周氏克金岩方抗A549肺癌细胞多糖组分的研究

　　2.2.2  红外光谱分析 

　　分别取精制多糖组分及单味药多糖2 mg,与400 mg干燥的溴化钾混匀,在玛瑙研钵中研磨5～10 min,压片,在红外光谱仪上测定。结果表明,精制多糖组分在3 400/cm和2 930/cm处的宽峰分别为多糖的O-H键和C-H键引起的吸收,在880/cm处的吸收表明此多糖存在β型糖苷键。

    多糖组分与组方药单味药多糖的红外光谱对比表明,玉竹、猫爪草、仙鹤草多糖与复方多糖组分红外图谱及特征吸收峰有很大的相似性。3个单味药多糖除了在2 930、3 400/cm处的特征吸收外,2 350、1 620、1 420、1 020/cm特征吸收峰均与多糖组分相似,由此初步推断,该复方多糖组分来源于这3味药材。

　　2.3  多糖含量测定方法学考察

　　2.3.1  最大吸收波长的确定 

　　分别精密吸取“2.1”项下葡萄糖标准液、多糖组分标准贮备液、复方多糖供试液各1 mL至具塞试管中,以蒸馏水作空白,分别加0.2%蒽酮-硫酸试剂4.0 mL,摇匀后迅速置于冰浴中,冷却后,一起浸入沸水浴中加热7 min,取出后冷却至常温,用UV-2401紫外分光光度计在200～800 nm处扫描[1]。各溶液在599 nm处均有最大吸收峰,由此确定检测波长为599 nm。

　　2.3.2  葡萄糖标准曲线的绘制 

　　精密吸取“2.1.4”项下的葡萄糖标准溶液0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mL分别置于25 mL容量瓶中,加蒸馏水至刻度线,制成系列标准溶液。按“2.3.1”项下方法在599 nm处测吸光度,以吸光度(Y)对葡萄糖浓度(X)作回归处理,得回归方程：Y＝9.485 9X＋0.003 9(R2 ＝0.998 3),线性范围为0.018 48～0.092 40 mg/mL。

　　2.3.3  转换因子的测定 

　　精密吸取“2.1.5”项下的多糖组分贮备液1 mL,按“2.3.1”项下方法测定吸光度,求出多糖液中相当于葡萄糖的浓度(C)。按下式计算换算因子：f＝w/c·d。其中w为多糖重量(mg),d为多糖稀释因素(mL),测得f＝3.35。

　　2.3.4  稳定性考察 

　　精密称取一定量的“2.1.6”项下的复方多糖供试液,置于25 mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,按“2.3.1”项下方法操作,测定0、5、10、30、60 min时的吸光度,结果表明该方法在1 h内稳定,RSD＝0.75%。

　　2.3.5  精密度试验

　　连续精密称取同一份复方多糖样品0.05 g置25 mL容量瓶中,稀释至刻度,精密吸取1 mL,按“2.3.1”项下方法操作,进行测定,结果表明精密度较高,RSD＝4.06%。

　　2.3.6  加样回收率考察
 
　　取“2.1.1”项下制得的复方多糖2.027 mg,分别加入不同量的多糖组分,置于25 mL容量瓶中,稀释至刻度,精密吸取1 mL,按“2.3.1”项下方法进行测定,结果表明,平均回收率为98.07%,RSD＝1.71%。说明该测定方法准确可行。

　　2.4  复方多糖组分的含量测定

    取“2.1.1”项下制得的复方多糖提取物0.253 4 g(全方原药材量4.759 g),定容至25 mL,取5 mL再定容至25 mL,精密吸取1 mL,按“2.3.1”项下方法测吸光度,按公式：含量(%)＝C×D×f×100/W计算该方中多糖组分含量。其中：C为样品液的葡萄糖浓度(mg/mL),D为样品液的稀释因素(mL), f为转换因子,W为原药材重量(mg)。测得复方中多糖组分的含量为1.41%,结果见表1。表1  复方多糖的含量测定结果（略０

　　3  讨论

    复方中组方药材较多,多糖种类也较复杂,标准多糖难以确定,多数方法是选取复方中某单味药材多糖为标准测定换算因子,其含量分析结果缺乏准确性。本试验是在明确抗肺癌A549细胞多糖组分的研究基础上,以它作为标准多糖测定复方有效多糖含量,可为复方多糖含量的测定方法提供参考,其测定结果准确,具有实际意义。
    周氏克金岩方中猫爪草软坚散结,仙鹤草活血化瘀,玉竹益气养阴。本研究结果表明,来源于这3味药的多糖组分具有抗肺癌A549细胞的活性。周氏克金岩方中含多糖的组方药较多,本研究利用红外光谱及其特征吸收峰,初步判断抗A549肺癌细胞多糖组分的组方药归属,为进一步控制多糖提取物质量、深入研究该多糖组分结构及抗肺癌作用机制提供了依据。

【参考文献】
  　[1] 张妙霞,孔祥生,郭秀璞,等.蒽酮-硫酸法测定可溶性糖显色条件研究[J].洛阳农专学报,1997,17(4)：24－28.