五味子水提液对D-半乳糖所致衰老神经细胞的保护作用

                     作者：高文荣，金香子，李香丹

【摘要】  目的探讨五味子水提液对D-半乳糖所致衰老神经细胞的保护作用。方法将原代培养的大鼠乳鼠大脑神经细胞培养7 d后，分为正常对照组、模型组(D-gal组);实验组(8 g/L D-gal+750 μg/ml五味子水提液，8 g/L D-gal + 500 μg/ml五味子水提液，8 g/L D-gal + 250 μg/ml五味子水提液);药物对照组(8 g/L D-gal + 500 μg/ml人参皂苷)，作用24 h后，电镜观察各组细胞超微结构的变化，细胞化学染色观察各组培养细胞内Nissl体和脂褐素(LPF)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)的活性变化。结果五味子水提液能恢复D-半乳糖所致损伤的乳鼠大脑培养神经的超微结构，抑制Nissl体的减少和LPF的沉积，提高神经细胞内SDH活性及降低ACP活性。结论五味子水提液对D-半乳糖所致衰老神经细胞的保护作用。

【关键词】  五味子;D-半乳糖;神经细胞

　五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis(TurcZ)Bail 的干燥成熟果实，其果实入药，味酸性温，入肺、肾经，有敛肺、滋肾、止汗、生津、止泻、涩精之功效[1]。中医临床常用于神经衰弱等证，具有兴奋中枢神经系统、兴奋脊髓、提高大脑皮层的调节作用[2～4]，本实验探讨了五味子水提液对大脑神经细胞的抗衰老作用，为五味子的进一步开发应用提供了实验和理论依据。

　　1材料与仪器

　　1.1动物SD大鼠乳鼠(8 d龄)双侧大脑半球，动物由延边大学医学部实验动物科提供。

　　1.2药物五味子水提液(由延边大学药学院提取制成)，用RPMI-1640培养基配成750，500，250 μg /ml;人参皂苷(吉林省靖宇县黄封参药业公司产品)，用RPMI-1640培养基配成500 μg/ml。RPMI-1640培养基(GIBAO产品);胰蛋白酶(美国DIFCO产品);D-半乳糖(上海试剂二厂产品)。

　　1.3仪器OLYMPUS倒置显微镜购自日本;JEM-1200EX型透射电子显微镜购自日本;PD-2000真彩色病理细胞图像分析仪购自北京天地百年科技公司。

　　2方法

　　2.1原代单层神经细胞培养与分组无菌条件下取SD大鼠乳鼠(8 d龄)双侧大脑半球，用含20%小牛血清的RPMI-1640培养基制成细胞悬液，以1×106/ml的密度接种。放置37℃ CO2 培养箱中培养，培养至第7天，选生长良好的细胞随机分为6组。正常组、模型组(加入8g/L D-gal)、实验组(8 g/L D-gal+750 五味子水提液，8 g/L D-gal+500 μg/ml五味子水提液，8 g/L D-gal+250 μg/ml五味子水提液);药物对照组(8 g/L D-gal+500 μg/ml人参皂苷);作用24 h后，进行实验观察。

　　2.2透射电镜观察取生长良好的细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，以2 000 r/min离心15 min，收集细胞用3%戊二醛和1%锇酸双重固定，梯度丙酮脱水，Epon815、812混合树酯包埋，超薄切片，电子染色，JEM-1200EX型透射电子显微镜观察，拍照。

　　2.3细胞化学染色[5，6]Nissl体染色：采用甲苯胺蓝染色法;LPF：采用Glenner氏联合反应法;SDH：采用亚铁氰化钾法;ACP：采用Gomori法进行染色。

　　3结果

　　3.1透射电镜观察模型组细胞膜被破坏，核膜膜褶增多，各种细胞器均有减少：粗面内质网脱颗粒;高尔基体结构被破坏;线粒体膨胀呈空泡状，嵴断裂，胞质内可见大量脂滴沉积;实验组和药物对照组的各种细胞器超微形态结构均得到明显恢复。结果见图1～2。