高效液相色谱法测定罗布麻茶中槲皮素的含量

【摘要】  ：目的 建立测定罗布麻茶中槲皮素含量的高效液相色谱方法。方法 以甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)为流动相；采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；检测波长为371 nm；柱温30 ℃。结果 槲皮素线性范围为5.98～47.84 g/mL,回归方程为A＝7 750.68C＋1 196.33(r＝0.999 7)。结论 本方法可以准确测定罗布麻茶中槲皮素的含量。

【关键词】  罗布麻茶　高效液相色谱法　槲皮素　含量测定

    Abstract：Objective To determine the content of quercetin in the Luobuma Tea by HPLC. Method The mobile phase consisted of methanol-0.4% phosphoric acid (50∶50). Kromasil C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was used. The wavelength for measurement was at 371 nm and the temperature was at 30 ℃. Result The calibration curve was linear in the range of 5.98～47.84 g/mL for quercetin. The regression equation was A＝7 750.68C＋1 196.33 (r＝0.999 7). Conclusion This method can be used to determine the content of quercetin in Luobuma Tea accurately.

　    Key words：Luobuma Tea；quercetin；HPLC；content determination

    　罗布麻茶为罗布麻Apocynum venetum L.的叶经烘干粉碎制成的单方制剂,具有平肝安神、清热利水作用。临床用于肝阳眩晕、心悸失眠、浮肿尿少,高血压病,神经衰弱,肾炎浮肿。现已被《卫生部药品标准(中药成方制剂)》收载,该标准含量测定项下规定以芦丁为对照品,采用分光光度法测定。鉴于该含量测定方法操作比较繁琐、重现性差,因此选择芦丁水解苷元槲皮素作为罗布麻茶含量测定的控制成分。本试验报道高效液相色谱法测定罗布麻茶中槲皮素含量的方法学研究,结果表明,该方法简便、准确、重现性好,可以控制罗布麻的质量[1]。

　　1  仪器与试剂
   
　　岛津LC-10ADvp高效液相色谱仪,SPD-10Avp紫外检测器,HT-230A柱温箱；Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；岛津UV-2401紫外分光光度计；Sartorius BP211D电子天平(准确到0.01 mg)。槲皮素对照品(批号100081-200406,购自中国药品生物制品检定所)。甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其余试剂均为分析纯。罗布麻茶样品(山东省百草药业有限公司提供)。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件
   
　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液(50∶50)为流动相；检测波长为371 nm；柱温30 ℃。理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于4 000[2-3]。见图1。

　　2.2  对照品溶液的制备

   　 精密称取槲皮素对照品6.15 mg,置于100 mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,得对照品溶液(59.84 g/mL)。

　　2.3  供试品溶液的制备
   
　　取本品内容物(过3号筛)约0.5 g,精密称定,置圆底烧瓶中,加甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)20 mL,加热回流1 h,取出,放冷,滤过,将滤液转移至100 mL量瓶中,加甲醇-25%盐酸溶液(4∶1)稀释至刻度,摇匀,即得。

　　2.4  线性关系考察
   
　　分别精密吸取对照品溶液1、2、4、6、8 mL,置于10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,得对照品溶液1、2、3、4、5(浓度分别为5.98、11.97、23.94、35.90、47.84 g/mL)。每份溶液进2针,记录峰面积,以峰面积为纵坐标,对照品浓度(g/mL)为横坐标,计算回归方程。得回归方程：A＝7 750.68C＋1 196.33 (r＝0.999 7),线性范围为5.98～47.84 g/mL。