N软脂酰基壳聚糖的制备及其改善靛玉红水溶性的药动学研究
2 结果与讨论
2. 1 PLCS的合成与聚合物结构表征
合成前的原料、反应后的产物N软脂酰基壳聚糖红外光谱如图1所示，壳聚糖在1 574 cm-1有NH弯曲振动吸收峰，表明壳聚糖有未被酰化的自由氨基，3 426 cm-1是羟基的吸收峰。当壳聚糖被酰化后，出现了具有明显特征的1 638和1 525 峰，分别对应酰胺的羰基伸缩震动（amide Ⅰ band）和酰胺Ⅱ峰(amide Ⅱ band,即δNH )。谱图中在1 710～1 760 cm-1没有出现吸收峰，该位置是成酯羰基特征吸收峰，因此可明确判断壳聚糖的羟基没有被酯化，酰基的引入有高度的选择性，反应的位点全部为壳聚糖的氨基。
图2为PLCS（DS14.2）在DMSOd6溶剂中的1HNMR谱图，δ 0.85为接枝的软脂酰基中的甲基氢，δ 1.23为软脂酰基中亚甲基氢，δ 1.49为软脂酰基中羰基的β位亚甲基氢，δ 1.85为软脂酰链中与羰基相邻的α位亚甲基氢，δ 2.08为壳聚糖分子中残余乙酰基中的甲基氢，δ 2.88为壳聚糖葡聚糖环上的H2，δ 3.20～3.90为葡聚糖环上H3,4,5,6,6′与水峰重叠。δ 4.86～5.49葡聚糖环上的H1，δ 8.52为氨基上发活泼氢NH。1HNMR谱图表明壳聚糖分子中的氨基发生了酰化反应。壳聚糖酰化取代度可通过1HNMR谱图中软脂酰基链甲基峰的积分强度与3倍H2的积分强度的比值估算（δ0.85/3δ2.88）［8］。
图1 壳聚糖（a）以及PLCS（DS分别为b.21.6，c.14.2，d.9.5）的FTIR光谱（略）
Figure 1 FTIR spectra of chitosan(a), PLCS (DS 21.6) (b), PLCS(DS 14.2) (c) and PLCS(DS 9.5) (d)
图2 PLCS（DS 14.2）在DMSOd6溶剂中的1HNMR谱（略）
Figure 2 1HNMR spectra of PLCS (DS 14.2 ) in DMSOd6
激光散射测得PLCS(DS 21.6)粒径为85 nm，PLCS(DS 14.2) 粒径为110 nm，PLCS(DS 9.5) 粒径为140 nm。图3显示胶束粒子的形貌近似球状，粒径在10～50 nm范围，远比由DLSC测得的数值小，产生这种现象的原因是DLSC测出的结果是胶束粒子在水溶液中的流体力学粒径，而TEM呈现的是胶束粒子脱水晾干后的粒径。
图3 PLCS（DS 14.2）胶束粒子的透射电镜扫描图（略）
Figure 3 TEM of selfaggregates based on PLCS (DS 14.2)
2.2 靛玉红PLCS纳米胶束的制备与载药量测定
所得载药体系为分散良好的暗红色粉末，改变药物与纳米载体的投料比例，获得的靛玉红载药量分别为5.5%、8.2%、13.3%。
2.3 载靛玉红PLCS纳米胶束在大鼠体内的药动学
从载药纳米胶束水溶液（载药量为8.2%）和原料药混悬液在大鼠体内的药动学结果（如图4，表1所示）可见：采用PLCS负载靛玉红制备成纳米胶束后，AUC提高了2.21倍，靛玉红的生物利用度大大提高；载药纳米胶束较原料药混悬剂的Cmax高1.72倍；而且达峰时间Tpeak也有显著性差异(P<0.05)，载药纳米胶束较原料药混悬液略有提前；表明靛玉红制备成PLCS纳米胶束后，其吸收速度和程度都有明显改善。提示PLCS负载靛玉红不仅能提高其水溶性，而且穿透生物膜的能力也得到改善。
图4 单剂量腹腔注射靛玉红混悬剂与靛玉红PLCS纳米胶束后的大鼠血药浓度（略）
Figure 4 Plasma concentration of indirubin after single intraperitoneal injection of indirubin suspension and PLCSloaded indirubin nanomicells in rats
表1 大鼠腹腔注射10 mg/kg靛玉红混悬剂与靛玉红PLCS纳米胶束的药动学参数（略）
Table 1 Pharmacokinetics of indirubin suspension and PLCSloaded indirubin nanomicells after intraperitoneal injections at a dose of 10 mg/kg in rat
对于难溶性药物来说，溶解是提高其被动扩散的前提（靛玉红的小肠吸收为典型的被动扩散机制），将靛玉红制备成PLCS纳米胶束后，可以提高其水溶性，从而体内血药浓度大大提高，生物利用度也显著增加。提示PLCS可以作为提高难溶性药物靛玉红生物利用度的候选载体，并且有改善靛玉红治疗白血病疗效的潜在可能。
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