清开灵对兔实验性葡萄膜炎治疗机制研究

                         作者：刘静霞 张晓冬 吕瑞民 聂浩劫 陈德欣 张魁魁 

【摘要】 目的  观察清开灵注射液对葡萄膜炎的防治作用与机制。方法  40只实验兔随机均衡分为正常组、模型对照组、激素治疗组、清开灵治疗组，分5个不同时段检测兔眼炎症积分及房水和外周血中IL-2、TNF-α含量。结果  造模后不同时段各组兔眼部炎症积分逐渐增加，房水和外周血中IL-2、TNF-α逐渐升高，与正常组比较差异有统计学意义（P＜0.001）；清开灵治疗组不同时段各项指标均明显低于模型组（P＜0.01），与激素治疗组疗效相似（P>0.05）。结论  清开灵注射液具有控制并改善兔实验性葡萄膜炎临床体征，抑制房水和外周血中IL-2、TNF-α的作用，在一定程度上与激素疗效相近，可作为葡萄膜炎的治疗用药。
【关键词】 清开灵注射液  实验性葡萄膜炎  细胞因子  体征
        葡萄膜炎是一类十分常见的致盲眼病，在我国致盲眼病中约占第3～7位[1～2]，长期以来，西医治疗本病多以糖皮质激素或免疫抑制剂为主，因其相应的毒副作用而使临床应用受到局限，故开发中药治疗葡萄膜炎前景看好。清开灵注射液是近年来常用于治疗热性疾病的一种新型中药制剂，其主要药物成份具有显著抗炎作用，且无激素类副作用，但尚缺乏对其治疗葡萄膜炎作用的实验研究。本课题旨在通过动物实验研究，探讨葡萄膜炎的发病机理和清开灵治疗葡萄膜炎的疗效与作用机制，现报告如下。
        1.实验材料
        1.1动物  健康成年新西兰大白兔40只，雌雄各半，无眼疾，体重2.2～2.5kg，常规分笼饲养（黑龙江中医药大学动物实验中心提供）。
        1.2药物  清开灵注射液（广州明兴制药有限公司生产，规格10ml/支)、地塞米松、9/L生理盐水均为同一产家、同一批号药品。
        1.3主要试剂与仪器  4% BSA（天象人生物工程有限公司)，IL-2、TNF-α放免药盒（北京普尔伟业生物科技有限公司)，均为同一批号；YZ-5B裂隙灯显微镜、检眼镜（苏州医疗仪器厂)、MX全自动荧光免疫分析仪（美国ABBOTT公司)，高速低温离心机（日本日立公司)、低温冰箱（日本三洋公司)等。
        2.实验方法
        2.1造模方法  参照吴树扬等人方法[3]用BSA作异体抗原，玻璃体及耳缘静脉二次注射法诱导实验性葡萄膜炎动物模型。
        2.2分组与给药方法  40只兔随机均衡分成4组，每组10只，雌雄各半，体重相近。
        (1）正常组：不造模。
        (2）模型对照组：造模后第2天开始予同清开灵治疗组等体积的生理盐水耳静脉注射，每日1次，连续2周。
        (3）激素治疗组：造模后第2天开始按每日10mg剂量予地塞米松注射液耳静脉注射，每日1次，连续2周，根据实验动物与人体体表面积换算表[4]换算确定给药量。
        (4）中药治疗组：造模后第2天开始按每日30ml予清开灵注射液耳静脉注射，每日1次，连续2周，剂量换算方法同激素组。
        2.3观察指标及检测方法
        2.3.1炎症积分评价  分别于造模后第1、3、7、10、14天用裂隙灯显微镜及检眼镜检查各兔眼部体征，按0～4级标准[5]评价记录炎症积分。
        2.3.2房水及外周血细胞因子检测：各组造模前、造模后第1、3、7、10、14天分别抽取房水0.5ml、耳缘静脉血2ml(分离血清)，置-20℃保存备用。采用放免法测定房水及外周血中细胞因子IL-2和TNF-α含量。
        2.4统计学方法  数据以均值±标准差表示，采用SPSS16.0统计软件进行方差齐性检验和显著性检验，各时段组间均数以及组内均数比较分别采用随机区组设计的单因素和两因素ANOVA方差分析检验后进行ＬＳＤ－ｔ检验或近似ｔ检验、配对t检验，检验水准α=0.05（双侧)，P＜0.05具有统计学意义。
        3.结果
        3.1不同时段各组兔眼部炎症积分评价
        造模后1～14天模型对照组炎症积分不断增高（P＜0.001)，表明本实验中BSA诱导兔眼葡萄膜炎体征可持续加重2周以上。激素治疗组和清开灵治疗组兔眼炎症积分分别自第7天和第10天呈下降趋势，至第14天最低，治疗前后比较均有统计学意义（P＜0.001)；从第7天以后两治疗组兔眼炎症积分均明显低于模型对照组（P＜0.01)，但两治疗组间差异无统计学意义（P>0.05)。
        3.2不同时段各组兔血清中细胞因子的变化
        正常组兔外周血中IL-2具有一定表达，其前后时段差异及其与其它三组造模前比较均无统计学意义（P>0.05)。造模后三组兔外周血IL-2自第1天开始逐渐升高，各时段水平均明显高于正常组（P＜0.001)，且以模型对照组升高水平最为显著（P＜0.001)；激素治疗组和清开灵治疗组于第7天即呈下降趋势，至第14天接近第1天水平，与造模前相比差异有统计学意义（P＜0.001)，但两治疗组间比较无统计学意义（P>0.05)。
        TNF-α在正常组兔外周血中具有一定表达，其前后时段差异以及与其它三组造模前比较均无统计学意义（P>0.05)。造模后第1天，三组兔外周血TNF-α升高，但无统计学意义（P>0.05)，自第3天后各时段水平均明显高于正常组（P＜0.01)，且以模型对照组升高水平最为显著（P＜0.001)；激素治疗组和清开灵治疗组于第10天呈下降趋势，至第14天明显低于模型组（P＜0.05)，与造模前相比差异有统计学意义（P＜0.001)，但两治疗组间比较无统计学意义（P>0.05)。
        3.3不同时段各组兔房水中细胞因子的变化
        IL-2在正常对照组兔房水中具有一定表达，但其前后时段差异以及与其它三组造模前比较均无统计学意义(P>0.05)。造模后第1天三组兔房水中IL-2略升高但组间比较无统计学意义(P>0.05)，自第3天后各时段水平均明显高于正常组，且以模型对照组升高水平最为显著(P≤0.001)；与模型组相比，激素治疗组和清开灵治疗组从第3天即明显下降(P≤0.001)，但两治疗组间比较无统计学意义(P>0.05)，与造模前相比差异有统计学意义(P＜0.001)。
        TNF-α在正常组兔房水中具有一定表达，其前后时段差异以及与其他三组造模前比较均无统计学意义(P>0.05)。造模后三组兔房水中TNF-α逐渐升高，各时段水平均明显高于正常组(P＜0.001)，且以模型对照组升高水平最为显著(P＜0.001)；与模型组相比，两治疗组自第3天开始明显下降(P≤0.001)，第3、7天两治疗组水平比较无统计学差异(P>0.05)，第10、14天两治疗组水平比较有统计学意义，各自与造模前相比差异有统计学意义(P＜0.001)。