葛根中葛根素的成份的分析

    2.1.8 回收率考察精密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份,20mg/份,精密称定后,每份加入浓度为0.204mg/ml的对照品溶液2.5~3.3 ml,按“供试品溶液制备”项下操作,精密吸取10 μl,进样,计算回收率。
    2.1.9 样品测定按“供试品溶液制备”项下操作,制备各样品溶液,精密吸取10μl,进样,在所选色谱条件下测定,外标两点法计算含量。
    2.2 紫外分光光度法测定葛根中总黄酮含量
    2.2.1 线性关系考察精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。移取0.2,0.4,0.5,0.6,0.8ml置于10ml量瓶,水定容,为紫外测总黄酮用对照品溶液。
    以溶液浓度为横坐标,吸收度为纵坐标,得线性方程:Y= 0.078X+0.0152,r=0.9998。表明总黄酮浓度在4.08~16.32μg/ml范围时与吸收度线性关系良好。
    2.2.2 供试品制备 方法1:分别称取柴葛、粉葛4.5g,置于圆底烧瓶,乙醇回流提取3次,40ml/次,时间均为1h。合并3次滤液并浓缩置25ml量瓶,乙醇定容。取1ml用乙醇定容于100量瓶,再取1ml上清液于10ml量瓶,水定容,待测。以1ml乙醇加水定容于10ml量瓶中为空白对照。
    方法2:取上述液相用索氏提取法制得的待测品0.4ml,置于10ml量瓶,水定容,待测。
    2.2.3 吸收波长考察与样品测定在200~800nm间紫外扫描浓度为8.16μg/ml的葛根素对照品溶液。在249~251nm处有最大吸收,选用250nm测定。分别测定两种方法制得4个样品。
    3 讨论
    HPLC法对不同产地的柴葛、粉葛中的葛根素的含量进行了测定,表明柴葛中葛根素含量约为粉葛的3倍,紫外测总黄酮含量表明,柴葛中葛根素量占总黄酮量的55%左右,粉葛中葛根素量占其总黄酮量的48%左右。同时比较了不同提取方法对葛根素和总黄酮含量测定的影响,发现回流提取法得到的葛根素含量较高,更有利于其提取。
    在葛根素的提取中使用体积分数为30%的乙醇,是通过实验与参阅文献得出的结果。此时总黄酮中的酚羟基主要以离子形式存在,HPLC色谱图为单峰,而使用60%乙醇提取时,总黄酮中酚羟基以离子与分子形式共存,色谱图为双峰。
    葛根素HPLC图谱中葛根素峰易拖尾,分离度低,本文研究了甲醇:水不同配比对峰形、分离度和保留时间的影响,体积比为25∶75时葛根素峰拖尾,与后面的小峰分离度为1.3,体积比为35∶65时葛根素峰与前峰易重合。甲醇∶水比(V/V)为32∶68时,在样品分析中葛根素与其它峰均能达到基线分离,保留时间适中,柱效高,故选用为流动相。
    此外,比较柴葛与粉葛的图谱,可发现其在葛根素及其它成分上均存在较大差别。
    本实验比较了不同提取方法对不同品种葛根中葛根素及总黄酮含量测定的影响,建立了HPLC法测定柴葛、粉葛中葛根素及UV法测其总黄酮含量的方法。方法学考察表明,该法准确、灵敏、简单、快速,可作为葛根中药材及饮片质量控制的方法之一。