丹参脂溶性及水溶性成分集成提取工艺研究
作者：任志会,苏会霞,柏艳柳
【摘要】 目的 优选丹参脂溶性及水溶性成分的集成提取工艺条件。方法 采用正交设计法,以丹酚酸B、丹参酮ⅡA为测定指标,采用高效液相色谱法测定其含量,并以此为指标优选集成提取工艺条件。结果 集成法可同时对丹参中脂溶性及水溶性成分进行提取。优选的提取工艺条件为：加8倍量70%乙醇,提取2次,每次1 h。结论 采用集成方法同时提取丹参水溶性及脂溶性部位,可省时、省工、节能,使丹参的提取工艺合理可行。
【关键词】 丹参；提取工艺；正交试验；丹酚酸B；丹参酮ⅡA
Abstract：Objective To optimize an integration technique for extracting the liposoluble and water-soluble components of Salvia miltiorrhiza. Methods Salvianolic acid B and Tanshinone ⅡA were selected as marker components and determined by HPLC to optimize the integration extract process of Salvia miltiorrhiza by orthogonal test. Results The liposoluble and water-soluble active components of Salvia miltiorrhiza were efficiently extracted by the optimum integration technique. The integration technique for extracting was obtained：Salvia miltiorrhiza was added with 8 times alcohol of 70% and extracted 1 hour for 2 times. Conclusion The liposoluble and water-soluble active components of Salvia miltiorrhiza can be extracted simultaneously by the novel extraction process which was reasonable and feasible. This new technique can be employed to reduce time, working and energy, and be suitable for the morden production.
Key words：Salvia miltiorrhiza；integration technique for extracting；orthogonal test；Salvianolic acid B；Tanshinone ⅡA
丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎,主要含有二萜醌类脂溶性及酚酸类水溶性成分。2005年版《中华人民共和国药典》(一部)以丹参酮ⅡA和丹酚酸B为指标[1],对丹参药材进行质量控制。为了能同时兼顾丹参脂溶性及水溶性两类有效成分,我们采用正交试验法,以丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量为考察指标,对丹参的提取工艺进行全面优选,以使丹参的提取工艺更科学、合理。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪。丹参酮ⅡA(批号110766- 200518)、丹酚酸B(批号111562-200605)标准品购自中国药品生物制品检定所；丹参药材购自安国药材市场(经河北省药品检验所中药室孙宝惠主任药师鉴定为正品)。甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 丹参提取液中丹参酮ⅡA的含量测定方法
采用Phenomenex Luna C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm,广州菲罗门科学仪器有限公司),流动相：甲醇-水(75∶25),流速：1.0 mL/min,检测波长：270 nm。精密称取丹参酮ⅡA对照品10.21 mg,置50 mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀；精密量取2 mL,置25 mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,作为对照品溶液(每1 mL中含丹参酮ⅡA 16.32 μg)。分别取溶剂考察、粒度考察、正交试验及验证试验中回流提取液的稀释液,以0.45 μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,测定回流液中丹参酮ⅡA的含量。
2.2 丹参提取液中丹酚酸B的含量测定方法
采用Phenomenex Luna C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流速：1.0 mL/min；检测波长：286 nm。精密称取丹酚酸B 8.20 mg至10 mL棕色容量瓶中,加75%甲醇至刻度,摇匀,再精密吸取2 mL至10 mL容量瓶中,以75%甲醇定容至刻度,摇匀,得164.0 μg/mL的丹酚酸B标准品溶液。分别吸取溶剂考察、粒度考察、正交试验及验证试验中回流提取液的稀释液10 mL至25 mL的棕色容量瓶中,以相应溶剂稀释至刻度,摇匀,以0.45 μm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL,注入液相色谱仪,测定回流液中丹酚酸B的含量。
2.3 提取溶剂的选择
丹参脂溶性成分易溶于高浓度乙醇,但在预试验中,丹酚酸B在醇提时亦有相当部分被提取出来,所以考虑采用脂溶性部位与水溶性部位进行集成提取,以丹参酮ⅡA、丹酚酸B为含量测定指标,考察乙醇浓度对丹参脂溶性成分及水溶性成分提取率的影响。
称取丹参药材8份,每份30.0 g,平行2组,分别以8倍量水及10%、30%、50%、60%、70%、90%及95%乙醇回流提取2次,每次1.5 h,药液过滤,合并,放置室温,定容至1 000 mL。将以上药液取适量,按照上述含量测定方法测定丹参药材及各提取方法样品中丹参酮ⅡA及丹酚酸B的含量,并计算提取率。结果见表1。表1 丹参集成提取工艺溶剂的选择（略）
表1显示,90%乙醇提取时丹参酮ⅡA的提取率最高,为81.6%,但丹酚酸B提取率仅为48.3%；50%乙醇提取时,丹酚酸B提取率最高为75.1%,但丹参酮ⅡA的提取率仅为40.1%；70%乙醇提取时丹参酮ⅡA的提取率为80.7%,丹酚酸B提取率为73.2%。为兼顾二者,我们初步选择70%乙醇进行提取。