丹参脂溶性及水溶性成分集成提取工艺研究

   
　　为验证高浓度乙醇提取后药渣中丹酚酸B的含量,取70%、90%、95%乙醇提取后的药渣再加8倍量的水回流提取2次,每次1 h,药液过滤,合并,放置室温,定容至1 000 mL。样品液处理后以HPLC法进行测定。结果表明：70%、90%及95%乙醇提取再水提的丹酚酸B的提取率分别为2.7%、18.4%及36.4%,均较低。由此可看出,醇提后再水提的工艺条件不合理,其原因可能是丹酚酸B长时间受热,导致分解,使提取率降低,因此,确定采用70%乙醇进行集成提取的工艺条件可行。

　　2.4  药材粉碎粒度的考察

    称取丹参药材饮片、最粗粉及粗粉各30.0 g,平行2组,分别以8倍量70%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,药液过滤,合并,放置室温,定容至1 000 mL,摇匀,取适量以0.45 μm微孔滤膜过滤,以HPLC法测定丹参酮ⅡA、丹酚酸B的提取率。结果见表2。表2  丹参醇提工艺药材粉碎的粒度选择（略）

    表2显示,饮片及粗粉提取时丹参酮ⅡA的提取率均较最粗粉高,但饮片及粗粉提取时丹参酮ⅡA的提取率在同一水平；饮片、最粗粉及粗粉提取时丹酚酸B提取率分别为77.2%、80.5%、78.3%,三者在同一水平。从工业生产成本角度考虑,选择饮片直接提取即可。

　　2.5  正交试验

　　2.5.1  正交试验设计 

　　选择乙醇用量、提取时间和提取次数3个因素,进行L9(34)正交设计；并以丹参酮ⅡA、丹酚酸B的提取率为指标,优选丹参合提工艺条件。因素水平见表3。

　　2.5.2  正交试验与结果分析 

　　平行称取丹参药材9份,每份30 g,按L9(34)正交表试验条件,用70%乙醇进行加热回流提取、滤过,滤液合并至1 000 mL容量瓶中,加70%乙醇定容至刻度,摇匀,测定。结果及分析见表4～表6。表3  丹参集成提取因素水平表（略）表4  L9(34)丹参醇提工艺正交试验结果（略）表5  丹参集成提取正交试验丹参酮ⅡA方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00,*P＜0.05　表6  丹参集成提取正交试验丹酚酸B方差分析表(略)注：F 0.01(2,2)=99,F 0.05(2,2)=19,*P＜0.05,**P＜0.01
   
　　方差和直观分析结果表明：因素C对丹参酮ⅡA及丹酚酸B的提取有显著影响,取3水平；其次为A因素,取3水平；B因素影响最小,可取1水平；最佳提取条件应为A3B1C3,但A和C因素的2水平与3水平相差不大,结合生产,拟取2水平,故拟确定提取条件为A2B1C2,即加8倍量70%乙醇,提取2次,每次1 h。
 
　　2.6  验证试验
   
　　按照正交试验优选醇提工艺条件进行验证试验,结果见表7；结合工业生产,选择优选工艺为丹参提取工艺,与正交试验各工艺结果比较含量较高,表明丹参脂溶性成分及水溶性成分基本提取完全,该醇提工艺条件可行。表7  丹参醇提工艺验证结果(略)

　　3  讨论

    以醇提法从丹参中提取的水溶性成分主要是丹酚酸B,以水提法则包含丹酚酸B、丹参素及原儿茶醛等水溶性成分。药理研究表明,两种提取方法所得部位的药理作用差异无统计学意义,且以醇提法所得的结果较好,并且随丹酚酸B含量提高而活性提高。鉴于此,我们选择丹酚酸B为水溶性成分的考察指标。

    丹参水溶性成分中,主成分丹酚酸B对热不稳定,这在提取溶剂的选择中可看出。因此,我们先采用高浓度醇提再用水提,丹酚酸B提取率较低,可能为丹酚酸B长时间受热分解所致。为全面反映丹参有效成分,我们采用先醇提再水提的传统工艺与集成提取工艺相比较,得出集成提取的优选工艺。
   
　　本研究结果表明,集成提取能同时兼顾丹参脂溶性和水溶性成分,使丹参的提取工艺更为合理。

【参考文献】
  　[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.52.