多指标正交优选肺宁合剂提取工艺

　　2.3.4  麻黄碱、伪麻黄碱含量测定 

　　采用色谱柱：Supelco ODS C18(4.6 mm×25 cm,5 μL)；流动相：乙腈-0.2%磷酸(5∶95,V/V)；柱温：40 ℃,流速：1.0 mL/min,检测波长：210 nm,进样量为10 μL[5-7]。
   
　　蒸馏液收集量的确定：精密吸取肺宁合剂适量(相当于麻黄原药材0.4 g),置250 mL烧瓶中,加水至60 mL,20%氢氧化钠溶液120 mL,氯化钠7.5 g。电热套加热,保持微沸,收集蒸馏液至预先加入0.5 mol/L稀盐酸5 mL的容器中,收集100 mL后,改用预先加入0.5 mL 0.5 mol/L稀盐酸的容量瓶收集,收集馏出液至干。另取一份肺宁合剂样品,处理方法同上,收集馏出液至干,测定。结果蒸馏液收集至100 mL,已经收集得到供试品中95%的麻黄碱,考虑到测定的准确性和减少误差,收集馏出液至130 mL即可。
   
　　供试液制备：正交试验9份样品每份取相当于麻黄药材0.4 g的药液,分别定容至60 mL,超过60 mL的水浴至60 mL,置250 mL烧瓶中,加入氯化钠7.5 g,20%氢氧化钠溶液120 mL,电热套加热,收集馏出液置预先加入0.5 mol/L稀盐酸5 mL的收集瓶中,收集至130 mL,用蒸馏水定容至200 mL,微孔滤膜滤过,即得。

　　2.4  试验结果

    经过权衡,麻黄碱、伪麻黄碱含量是最主要指标,甘草酸含量为主要指标,浸膏得率和正丁醇萃取得率为次要指标。设麻黄碱、伪麻黄碱权重分别为Y＝0.3,甘草酸权重Y＝0.2,正丁醇萃取得率权重Y＝0.1,浸膏得率Y＝0.1,计算,综合得分＝麻黄碱含量得分×30%＋伪麻黄碱含量得分×30%＋甘草酸含量得分×20%＋正丁醇萃取部位得率得分×10%＋浸膏得率得分×10%。正交试验安排及结果见表2,方差分析见表3。表2  正交试验安排及结果（略）注：F0.05(2,2)=19。甘草酸含量以峰面积最大的9号样品为基准,以9号样品的峰面积比值来计算出各份样品的甘草酸得分（略）表3  方差分析结果（略）

　　由直观分析和方差分析结果表明,3个因素对结果的影响都不显著。因素B相对其他因素影响较大,各因素影响次序为B>A>C；各因素不同水平的影响次序为A3>A2>A1,B3>B2>B1, C3>C2>C1,因此,选择最佳提取工艺为A3B3C3,即煎煮3次,每次加水10倍,每次煎煮1.5 h。考虑到从提高效率、节省能源和时间角度出发,确定的最佳工艺为：A2B2C2,即每次煎煮1 h,加8倍量水,煎煮2次。

　　3  验证试验
   
　　按处方量称取药材2份,按选定的最佳提取工艺提取,测定各指标成分含量。结果见表4。表4  水提取工艺验证结果(略)

　　4  讨论

　　选取多指标(浸膏得率、正丁醇萃取得率、麻黄碱、伪麻黄碱含量以及甘草酸含量)优选肺宁合剂提取工艺,主要是根据处方中药材有效成分的相关性质决定。麻黄宣肺止咳,为方中君药,故以麻黄碱、伪麻黄碱含量作为其中一个重要指标,权重分别为0.3。另外,甘草在方中起调和诸药的作用,并可抑制麻黄的峻烈之性,故选取甘草酸作为另一重要指标。方中的臣药(桔梗等药味)多含皂苷等中等极性类成分,故以正丁醇萃取得率作为指标,权重为0.1。因为采用水提法,故以浸膏得率作为评价标准。

    多指标的选择不是随意选择几个成分指标就可以的,首先多指标要具有层次,所谓层次,就是有大的方面(如有效部位),也要有小的方面(如具体有效成分)；其次,多指标要具有全面性,就是要全面反映出整个处方的性质。多指标是建立在基础药理研究上的。

    多指标评价可以比较全面反映提取方法的优劣,避免了单一指标的片面,但也同样存在问题。第一,中药复方是一个复杂体系,方中各药相互作用,共同发挥作用,并不是以哪几个成分含量高低作为评判标准；第二,即使选定的药效成分含量高,也并不意味着药效就一定好,以此方为例,麻黄碱、伪麻黄碱虽然是发挥药效的部分,但含量过高峻性太强,所以要配伍甘草,制约其峻性。
   
　　中药材以及中药制剂质量标准的研究越来越受到重视,如何制定出合理可行、符合中药以及制剂特点的质量标准体系是研究的热点,单指标已经不能满足质量控制的要求。多指标和指纹图谱一定程度上反映出了中药及其制剂的特点,但多指标不同于指纹图谱,多指标具有层次和选择性,选择的是否合理有待探讨。

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