南五味子的薄层色谱鉴别与质量标准研究
2.3.3 供试品溶液的制备取南五味子样品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25 ml，浓缩并定容至10 ml，离心，即得。
2.3.4 标准曲线的建立精密吸取五味子酯甲对照品贮备液适量，加甲醇制成含五味子酯甲11.4，28.5，57，85.5，142.5，285，570 μg/ml的溶液，分别吸取20 μl进样测定。以进样质量为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程：A=22.71C+10.65，r=0.999 9，结果表明五味子酯甲在0.228～11.4 μg与峰面积呈良好的线性关系。
2.3.5 检测限与定量限采用信噪比法，将对照品溶液逐步稀释至约3、10倍噪音的浓度，结果表明，检测限为2.03 μg /ml;定量限为6.96 μg /ml， RSD值为1.35%。
2.3.6 精密度实验取同一份对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，以峰面积积分值平均值计算，五味子酯甲的RSD值为2.57%;取9号样品粉末制备供试品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，以峰面积积分值平均值计算，五味子酯甲的RSD值为2.58%。结果表明方法精密度良好。
2.3.7 稳定性实验取9号南五味子样品粉末0.5 g，按“2.3.3”项下方法，制备供试品溶液，分别于1，2，3，4，5 d进样，计算五味子酯甲含量，其RSD值为2.79%，表明样品在5 d内稳定性良好。
2.3.8 重复性实验取9号药材样品粉末0.5 g，精密称定，按“2.3.3”项下方法，分别制备6份供试品溶液，进行HPLC分析，测定五味子酯甲的平均含量为0.42%，RSD值为3.50%。结果表明方法重复性良好。
2.3.9 加样回收率实验取6个具塞锥形瓶，分别精密加入浓度为0.96 mg/ml的对照品溶液1ml，于水浴上蒸干后，取9号样品6份，每份约0.25 g，精密称定，按“2.3.3”项下方法，制备供试品溶液，测定五味子酯甲的含量，并计算加样回收率，平均加样回收率为100.7%，RSD值为2.20%。
2.3.10 样品测定取各批次南五味子样品，每批3份，按“2.3.3”项下方法，制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，测定五味子酯甲的含量，并按干燥品计算样品的五味子酯甲含量。结果见表2。根据10批药材的测定结果，建议南五味子干燥品含五味子酯甲不低于0.20%。
2.4 醋南五味子的HPLC含量测定采用“2.3.3”项下相同的条件测定了10批醋南五味子样品中五味子酯甲的含量，样品色谱图(见图2)，平均加样回收率为103.0 %，RSD值为1.07 %，样品含量测定结果见表2。根据10批饮片的测定结果，建议醋南五味子干燥品含五味子酯甲不低于0.20%。
3 讨论
五味子S. chinensis (Turcz.) Baill.和华中五味子S. sphenanthera Rehd. et Wils. 的果实传统上均作为药材五味子使用，临床应用并无区分。但研究表明，两者在化学成分上有明显差异 [1]，说明两者的质量和疗效应有不同。因此，《中国药典》2000年版起将S. chinensis和S. Sphenanthera的果实分别以“五味子”和“南五味子”收载，并分别以主要活性成分五味子醇甲和五味子酯甲作为定量指标，但两者薄层色谱鉴别方法仍完全相同，不能有效鉴别。本文采用南五味子区别于五味子的特征性成分安五脂素[3,4]为对照品、经磷钼酸试液加热显色进行南五味子的TLC鉴别，特征明显、专属性强，可作为南五味子药材及醋南五味子的定性鉴别方法。表2 南五味子(S)及醋南五味子(V)水分、总灰分和HPLC含量测定结果水分测定结果表明，南五味子药材含水量在6.76%～10.61%不等，本文对现行南五味子药典标准含量测定项下的HPLC条件进行了适当优化，测定了干燥品中五味子酯甲的含量，提高了南五味子质量评价的准确性。五味子酯甲为南五味子保肝降酶的主要活性成分之一。HPLC含量测定结果表明， 6批南五味子药材样品醋制后五味子酯甲含量均有不同程度的提高。醋南五味子保肝作用较强[5]，可能与醋制后保肝降酶的活性成分含量有所提高有关。
【参考文献】
[1] Lu Y，Chen D F.Analysis of Schisandra chinensis and Schisandra sphenanthera [J].Journal of Chromatography A，2009，1216(11)：1980.
[2] 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[ S].北京：化学工业出版社，2005：169.
[3] 高建平，王彦涵，郁韵秋，等.南五味子木脂素类成分的HPLC含量测定及其变异规律[J]. 中国天然药物，2003，1(2)：89.
[4] 王彦涵，高建平，陈道峰.高效液相色谱法测定五味子属药用植物木脂素的含量 [J].中国中药杂志，2003，28(12)：1155.
[5] 宋小妹，冯改利，宋莎莎，等.醋制对南五昧子药理作用的影响 [J].陕西中医学院学报，2009，32(2)：59.