酸化致使E?cad/cat复合体和细胞骨架脱离，细胞粘连松散，两种作用共同导致了肿瘤细胞的浸润转移［3］。

    本研究检测了E?cadherin和β?连环蛋白在胰腺癌组织中的表达情况，结果显示E?cadherin和β?连环蛋白的低表达与胰腺癌的分化、分期及淋巴结转移有关。多种机制可导致肿瘤细胞E?cad和β?cat表达下调或其黏附系统功能障碍。使肿瘤细胞的同型细胞间黏附力降低，从而容易脱落形成转移。本研究证明β?连环蛋白与E?cadherin在胰腺癌组织中呈正相关。故认为，临床上联合检测胰腺癌组织中β?连环蛋白与E?cadherin的表达可能成为判断胰腺癌恶性程度的新指标。

【】
  ［1］Zantek N D，Azimi M，Fedor?Chaiken M，et al.E?cadherin regulates the function of the EphA 2 receptor tyrosine kinase［J］.Cell Growth Differ，1999，10(9)：629?638.

［2］Ghadimi B M，Behrens J，Hoffmann I，et al.Immunohistological analysis of E?cadherin，alpha?，beta and gamma?catenin expression in colorectal cancer：implications for cell adhesion and signaling［J］.Eur J Cancer，l999，35(1)：60?65.

［3］Kikuchi A.Regulation of beta?catenin sign aling in the Wnt pathway［J］.Biochem Biophys Res Commun，2000，268：243?248.