FL-1大孔树脂分离纯化番石榴叶总黄酮工艺研究

　　2.2.4  洗脱液的选择 

　　取番石榴叶250 g,用10倍量70%乙醇煎煮2次,每次1 h。合并提取液,过滤,回收乙醇,浓缩至150 mL,平均分为6份。以FL-1树脂湿法装柱(2 cm×45 cm),25 mL样品液以1 mL/min流速上柱,吸附1次,吸附90 min后,收集过柱液。用10倍量蒸馏水洗至无色,用5倍0.1% NaOH洗脱后再依次用30%、40%、50%、60%、70%、80%乙醇洗脱,洗脱流速为2 mL/min,收集滤液。80 ℃水浴浓缩至干,得番石榴叶总黄酮粗品。按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制备并进行测定。结果由表2可知,70%乙醇洗脱收率最高。表2  各种洗脱液的洗脱结果比较(略)

　　2.2.5  大孔吸附树脂的再生 

　　用4个柱体积的95%乙醇洗涤,然后再用约4个柱体积的水冲洗至无醇味,即可。当树脂使用了若干个周期时,其吸附性能有所下降,用4个柱体积95%乙醇、3个柱体积盐酸冲,水冲至中性,4个柱体积的5%氢氧化钠冲洗,再水洗至中性备用。

　　3  讨论
   
　　大孔树脂的吸附能力是由树脂孔径、比表面积、表面电性或形成氢键等综合性所决定。大孔树脂吸附有机物是有机物通过树脂的孔径扩散到树脂孔内被吸附,因此,孔径大小直接影响吸附效果。同时,巨大的表面积大大增加了树脂的吸附性能。另外,被吸附的化合物在溶剂中的溶解度对吸附效果也有影响,通常一种物质在某种溶剂中的溶解度大,树脂对此物质的吸附能力就小。FL-1树脂是具有一定胺基和羰基含量的中极性高比表面积吸附树脂,酚羟基与羰基、胺基之间均可以形成专一性较高的氢键作用,表面吸附的存在更加强了这种作用。正是由于这种多点协同吸附作用,能较好地提取植物叶中的总黄酮类化合物[5]。故本试验选用FL-1树脂上柱吸附。同时试验结果也表明,FL-1大孔树脂对番石榴叶总黄酮的吸附性能好。本项研究中,针对黄酮类化合物易溶于乙醇而微溶于水(溶于热水)的特点,将70%乙醇回流提取液浓缩至膏状,加热水使溶解,离心,上清液上大孔树脂柱,这样大大增加了大孔树脂的吸附能力。
  
　　一般植物提取物中的色素成分多为酸性化合物。从表2各种洗脱液的洗脱结果比较可以看出,利用稀碱溶液对大孔吸附树脂洗脱,可最大限度地洗脱色素杂质,且番石榴叶总黄酮不受影响,并能提高产品纯度。
   
　　番石榴叶总黄酮的含量不高,富集、分离、纯化存在一定困难。根据本研究获得的参数,利用FL-1大孔树脂吸附,提取分离番石榴叶总黄酮的得率为30.12%,纯度为55.22%,表明大孔树脂吸附纯化法用于番石榴叶总黄酮提取分离,具有吸附快、解吸率高、收率高、树脂再生简便等特点,而且产品的得率和纯度稳定,适于番石榴叶总黄酮的吸附纯化。

【参考文献】
  　　[1] 张文举,陈宝田,王彩云,等.槲皮素止泻机制研究[J].第一军医大学学报,2003,23(10)：1029.

　　[2] 彭珊珊,肖 峰.无花果叶、番石榴叶中黄酮类化合物的提取和测定[J].食品科学,2005,6(9)：300.

　　[3] 魏练波,吕瑞合,陈宝田.番石榴叶体外抗轮状病毒的实验研究[J].国外医学·微生物分册,1996,3(1)：3.

　　[4] 王冬梅,尉 芹,马希汉.大孔吸附树脂在药用植物有效成分分离的应用[J].西北林学院学报,2002,17(1)：60.

　　[5] 欧来良,李家政,孔德珍,等.FL-1多功能吸附树脂对沙棘叶总黄酮的分离纯化[J].中草药,2004,35(12)：1349.