HPLC-ELSD测定醒脑再造胶囊中黄芪甲苷的含量
【摘要】 目的 建立醒脑再造胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法。方法 采用HPLC-ELSD法,Phenomenex Gemini C18色谱柱(250 mm×4.60 mm,5 μm),流动相：乙腈-水(36∶64)；流速：1.0 mL/min；漂移管温度：105 ℃；载气流速：2.7 L/min。结果 黄芪甲苷在0.486～2.43 μg范围内呈线性关系,r＝0.999 7；平均回收率为100.5%(n＝6),RSD＝0.3%。结论 本方法准确、灵敏度高、重复性好,可作为该药品的质量检测标准。
【关键词】 醒脑再造胶囊；黄芪甲苷；高效液相色谱-蒸发光散射检测法；含量测定
Abstract：Objective To establish a quantitative method for Astraloside in Xingnao Zaizao Capsules by HPLC-ELSD. Methods HPLC-ELSD separation was achieved on Phenomenex Gemini C18 column (250 mm×4.60 mm, 5 μm) and mobile phase consisted of acetonitrile-water (36∶64). The flow rate was 1.0 mL/min, drift tube temperature was 105 ℃, and gas flow rate was 2.7 L/min. Results The calibration curve was linear in the range of 0.486～2.43 μg (r＝0.999 7). The average recovery rate was 100.5% (n＝6), RSD was 0.3%. Conclusion The method is rapid, accurate and reliable, and the method can be used as the quality standard for Xingnao Zaizao Capsules.
Key words：Xingnao Zaizao Capsules；Astraloside；HPLC-ELSD；content determination
醒脑再造胶囊收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第4册,具有化痰醒脑、祛风活络功效。用于神志不清、语言蹇涩、口角流涎、肾虚痿痹、筋骨酸痛、手足拘挛、半身不遂及脑血栓形成的恢复期和后遗症[1]。参照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)中黄芪甲苷的含量测定方法[2],本试验建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)测定醒脑再造胶囊中黄芪甲苷的含量。本方法准确,灵敏度高,重复性好,可用于醒脑再造胶囊的质量控制。
1 仪器与试药
日本岛津LC-10AT VP高效液相色谱仪,日立ALLTECH ELSD2000型蒸发光散射检测器,SPD-10AT VP型自动进样器。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110781-200512；规格：20 mg,供含量测定用)。醒脑再造胶囊由吉林华侨药业股份有限公司提供(批号20060903、20061010、20061221)。乙腈为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.60 mm,5 μm),流动相：乙腈-水(36∶64)；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；日立ALLTECH ELSD2000型蒸发光散射检测器,漂移管温度：105 ℃；载气流速：2.7 L/min[3]；理论塔板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4 000,分离度(R)＞1.5。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取黄芪甲苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品,混匀,研细,取约0.7 g,置索氏提取器中,加甲醇适量,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流4 h。提取液回收甲醇并浓缩至干,残渣加水10 mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取4次,每次40 mL。合并正丁醇提取液,用氨试液充分洗涤2次,每次40 mL。弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加水10 mL使溶解,放冷。通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5 cm,长12 cm),以水50 mL洗脱,弃去水液,再用40%乙醇30 mL洗脱,弃去洗脱液,继用70%乙醇80 mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,用甲醇溶解并转移至5 mL量瓶内,加甲醇至刻度,摇匀,即得。黄芪甲苷对照品、样品和阴性对照色谱图见图1。
2.4 线性关系考察
精密称取黄芪甲苷对照品的甲醇溶液(0.097 2 mg/mL),分别精密吸取5、10、15、20、25 μL测定,以对照品质量的自然对数为横坐标,以峰面积的自然对数为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,黄芪甲苷在0.486～2.43 μg范围内线性关系良好,其线性对数方程为：Y＝1.952 6X＋13.628 6(r＝0.999 7)。