高效液相色谱法测定活血通络丸中紫丁香苷的含量

　　2.7  稳定性试验

    取对照品溶液和供试品溶液,室温放置,在上述色谱条件下,于0、1、2、4、8、12 h分别进样20 μL,测定峰面积,计算,对照品的RSD＝1.28%,供试品的RSD＝1.70%,结果表明,对照品和供试品溶液在12 h内稳定。

　　2.8  重复性试验

    取活血通络丸(批号070410),平行做6份样品,按样品测定法测定,计算紫丁香苷含量,结果RSD＝2.13%,表明方法重复性较好。

　　2.9  加样回收率试验
   
　　采用加样回收法,取已知含量的活血通络丸(批号070410,含量0.063 mg/g)6份,精密称定,分别精密加入紫丁香苷标准品溶液(0.053 mg/mL)2 mL,按“2.3”项下方法制备,在上述色谱条件下测定紫丁香苷的含量,结果平均回收率为98.29%, RSD＝1.71%。结果见表1。表1  加样回收率试验结果(略)

　　2.10  样品测定

    取3批样品,按“2.3”项下所述方法分别制得供试品溶液,在上述色谱条件下,分别吸取对照品溶液及供试品溶液各20 μL注入液相色谱仪,按外标法计算样品中紫丁香苷的含量,结果见表2。表2  紫丁香苷含量测定结果(略)

　　3  讨论

    关于紫丁香苷含量的HPLC法测定已有文献报道[1-5]。本试验建立的HPLC法测定活血通络丸中紫丁香苷的含量,方法简便、快速、重现性好、准确度高,可作为该制剂的定量控制指标。

    在供试品溶液制备时,比较了甲醇超声提取和加热回流提取,结果两种提取方式对紫丁香苷含量的影响无差异,但超声提取简便快速,甲醇超声45 min以后可将样品中紫丁香苷提取完全。用甲醇超声提取液直接进样测定,结果有干扰杂质,利用紫丁香苷的性质,用萃取分离的方法对提取成分进行进一步分离净化,可有效减少杂质干扰。

    HPLC法测定紫丁香苷含量时,曾比较了不同比例的乙腈-水、甲醇-水、甲醇-水-冰醋酸、乙腈-水-冰醋酸、乙腈-水-磷酸等多种流动相系统,结果以乙腈-1%冰醋酸(10∶90)作为流动相,色谱图峰型好,出峰时间适宜,分离效果较好。

【参考文献】
  　　[1] 齐香君,李 楠,单燕风,等.HPLC法测定祖师麻中紫丁香苷[J].中草药, 2005,36(8)：1243－1244.

　　[2] 郑 键,刘玉珍,李 军,等.反相高效液相色谱法测定刺五加注射液中紫丁香苷的含量[J].中成药,2000,22(4)：263.

　　[3] 何禄仁,王兰霞,李士博,等.HPLC法测定壮元健肾胶囊中紫丁香苷的含量[J].中国药事,2007,21(10)：829－831.

　　[4] 杨水新,赵国忠,张圣民,等.高效液相色谱法测定刺五加注射液中紫丁香苷的含量[J].药物分析杂志,2001,21(1)：16.

　　[5] 罗兴平,聂凌云,翟宗德,等.HPLC测定康儿灵颗粒中紫丁香苷的含量[J].解放军药学学报,2005,21(4)：305－306.