生脉拆方系列注射液的制备及质量标准研究

　　3.1.3  五味子 

　　分别取生脉注射液、参味注射液、麦味注射液、五味子注射液50 mL,水浴浓缩至约25 mL,移至分液漏斗中,加三氯甲烷振摇提取3次,每次10 mL,滤过,合并滤液,水浴蒸至近干,残渣加甲醇1 mL使溶解,作为供试品溶液。另取五味子醇甲对照品,加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照2005年版《中华人民共和国药典》附录ⅥB试验,吸取上述供试品溶液4～5 μL、对照品溶液1～2 μL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以石油醚(30～60 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(14∶5∶1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。

　　3.2  含量测定

　　3.2.1  色谱条件 

　　色谱柱：XB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm)；柱温：常温；流动相：乙腈-0.05%磷酸水溶液(19∶81)；流速：1.0 mL/min；检测波长：203 nm；理论塔板数按人参皂苷Rg1色谱峰计应不低于5 000。

　　3.2.2  对照品溶液的制备 

　　精密称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的人参皂苷Rg1 23.52 mg和人参皂苷Re 15.60 mg,置25 mL量瓶中,加乙腈-水(19∶81)至刻度,摇匀,精密量取5 mL置10 mL量瓶中,加乙腈-水(19∶81)稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL含人参皂苷Rg1 0.471 2 mg、人参皂苷Re 0.312 mg)。

　　3.2.3  供试品溶液的制备 

　　分别精密量取生脉注射液、参麦注射液、参味注射液、红参注射液各25 mL,水浴蒸干,残渣加流动相溶解,并定量转移至5 mL量瓶中,稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。

　　3.2.4  线性关系考察 

　　精密吸取混合对照品溶液2.0、4.0、8.0、16.0、20.0 μL,注入高效液相色谱仪。以进样量为纵坐标,峰面积为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：YRg1＝1.422×10-6XRg1＋0.091 2(r＝0.999 5)；YRe＝1.676×10-6XRe＋0.036
(r＝0.999 7)。结果表明：人参皂苷Rg1与人参皂苷Re进样量分别在0.942 4～9.424 μg、0.624～6.24 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

　　3.2.5  精密度试验 

　　精密吸取同一样品供试品溶液20 μL,连续进样6次,测定人参皂苷Rg1与人参皂苷Re峰面积。结果4种样品2种成分峰面积精密度RSD在1.32%～1.58%范围内,说明精密度良好。

　　3.2.6  稳定性试验 

　　取每种注射液同一样品供试液,分别于0、2、4、6、8 h检测。结果人参皂苷Rg1与人参皂苷Re测定在8 h内稳定,RSD在1.29%～1.83%范围内。

　　3.2.7  重复性试验 

　　取每种注射液同一批样品,精密吸取6份,平行制备供试品溶液并进样测定。结果RSD在1.79%～2.95%范围内。

　　3.2.8  加样回收率试验 

　　采用加样回收法。精密称定4种注射液已知含量的同一批样品9份,每份12.5 mL,每3份1组,分别按样品含量80%、100%、120%加入对照品溶液(人参皂苷Rg1 0.471 2 mg/mL；人参皂苷Re 0.312 mg/mL),制备供试品溶液,测定,结果平均回收率在97.0%～100.4%,RSD在0.45%～3.44%范围内。结果见表1。表1  加样回收率试验结果（略）

　　3.2.9  样品含量测定

　　精密吸取对照品溶液10 μL、各供试品溶液20 μL,分别注入液相色谱仪,测定,计算,即得。色谱图见图1。含量测定结果见表2。表2  4种注射液含量测定结果(略)

　　4  讨论

    本试验参照现代血清药理学、血清化学及中药药代动力学研究的思路与方法[2-3],通过制备系列注射液,在组方药材质量可控条件下,固定处方配伍比例,制备工艺稳定的系列注射液,并对注射液的质量建立控制标准。结果显示,本试验确立的定量、定性方法便捷、准确,重现性好,可为生脉系列注射液在体化学成分色谱指纹谱的比较及色谱峰的归属研究打下良好基础,赋予色谱图以特征性,通过指纹谱色谱峰的变化来诠释药物的配伍关系。

    另外,本试验参照有关文献[1],将红参TLC鉴别三氯甲烷-甲醇-水(75∶20∶2)展开系统更改为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)系统,使得人参皂苷Rb1、Re、Rg1具有较适宜Rf值和较好的分离效果,生脉注射液、参麦注射液、参味注射液TLC谱显示,在与人参皂苷Re相同Rf处,略有黄色杂质斑点,这可能与样品制备过程活性碳吸附效果有关；五味子的定性鉴别将三氯甲烷溶解更改为甲醇溶解制备供试液,亦收到较好的试验效果。

【参考文献】
  　　[1] 中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准(中药成方制剂)[S].第十五册.1999.50.

　　[2] 曹 进,叶兆波,车镇涛.抗衰老复方化学配伍关系的指纹谱研究[J].中草药,2006,37(5)：691.

　　[3] 潘卫松,刘美凤,石 钺,等.血清药理学、血清化学和中药药代动力学[J].世界科学技术－中药现代化,2002,4(3)：53.