麻疯树叶提取物对恶性黑色素瘤A375细胞增殖抑制及诱导凋亡作用的研究

　　3.3   麻疯树叶提取物作用前后A375细胞形态学改变不同浓度麻疯树叶提取物作用A375细胞72 h后，倒置光学显微镜观察可见，阴性对照组A375细胞生长布满培养板底部，细胞排列紧密胞核、胞仁较大。而麻疯树叶提取物处理组与阴性对照组相比，细胞数量减少，部分细胞体积变小，变圆并浮起。随着药物浓度增加，细胞数量明显变少，更多细胞变成圆形，细胞表面突起多个小球状凋亡小体（图3）。

　　4  讨论
   
　　恶性肿瘤是一种严重威胁着人类生命与健康的疾病。由癌症造成的死亡人数居各种死亡原因之首，已成为人类重要的死亡原因之一。化学药物治疗，目前仍是治疗恶性肿瘤重要的手段之一。但是化学药物治疗目前普遍存在选择性差、毒副作用大、易产生耐药性等问题，不断寻找选择性高、毒副作用小的抗癌药是抗肿瘤新药研究的重点［13］ 。恶性黑色素瘤是一种恶性程度很高的皮肤癌，多发、易转移，故患者的年生存率极低，目前治疗黑色素瘤仍没有疗效好的化疗药物，化疗效果很差，有效率低于25%［14］ 。

　　麻疯树虽然在我国并非传统抗癌中药，但作为一种具有很强生理活性［3～7］、毒理作用［15］的药用植物，特别是在同属植物中已有抗癌活性物质的发现，预示着麻疯树抗癌药物开发潜力巨大。在本实验室前期的研究中，已发现麻疯树种子中的麻疯树毒蛋白（curcin）体外具有抗肿瘤活性［16］，但由于麻疯树毒蛋白对人体属于异源蛋白，排异反应较大，虽然是未来生物治疗理想的免疫毒素，但不适合开发成为天然抗癌药物。因此有必要对麻疯树进行更多、更全面的抗癌活性筛选。
   
　　根据美国癌症研究中心（NCI）用于筛选植物或动物粗提取物抗肿瘤活性的改进方案［17］，1985年之后以NCI为首的一些研究单位普遍开始采用针对肿瘤类型的筛选方法来代替针对化合物的筛选方法，即放弃体内小鼠筛选，代之为体外代表各种常见实体瘤的人类肿瘤细胞株进行初次筛选。目前在抗肿瘤天然药物筛选中最常用的MTT法具有快速、灵敏、简便，不需要特殊检测仪器等优点， 因此美国食品药品监督管理局(FDA)以及国内外一些权威的新药研发机构均采用MTT比色法作为抗肿瘤药物体外筛选的经典方法［18］。
   
　　本研究通过MTT比色法观察发现，麻疯树叶提取物在一定范围内（12.5～100 mg/L）能显著抑制人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖，并且其抑制作用表现出浓度和时间依赖性。光镜检测也同样观察到了经麻疯树叶提取物处理后的癌细胞细胞数减少、细胞变圆、外形皱折、凋亡小体等现象的出现。AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞分析法是灵敏、特异的定量检测细胞凋亡的方法，流式细胞仪分析结果表明麻疯树提取物能够诱导黑色素瘤A375细胞凋亡，呈剂量依赖性，并且与药物作用时间呈正相关。但也发现麻疯树叶提取物诱导A375细胞凋亡的活性并不平行于它的抗肿瘤作用强度（表1～2），这提示麻疯树叶提取物诱导的黑色素瘤细胞凋亡虽然是影响黑色素瘤细胞发生、发展、死亡的重要方式，但并不是唯一途径。
   
　　综上所述，本研究首次报道了麻疯树叶提取物具有抑制人恶性黑色素瘤A375细胞的增殖和诱导其凋亡的作用，为今后进一步研究开发抗恶性黑色素瘤的新的治疗药物打下了实验基础。但麻疯树叶提取物抗恶性黑色素瘤的具体作用机制还有待于进一步深入研究。

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