磁分离酶联免疫技术检测FSH、LH和hCG

        3.2显色稳定性试验
        空白对照(底物液+终止液)和测定管(酶标抗体+底物+终止液)在加终止液后，在不同时间内(1分钟，5分钟，10分钟，20分钟，30分钟，1小时，2小时，4小时，6小时，和24小时)观察其吸光度(550hm)变化。
        4  讨论
        在双抗体夹心酶联免疫测定法(MAIA)中，分离游离型标记抗体和标记抗体-抗原复合物是一重要环节。分离方法有多种，其中磁性分离技术具有分离完全而快速的优点，但因磁性抗体免疫试剂制备困难而限制了该技术的推广。瑞士Serono诊断中心发明这种磁性抗体免疫技术，称MAIA，为酶联免疫分析中磁性分离技术的推广和应用创造了条件。Serono磁性分离试剂用抗荧光素标抗体与直径1μm的粒子结合成为磁性微粒抗荧光素抗体，它是一种非同位素免疫检测系统。由于抗原抗体反应在液相中进行，不仅反应速度快，而且均匀，时间明显短于固相分离。
        我们对该方法在线性范围、显色稳定性、精密度和精确度等方面进行评价。结果显示：标准曲线范围较宽，重复性良好；仪器能储存前次测定的标准曲线数据，不需要每次作标准曲线，可以进行急诊标本的检测，整个检测过程仅需1～2小时。我们在1天24小时不同时间内观察空白管和测定管的吸光度变化，结果为空白管吸光度的变异系数为0．023，测定管吸光度的变异系数为0．004。表明该方法以碱性磷酸酶作为标记物，单磷酸酚酞作为基质，酚酞呈色稳定，重复性较好。将三份不同浓度的标本作连续检测，观察其精密度，批内变异(n=10)：LH平均为2．26％，FSH为2．29％，hCG为2．85％；批间变异(n=5)：IM平均为6．6％，FSH为2．59％。同时，我们分别将不同浓度的LH和FSH加到标本中，作回收试验检测其精确性。结果：LH平均回收率为104．5％，FSH为93．5％。表明该方法具有较高的精密度和精确度，能满足临床测定的要求。
        FSH、LH和hCG的磁性抗体免疫检测方法简单，包括孵育、分离、显色和测定四步连续进行，标准曲线绘制及计算结果自动程序化，检测速度快，每秒一管，显著地堤高了工作效率，满足医生和病人即刻测出结果的要求。仪器采用三波长同时检测，可消除试管因素的误差，也增大仪器量程5倍，达10个吸光度，溶液显色稳定。该项技术采用了非同位素的碱性磷酸酶作标记物，免除了对人体和环境有害的放射性物质污染。各项性能指标可与同位素标记的RIA相媲美。采用磁性抗体免疫试剂，开创了磁分离酶联免疫的实用技术，这将是一项很有广阔发展前途的检测方法。
参 考 文 献
[1]陶义训．斑点免疫渗滤试验及其在快速诊断中的应用．全国临床免疫学检验质量保证(第三册)，卫生部临床检验中心，1991，28～30.
[2]李振甲．激素的放射免疫分析．北京：科学技术文献出版社，1985．588～592.