注射用复方荭草冻干粉针生物活性测定

                      作者：李美珍 董莉 黄勇 王爱民 周雯 张治蓉

    【摘要】 目的  建立注射用复方荭草冻干粉针生物活性测定法。方法 采用小鼠凝血时间检测法,对测定方法进行了研究,并对10批注射用复方荭草冻干粉针生物活性进行测定。结果 所建方法简便易行,重复性、精密度、方法适用性较好。结论 该法简单,准确,可用于注射用复方荭草冻干粉针的质量控制。
    【关键词】  注射用复方荭草冻干粉针  生物活性测定  质量控制
    注射用复方荭草冻干粉针处方源于贵州省民间验方,根据传统苗族用药理论,结合现代制药新技术与新方法研制开发的中药复方制剂,具有化瘀通络,活血止痛功能,用于冠心病、心绞痛心血瘀阻所致胸痹心痛证。目前已完成了Ⅲ期临床研究。本文选择小鼠凝血时间试验进行了本品生物活性测定方法的初步探索。   
1.实验材料
1.1供试药物
    盐酸川芎嗪(091103A3,哈尔滨三联药业有限公司),注射用复方荭草冻干粉针 (20100105,由贵阳医学院贵州省药物制剂重点实验室制备)。
1.2动物
    健康昆明种小鼠,体重18-22g,雌雄各半,由贵阳医学院实验动物中心提供（合格证号:SCXK(黔)2002-0001）。
2.方法［1］
    昆明小鼠,体重18～22g,雌雄各半,尾静脉注射给药,于末次给药30min后,用眼科弯镊迅速摘去一侧眼球,于洁净载玻片两端各滴一滴血,血滴直径均5mm,立即用秒表计时,每隔30s用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻拨动一次,并观察有无血丝挑起,记录采血开始至挑起血丝止所历时间,即为凝血时间,另一滴血供最后复验。将每组数据进行t检验,计算凝血时间延长率。 
    3.统计方法
    结果用均数±标准差（x-±s）表示,所有数据采用SPSS13.0版软件进行t检验，P<0.05有统计学意义。
4.结果
4.1 限值剂量研究
   表1  注射用复方红草冻干粉针对小鼠凝血时间的影响 组别动物数（只）剂量(g/kg•d)凝血时间(s)延长率(%)
正常对照组10 78.10±18.33 
盐酸川芎嗪组100.04×399.00±17.94*26.76
高剂量组1013.5×396.40±14.98*23.43
中剂量组106.8×39350±13.33*19.72
低剂量组103.4×385.60±18.399.60
与正常组比较，＊p<0.05
    注射用复方荭草冻干粉针剂量为6.8g/kg、13.5g/kg连续三次给药可明显延长小鼠的凝血时间,其延长率分别为19.72%和23.43%，与正常对照组比较有显著性差异（p<0.05）,为了增加可靠性和保证重复性,选用剂量13.5g/kg（相当于人临床用量的30倍）作为限值剂量。(经预试验，各剂量组单次给药作用不显著。)
4.2 方法学验证［2］
4.2.1 重复性实验
    取同一批号注射用复方荭草冻干粉针进行6次平行测定试验(13.5g/kg),6次试验均可显著延长小鼠的凝血时间,与正常对照组比较有显著性差异（p<0.05），表明本方法重复性较好。
4.2.2 精密度实验
    同实验室不同实验人员采用注射用复方荭草冻干粉针以13.5g/kg尾静脉注射给药后进行测定,均可显著延长小鼠的凝血时间,与正常对照组比较有显著性差异（p<0.05）,其延长率分别为23.63%,19.76%,表明本方法精密度较好。