高效液相色谱法测定热毒平颗粒中绿原酸的含量
作者：李萍,高松,陈玉杰,高姗
【摘要】 目的 建立以高效液相色谱法测定热毒平颗粒中绿原酸含量的方法。方法 色谱柱为YMC公司ODS-A柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90),流速为1.0 mL/min,检测波长为327 nm。结果 绿原酸的检测浓度在0.084 8～0.848 μg范围内与峰面积呈良好线性关系(r＝0.999 9)；平均回收率为102.60%,RSD＝1.69%(n＝6)。结论 本法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。
【关键词】 热毒平颗粒；绿原酸；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of Chlorogenic acid in Reduping Keli. Methods The determination was performed by HPLC using an YMC ODS-A column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2%H3PO4 solution (10∶90) at a flow rate of 1.0 mL/min and a detection wavelength of 327 nm. Results The calibration curve for Chlorogenic acid was linear in the concentration range of 0.008 5～0.084 8 mg/mL (r＝0.999 9). The average recovery was 102.60 % (RSD＝1.69%, n＝6). Conclusion The method is simple, rapid and applicable for the quality control of Reduping Keli.
Key words：Reduping Keli；Chlorogenic acid；HPLC；content determination
热毒平颗粒由金银花、生石膏、玄参、地黄等中药制成,具有清热解毒之功效,用于治疗流感、上呼吸道感染及各种发热等症[1]。绿原酸为该制剂主药金银花的主要有效成分,具有明显的抗炎、杀菌、抗病毒的作用[2]。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂中绿原酸的含量,方法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。
1 仪器与试药
SP8800高效液相色谱仪(美国光谱物理公司)；分析之星色谱工作站；紫外FOCUS检测器。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110753-200413)；热毒平颗粒(天津中新药业隆顺榕制药厂,批号0602001、0602002、0602003)。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,水为纯净水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱：YMC公司ODS-A柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；检测波长：327 nm；进样量：10 μL。理论板数按绿原酸峰计应不低于3 000,分离度＞1.5。色谱图见图1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸对照品4.24 mg,置于50 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.084 8 mg/mL的对照品储备溶液,10 ℃以下保存。再精密量取4 mL置10 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,制成含绿原酸0.033 9 mg/mL的对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取本品7 g,精密称定,研细,混匀,取约0.5 g,精密称定,放入具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25 mL,称定重量,密塞,超声处理(功率250 W,频率33 kHz) 30 min,放冷,再称定重量,用50 %甲醇补足减失的重量,摇匀,以0.45 μm微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备
按处方取除金银花的各味药材,按制法制得样品,再按“2.2.2”项下方法,制得阴性对照溶液。
2.3 标准曲线的建立
精密吸取绿原酸浓度为0.084 8 mg/mL的对照品储备溶液1、2、4、8、10 mL,置10 mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为：Y＝55 799 416X－28 478.3(r＝0.999 9)。结果表明,绿原酸检测浓度在0.084 8～0.848 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。