肤痒颗粒的质量控制研究
作者：吴和珍,宋爱华,杨艳芳,施 峰,刘焱文
【摘要】 目的 建立肤痒颗粒的定性定量检测方法。方法 采用薄层色谱法鉴别肤痒颗粒中地肤子、白英,高效液相色谱法测定红花中羟基红花黄色素A的含量。使用C18色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.7%磷酸(24∶6∶70),检测波长为403 nm。结果 定性方法能够检出地肤子、白英；羟基红花黄色素A在0.128～1.024 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系,r＝0.999 8,平均回收率为99.52%,RSD＝1.97%(n＝5)。结论 该方法可作为肤痒颗粒的定性、定量检测方法。
【关键词】 肤痒颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；羟基红花黄色素A
Abstract：Objective To establish the qualitative and quantitative detective methods of Fuyang granules. Methods The TLC methods for identification of Fructus kochiae and Herba solani lyrati were established. A simple HPLC was established for the determination of hydroxysafflor A (HYSA). The mobile phase was methanol-acetonitrile-0.7% phosphoric acid (24∶6∶70). UV detecting wavelength was at 403 nm. Results Fructus kochiae and Herba solani lyrati could be identified by TLC. HYSA showed a linear relationship at the concentration range of 0.128～1.024 μg, r＝0.999 8. The average recovery was 99.52% and RSD＝1.97% (n＝5). Conclusion The method can be used for qualitative identification and quantization determination of Fuyang granules.
Key words：Fuyang granules；TLC；HPLC；hydroxysafflor A
肤痒颗粒收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂》[1],由红花、地肤子、白英、苍耳子、川芎5味中药组成,具有祛风活血、除湿止痒的功效,临床用于皮肤瘙痒症,湿疹,荨麻疹等瘙痒性皮肤病。原质量标准中只有2个理化鉴别,无薄层定性和含量测定方法。为了更好地控制制剂的内在质量,本试验对其定性、含量测定方法进行了探索。
1 仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪,G1314A紫外检测器。水为重蒸馏水,所用试剂均为分析纯。地肤子对照药材、齐墩果酸对照品、羟基红花黄色素A(hydroxysafflor A,HYSA)对照品均由中国药品生物制品检定所提供。白英对照药材购自湖北省中药材公司,经湖北中医学院药学院鉴定教研室鉴定。肤痒颗粒由湖北东信药业有限公司提供。
2 方法与结果
2.1 定性鉴别
2.1.1 地肤子的薄层色谱鉴别
取本品4.0 g,研细,加乙醇40 mL,超声处理5 min,滤过,滤液加盐酸3.0 mL,加热回流2 h,溶液放至室温后,滤过,滤液于水浴上挥去乙醇至干,残渣加水20 mL使溶解,转移至分液漏斗中,以石油醚(60～90 ℃)萃取2次,每次15 mL,合并石油醚提取液,置水浴上挥干,残渣加乙醇1 mL溶解,作为供试品溶液。另取地肤子对照药材1 g,加甲醇20 mL,超声处理5 min,滤过,加盐酸1.5 mL,加热回流2 h,放至室温后,滤过,于水浴上挥去乙醇至干,残渣加水10 mL使溶解,溶液转移至分液漏斗中,以石油醚(60～90 ℃)萃取2次,每次10 mL,合并石油醚提取液,置水浴上挥干,残渣加乙醇1 mL溶解,作为对照药材溶液。再取齐墩果酸对照品适量,以乙醇溶解,制成每1 mL含0.5 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述3种溶液各10 μL,分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚-三氯甲烷-丙酮(5∶2∶2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验,结果阴性无干扰。
2.1.2 白英的薄层色谱鉴别
取本品6.0 g,加乙醇50 mL,加热回流30 min,放冷,滤过,滤液回收乙醇至干,残渣加水20 mL使溶解,溶液转移至分液漏斗中,以乙酸乙酯萃取2次,每次15 mL,合并乙酸乙酯提取液,置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇1 mL溶解,作为供试品溶液。取白英对照药材2.0 g,加乙醇20 mL,加热回流30 min,放至室温,滤过,滤液置水浴上挥干,残渣加水10 mL溶解,转移至分液漏斗中,以乙酸乙酯萃取2次,每次10 mL,合并乙酸乙酯提取液,置水浴上挥干,残渣加甲醇2.0 mL使溶解,作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取上述两种溶液各10 μL,分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯(5∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,于105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。经3批样品及阴性对照试验,结果阴性无干扰。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件及系统适应性试验
色谱柱：Alltima C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液(24∶6∶70)；检测波长：403 nm；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL/min；理论塔板数按HYSA峰计算应不低于3 000,阴性对照无干扰。在上述条件下,HYSA的保留时间约为11 min(见图1)。