健儿厌食康颗粒质量标准研究

【摘要】目的　建立健儿厌食康颗粒质量标准。方法　对麦芽、山药、莲子进行定性鉴别。对颗粒剂中粒度、水分、溶化性、装量差异进行检查，采用薄层扫描法测定颗粒剂中熊果酸含量。结果　熊果酸点样量在0.66～3.30g范围内线性关系良好。同板精密度为1.3%异板精密度为2.6%。平均回收率为96.5%（RDS为1.6%）。结论　方法简便可靠，可用于健儿厌食康颗粒的质量控制。
【关键词】熊果酸　薄层扫描法　质量控制
        健儿厌食康颗粒具有补脾益气、消食健胃、增进乳食之功效，主治脾胃气虚型小儿厌食症。主要由山药、鸡内金、莲子、山楂、六神曲、麦芽等10味中药组成的制剂，临床应用四十余年，组方合理，疗效确切，本文对健儿厌食康颗粒质量控制方法进行了研究，建立了质量标准，为本品新药研发提供质量控制方法。
        1　仪器与试药
        CS-930型双波长薄层扫描仪（日本岛津）；健儿厌食康颗粒（辽宁中医学院，批号021201、021202、021203、030301、030302）；熊果酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号742-9405，含量为99.7%）；麦芽、山药、莲子（购自沈阳天益堂大药房）硅胶G（青岛海洋化工厂 200-300目）；羧甲基纤维素钠（沈阳试剂厂）；氯仿、丙酮、无水乙醇等均为分析纯
        2　方法与结果
        2.1 性状：本品为颗粒剂，为黄棕色至棕色颗粒，味微苦。
        2.2 鉴别
        2.2.1 麦芽
        取本品，置显微镜下观察：稃片外表皮细胞黄色或淡黄色，纵列，常由一个长细胞与两个细胞相间排列；长细胞壁较厚，波状弯曲，木化；短细胞一大一小，大者内含棕色物；可见单细胞或其脱落痕。
        2.2.2 山药
        取本品10克，加无水乙醇30ml,回流提取1小时，滤过，滤液浓缩至2ml，加盐酸0.5ml，加水20ml,置水浴上蒸干，放冷，残渣加乙醚20ml溶解，滤过，滤液挥尽乙醚，残渣加无水乙醇1ml溶解，作为供试品溶液。另取山药粉末1g同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮（10：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，在105℃烘至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
        2.2.3 莲子
        取本品5g，加70%乙醇30ml，冷浸4小时，滤过，滤液作为供试品溶液。另取莲子对照药材0.1g，加70%乙醇1ml，冷浸4小时，滤过，滤液作为对照药溶液。吸取上述两种溶液各4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-醋酸-水（4：0.5：4）上层液为展开剂，展开两次，取出晾干，喷以α-萘酚试液，于105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色斑点。
        2.3 检查
        2.3.1 粒度：取本品5批，照《中国药典》（2005年版二部附录IN颗粒剂项下的“粒度”检查。[1]结果表明，本品不能通过一号筛和能通过五号筛的总和未超过供试量的15%，符合中国药典有关规定。
        2.3.2 水分：取本品3g，照水分测定法第一法（《中国药典》2000年二部附录Ⅷ M）测定颗粒剂的含水量，[2]结果表明，本品5批含水量均不大于5%，符合中国药典有关规定。
        2.3.3 溶化性：取本品5批，照《中国药典》（2005年版二部附录IN颗粒剂项下的“溶化性”检查。结果表明，本品能够混悬均匀，并未见有焦屑等异物。符合中国药典有关规定。
        2.3.4 装量差异：取本品5批，每批10袋，照《中国药典》（2005年版二部附录IN颗粒剂项下的“装量差异”方法检查，结果表明，本品装量差异均在±7%以内，符合中国药典有关规定。
        2.4 薄层扫描法测定健儿厌食康颗粒山楂中的熊果酸含量
        2.4.1 色谱条件
        薄层板：取含0.2%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G板，厚度0.3mm，室温阴干，105℃活化30分钟；展开剂：氯仿-丙酮-冰醋酸（18：2：0.2）；展开方式：上行展开，展距12cm；显色剂：10%硫酸无水乙醇溶液，显色后105℃烘约5-10分钟；薄层扫描测定参数：λS=520nm，λR=700nm，SX=3反射式锯齿扫描。
        2.4.2 溶液的制备
        2.4.2.1 熊果酸对照品溶液的制备：
        精密称取熊果酸对照品适量，用无水乙醇配制成含熊果酸约0.6mg•mL-1的溶液，即得。
        2.4.2.2 样品溶液的制备：
        取本品5g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣加无水乙醇溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
        2.4.2.3 阴性对照液的制备：
        取山药（炒）、鸡内金（炒）、大枣、六神曲（炒）各1.5g，薏苡仁（炒）、莲子、茯苓、麦芽（炒）、莱菔子（炒）各1g，置索氏提取器中，加乙醚适量，加热回流提取4小时，提取液回收乙醚至干，残渣加无水乙醇溶解，定量转移至5ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。
        2.4.3 阴性干扰试验
        精密吸取对照品溶液2uL与4uL，供试品与阴性液各6uL，点样于同一硅胶G薄层板上，按2.4.1项下色谱条件展开，晾干，显色测定，绘制薄层光谱图。结果表明，对照品与供试品，可见光区内吸收峰峰形、峰位完全相同，且在520nm波长处有最大吸收，阴性液在此波长下无干扰。在与对照品色谱相应位置处，供试品具有相同位置的色谱峰，阴性液在此峰位无吸收。
        2.4.4 标准曲线绘制
        精密称取熊果酸对照品3.3mg，置5ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0uL，点样于同一硅胶G薄层板上，按2.4.1项下色谱条件测定，以进样量（ug）为横坐标，以色谱峰面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理，得回归方程为Y=19606.4x-2771.8（r=0.9990），表明熊果酸点样量在0.66～3.30g范围内线性关系良好。
        2.4.5 精密度试验
        取样品5g，精密称定，按2.4.2.2项下方法制备供试品溶液。
        2.4.5.1 同板精密度试验
        精密吸取同一供试品溶液6uL，在同一硅胶G薄层板上，重复点样6次，按2.4.1项下色谱条件展开，测定，结果表明同板精密度为1.3%。
        2.4.5.2 异板精密度试验
        精密吸取供试品溶液6uL、对照品溶液（0.4mg•mL-1）2uL与4uL，分别点予6块硅胶G薄层板上，按 2.4.1项下色谱条件展开，测定，结果表明异板精密度为2.6%。
        2.4.6 稳定性试验
        取样品5g（批号：021201），精密称定，按2.4.2.2项下方法制备供试品溶液。将供试品溶液分别间隔不同时间测定，结果见表1。结果表明，供试品溶液在2小时内测定，熊果酸含量无变化。
        Table 1   Result of stability test
          
        2.4.7 重复性试验
        取样品（批号为021201）6份，分别照2.4.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.4.1项下色谱条件展开，测定，结果见表2。
        Table 2   result of repeating experiment