降糖保肾汤对糖尿病大鼠肾脏的影响

                     作者：李美子，郝营丽，陈正爱

【摘要】  目的探讨降糖保肾汤(jiang tang bao shen decoction ,JTBSD)对糖尿病(diabetes mellitus, DM)大鼠肾脏的保护作用及其机制。方法采用单次腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)建立DM大鼠模型。大鼠随机分为4组：正常组、模型组、JTBSD组、盐酸贝那普利(Benazepril hydrochloride,BNPH)组。给药12周，收集24 h尿液测定尿肌酐，心脏采血检测各组大鼠血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCr)，并计算肌酐清除率(creatinine clearancerate，CCr)水平，光镜下观察肾组织的病理改变，免疫组化观察肾组织转化生长因子β1(transforming growth factorβ1 ,TGF-β1)表达水平。结果JTBSD能明显降低DM大鼠的BUN、SCr、CCr水平，能够减轻DM大鼠肾组织系膜基质增生、肾小球硬化及血管水肿，并使DM大鼠肾组织中TGF-β1表达明显减少。结论JTBSD对DM大鼠肾脏具有保护作用。

【关键词】  糖尿病; 肾病; 肾组织转化生长因子β1

　糖尿病的慢性并发症糖尿病肾病(diabetic nephropathy ,DN)已成为糖尿病最常见的并发症之一，而DN是导致糖尿病患者致死率及致残率升高的主要原因之一。DN其病理特征为肾小球基底膜增厚和肾小球系膜区细胞外基质的积聚，从而导致肾小球硬化，并出现肾功能衰竭等[1]。TGF-β是一种多向性、多效性和多功能的细胞因子，在DN进展中发挥着重要的作用，并介导肾脏病变。本实验采用单次腹腔注射STZ的方法建立糖尿病大鼠模型，研究降糖保肾汤对DM大鼠肾脏的保护作用及其机制。

　　1 材料

　　1.1 药物与试剂降糖保肾汤由延边大学临床医学院制提供;盐酸贝那普利为北京诺华制药有限公司产品;链脲佐菌素为美国Sigma公司产品;SABC试剂盒、DAB显色试剂盒和兔抗TGF-β1多克隆抗体均为武汉博士德生物工程有限公司产品。

　　1.2 动物Wistar雄性大鼠，体质量150～200 g;由延边大学医学部实验动物科提供。

　　2 方法与结果

　　2.1 JTBSD对STZ所致DM大鼠BUN、SCr、CCr的影响随机法将80只大鼠分为两组：10只大鼠列为正常组，正常组腹腔注射枸橼酸缓冲液;另70只单次腹腔注射STZ 50 mg/kg(临用前用0.05 mol/L枸橼酸缓冲液溶解，pH为4.4, 4℃)，注射STZ 72 h后，尾静脉采血测空腹血糖并同时测尿糖，血糖≥ 16.7mmol/L，尿糖“+++”以上者列入DM观察对象。再将造模成功的大鼠随机分为模型组(20只)、JTBSD组(15只)和BNPH组(15只)。造模7 d后，JTBSD组每天灌服JTBSD 30 g生药/kg体质量，BNPH组每天灌服BNPH 10 mg/kg体质量，正常组和模型组每日灌服等体积的蒸馏水，共12周。12周末，收集大鼠24 h尿液，记录尿量和检测尿素氮。之后，用3%水合氯醛10 ml/kg腹腔麻醉，心脏采血，测大鼠的BUN、SCr水平，并计算CCr。对4组数据用SPSS11.0软件进行单因素方差分析处理。结果见表1。表1 JTBSD对STZ所致DM大鼠BUN、SCr、CCr的影响

　　2.2 JTBSD对STZ所致DM大鼠肾脏组织病理的影响 实验大鼠分组、造模及给药同“2.1”项方法。12周末，打开腹腔快速切除肾脏，左肾肾脏皮质立即置入10%中性福尔马林液固定，用于HE染色。结果见图1。图1 JTBSD对STZ所致DM大鼠肾脏组织病理的影响(HE染色100×)

　　2.3 JTBSD对STZ所致DM大鼠肾脏细胞因子TGF-β1的影响实验大鼠分组、造模、给药同“2.1”项方法。12周末，打开腹腔快速切除肾脏，左肾肾脏皮质立即置入10%中性福尔马林液固定，用于免疫组化标本的制备。结果见图2。图2 JTBSD对STZ所致DM大鼠的肾脏细胞因子TGF-β1的影响(免疫组化染色，100×)