补肾健脾法对卵巢早衰小鼠抑制素B含量及基因表达的影响
建立自身免疫性疾病模型通常有3种方法［8］：①将正常T细胞转移至无胸腺的裸鼠体内；②切除新生3 d动物的胸腺；③应用来自自身组织的特异性肽链进行主动免疫。有文献报道［9］切除新生小鼠或大鼠胸腺可造成多腺体自身免疫性疾病,如自身免疫性甲状腺炎、溃疡性结肠炎等,往往多种疾病同时并存。BALB/c小鼠为个体遗传性状近乎一致的纯系小鼠,以SD大鼠卵巢作为特异性抗原免疫小鼠产生单纯免疫性卵巢炎,即相当于应用来自该组织的特异性肽链进行主动免疫产生的自身免疫性疾病,避免了多腺体疾病的交叉影响,研究可更直接,更纯一［7］。因此,本研究设计采用这种方式复制动物模型。3次免疫后,小鼠动情周期的改变、卵巢功能的减退、组织病理的损伤等均证实自身免疫性卵巢功能衰退动物模型的复制成功。
3.2POF检测血清INHB含量的意义抑制素(inhibin,INH)属于转化生长因子β(TGFβ)超家族成员,是抑制FSH分泌的重要抑制因子［10］。抑制素降低引起FSH升高的变化反映了处于卵巢年龄的卵泡反应性和能力的降低［2］。精确监测表明［11］,INHB是卵泡期颗粒细胞分泌的主要形式。研究认为［2］卵巢储备功能低下的妇女,卵泡颗粒细胞INHB的产生减少,不能将FSH抑制在正常范围内,提示卵泡衰老。 45~49岁围绝经期妇女卵泡期INHB水平较低,FSH水平较高,进一步证实INHB和FSH之间的相互关系。故将早期INHB的下降考虑为卵巢储备功能下降的关键环节，而测定血清INHB可作为预测POF最灵敏的指标［2］。由卵巢颗粒细胞分泌的INHB水平直接反映卵巢的储备功能 ［12］。一般认为卵泡早期测定时血清FSH水平超过20 U/L,或超过10 U/L并伴有抑制素水平下降,提示卵巢储备功能已经降低,患者可能已经步入卵巢功能衰退进程中［13］。
3.3各组小鼠给药后血清INHB含量变化与INHB mRNA表达差异的关系中医学中无卵巢早衰的病名,但与此病类似的记载散见于“月经后期”、“月经过少”、“年未老经水断”、“闭经”、“血枯”、“血隔”、“不孕症”等病症中。肾藏精且主生殖,肾气的盛衰,直接关系到肾—天癸—冲任—胞宫轴的功能状态,成为主宰孕育的根本。脾胃为后天之本,气血生化之源。《女科经纶》说：“妇人经水与乳,俱由脾胃所生。”因此,脾肾亏虚是该病的重要病机。方中菟丝子辛、甘、平,归肾、肝、脾经,功能补肾益精养肝,平补肾阴阳,是调经、种子、安胎首选药；人参味甘微温,归脾、心经,功能大补元气补脾益肺,安神益智。菟丝子、人参共为君药。枸杞子补血养阴,填精益髓,滋养肝肾,与淫羊藿温肾壮阳,共助君为臣。君臣合用既能大补气血精,又能调补肾阴阳。柴胡、丹参疏肝活血为佐,炙甘草补脾益气、调和诸药为使。诸药共奏补肾健脾之效。本研究结果显示：中药预防组可显著升高血清INHB含量及卵巢组织INHB mRNA相对表达量，中药治疗组可显著升高卵巢组织INHB相对表达量，对血清INHB含量无明显影响，表明中药预防组作用优于中药治疗组。各组小鼠血清INHB含量与INHB mRNA表达的变化有相似的趋势。INHB mRNA及INHB的变化规律说明其蛋白的表达增加或减少是由基因的转录水平升高或下降引起的，从而推测这可能是补肾健脾中药治疗卵巢功能早衰的一个重要机理：通过增强卵巢组织INHB mRNA的表达,从而提高INHB的含量,改善卵巢的储备功能，可从早期对卵巢储备功能的下降起阻碍或延缓的作用。
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