蒙药额日赫木—8对SARS 的临床疗效及对受试动物机体免疫功能影响的研究

    作者：马国强1，张汉丰1，汪立勤2，郝 富1，李继平1，兰助晴2，李秀峰

【摘要】  目的  观察蒙药额日赫木—8 对SARS 的临床疗效及对受试动物机体免疫功能影响。方法  (1)蒙药的临床筛选：在SARS 暴发流行初期，内蒙古科委紧急组织有关蒙医学专家，查阅大量相关古籍，经过多轮论证，严格筛选，专项采方，最后确定蒙药“额日赫木—8”方剂用于SARS 临床观察。(2)动物实验：委托解放军302药学部对蒙药额日赫木—8与临床同步进行动物实验。试验目的：观察蒙药额日赫木—8对受试动物（正常小鼠与药物所致免疫功能低下小鼠）机体免疫功能的影响。(3)临床观察：在SARS 暴发流行期间，对内蒙古自治区医院在2003年4～5月收治的SARS 住院患者选取21例作为临床对照组，给以抗病毒，预防感染，免疫调节，营养支持，对症；另选取21例SARS 住院病人作为治疗组，在上述治疗基础上加用蒙药额日赫木—8，3g/次，2次/日，冲服，疗程10天。观察两组SARS患者治疗前后的发热、头痛、全身疼痛、乏力、咳嗽、胸闷、呼吸困难、腹泻；白细胞计数，淋巴细胞总数，血小板计数，血尿素氮，血肌酐，谷丙转氨酶，谷草转氨酶；动脉血氧饱和度， 胸部X线检查17项指标。结果  (1)治疗组较对照组发热天数平均缩短2.0天，组间差异有显著性，P<0.05；且体温改善疗效积分2.31±0.60，较对照组1.40±0.64，组间差异有显著性，P<0.001。(2)治疗组动脉血氧饱和度，治疗前后组内差异有显著性，P<0.05。(3)两组间胸部X线阴影改善积分治疗组优于对照组，组间差异有显著性，P<0.05。（4）动物实验证实：①蒙药额日赫木—8能增加环磷酰胺模型小鼠血清溶血素含量；②额日赫木—8高剂量及左旋咪唑均能明显增加正常小鼠血清溶血素含量。结论  (1)对本组SARS病人研究结果显示：在西药治疗的基础上加服蒙药额日赫木—8对缩短发热周期，改善机体缺氧，促进肺部阴影吸收有一定的效果。 (2)蒙药额日赫木—8对正常小鼠免疫反应有增强作用及对环磷酰胺所致免疫反应抑制有较强的拮抗作用。其机理有待进一步扩大验证。
   
    【关键词】   严重急性呼吸综合征（SARS）；额日赫木-8，蒙药；动物试验
   
    Investigating the clinical efficacy on severe acute respiratory syndrome (SARS) and the immunity of the animals experimented on with Mongolian traditional medicine，erihemu-8
   
    MA Guo-qiang，ZHANG Han-feng， WANG Li-qin，et al.Respiratory Department， Inner Mongolia Autonomous Region Hospital，Huhehaote 010017，China
   
    【Abstract】  Objectives  To investigate the clinical efficacy of severe acute respiratory syndrome(SARS) and the immunity of the animals experimented on with Mongolian traditional medicine，Erihemu-8.Methods  (1)Clinical choice of Mongolian traditional medicine： at the beginning of the epidemicity of SARS. Inner Mongolia Science Committee emergently organized certain Mongolian medicinal experts， they consulted plenty of the related traditional medicine books and literature and finally decided that Mongolian traditional medicine， Erihemu-8， could be used on the cases of SARS after many turns of arguments and the strict choosing of different recipes.(2)Animal experiments： The medical institute of PLA hospital 302 was asked to do the experiments on animals with Erihemu-8 meanwhile it was put into clinical use. Experiment objectives： to investigate the effect of Mongolian traditional medicine， Erihemu-8，on the immunity of the healthy mice and the ones which have weak immunity caused by medicine. (3)Clinical investigation： during the epidemicity of SARS， 21 SARS patients were admitted by Inner Mongolian Hospital between April and May ， 2003. as a controlled group who were treated with anti-virus， antibiotic， immunization and allowance of nutrients： and another 21 SARS patients as clinical treatment group who were treated with both Erihemu-8 (3g once， twice a day， taken orally ， ten days in all ) and the above medicines. 17 parameters of subjects in the two groups are provided for the symptom with fever， headache， pantalgia， fatigue， cough， chest pain， short breath， palpitation； and the test of white cell count，lymphatic cell count， platelet count， blood urea nitrogen， creatinine， alanine aminotransferase， aspartate aminotransferase， oxygen saturation， chest x-ray were taken.Results  (1)The results have shown that the fever lasting days in the treatment group are two days less than those in the controlled group on averages， which shows significant difference(p<0.005). The therapeutic score of temperature improvement in treatment group(2.31±0.6) was much higher than that in the controlled group(1.40±0.64)， which also shows significant difference(P<0.001).(2)The oxygen saturation in the treatment group was significantly different before and after the treatment(P<0.05). （3） The improved score of image by the chest x-ray examination in the treatment group was prior to that in the controlled group(P<0.05). （4）The experiments on the animals taking Erihemu-8 proved as follows： ① The amount of the serum hemolysin of the mice animal model made with cyclophosphamide has been increased. ② Both Erihemu-8 and levamisole hydrochloride can obviously increase the amount of serum hemolysin in the healthy mouse examples.Conclusion   (1)The results of the research on the SARS patients have shown that the Erihemu-8 Mongolian traditional medicine combined with western medicine can abbreviate lasting fever time， improve the oxygen shortage， and have an obvious effect on improving pulmonary foci. (2)The Mongolian traditional medicine， Erihemu-8， has the effect on increasing immunity of the healthy mice and the mice animal model with weak immunity caused with cyclophosphamide. Its mechanism should be further identified in the clinical medicine practice.
   
    【Key words】  severe acute respiratory syndrome（SARS）；erihemu-8， Mongolian medicine；animal experiments
   
    在2003年抗击SARS期间，我国政府为筛选抗SARS中蒙药物，组织紧急科研攻关。为此我们承担了内蒙古科委下达的“蒙药额日赫木-8对SARS的临床疗效研究”课题。在此同时，国家中医药管理局也紧急启动了SARS的基础和临床科研攻关计划，采取分批滚动，步步跟进方式，第1、2批定点在北京、广东、天津共设立了13个临床研究课题，第3批定点在内蒙古、山西、河北省。因此，我们研究的项目被列入第3批国家定点攻关课题之一，进行对蒙药额日赫木-8对SARS临床疗效更进一步深入研究［1］。
   
    1  资料与方法
   
    1.1  蒙药的临床筛选  　　在SARS暴发流行初期，内蒙古科委紧急组织有关蒙医学专家，查阅大量相关古籍文献，经过多轮论证，严格筛选，专项采方，最后确定蒙药“额日赫木-8（清热八味散）”方剂用于SARS临床观察。蒙药额日赫木-8，又名清热八味散，译意为八味上贵药（故也称八贵散）。由山牛黄、白檀香、石膏、红花、苦地丁、瞿麦、胡黄连、麦冬组成。诸药组方严谨，供达清热解毒，主治脏腑，尤其肺热、肝热、血热、希拉热（体内热原因素）、紊乱（一种热型）、疫热等新旧热病均有良效。而SARS属于传统温病和疫热，在治疗理论上有支持点［2］。
   
    1.2  动物实验
   
    1.2.1   试验目的   观察蒙药额日赫木-8对受试动物（正常小鼠与药物所致免疫功能低下小鼠）机体免疫功能的影响。委托解放军302医院药学部对蒙药额日赫木-8与临床同步进行动物实验。
   
    1.2.2   实验动物   昆明成年小白鼠，体重18～22g，动物质量合格证BDW95007，实验设施条件认可证BSY95001，由军事医学院实验动物中心提供。
    
    1.2.3   药物和试剂   蒙药额日赫木-8（清热八味散）提取物以含生药量C=1.0g/ml，由解放军三○二医院药物研究室制备；成药额日赫木-8：乌兰浩特中蒙制药有限公司生产（国药准字Z15020467，批号030420）；盐酸左旋咪唑片，25mg/片，湖南洞庭药业股份有限公司生产（批号010832）；环磷酰胺（Cy）粉针剂，200mg/瓶，江苏恒瑞医药股份有限公司生产，01060821。
   
    1.2.4  试验方法   取健康雄性小鼠，按体重随机分为六组：正常对照组、Cy模型组、Cy+阳性对照药左旋咪唑组、Cy+额日赫木-8提取物（0.25、0.50、1.0ml/kg）三个剂量组，每组10只。每日ig给药1次（正常对照组ig等体积的蒸馏水），连续7天。用药后第五天，每只小鼠ip 3：5（V/V）稀释的绵羊红细胞（SRBC）悬液（0.2ml/只）进行免疫，1h后，除正常对照组外，各组小鼠ip环磷酰胺15mg/kg体重（0.2ml/20g），次日再以同剂量注射一次。免疫4天后，摘除小鼠眼球取血，分离血清，用生理盐水将血清稀释200倍，取1ml稀释血清加入10% 0.5ml SRBC，置冰浴中，每管加入1ml以生理盐水1：10稀释过的豚鼠血清，随即移至37℃恒温水浴中，保温10min，即放入冰浴以终止反应，用2000r/min离心10min，取上清液1ml，加3ml都氏液混匀，放置10min后，以对照管为空白对照，用分光光度计在540nm下测定各样品的吸收度（OD）值。另取SRBC稀释液0.125ml，加都氏液2ml，置10min后测定OD值（540nm），该OD值（540nm）为SRBC半数溶血时吸收度值，每样品的半数溶血值（HC50）按下列公式计算：样品HC50=样品吸收度值/ SRBC半数溶血时吸收度值×血清稀释倍数。
   
    1.3   临床观察
   
    1.3.1  观察目的   严重急性呼吸综合征（Severe Acute Respiratory Syndrome，SARS）［3］我国称之为传染性非典型肺炎［4］，其具有起病急，传染性强，人群普遍易感，流行范围广的疫情特点［5～8］。治疗SARS目前还无特效药物。我们在西医治疗的基础上加用蒙药额日赫木-8治疗SARS，蒙西医结合，发挥我区蒙医药优势，以寻求治疗SARS的新途径［9～11］。
    
    1.3.2  病例选择   对内蒙古自治区医院2003年4～5月份收治的SARS住院患者21例（男5例，女16例）作为治疗组；另21例（男9例，女12例）作为对照组。
   
    1.3.3  SARS的临床诊断标准及病情程度判断  　　采用卫生部印发的卫发电［2003］40号新修订的传染性非典型肺炎临床诊断标准（试行）［12］。
   
    1.3.4  治疗方案   对照组采用抗病毒，预防感染，免疫调节，营养支持，对症治疗。治疗组在上述西医治疗的基础上加用蒙药额日赫木-8，3g/次，2次/日，冲服。疗程为10天。
   
    1.3.5  临床观察指标   两组治疗前后观察的指标：发热、头痛、全身酸痛、乏力、咳嗽、胸痛、呼吸困难、腹泻；血白细胞总数（WBC），淋巴细胞总数（LC），血小板计数（PT），血尿素氮（BUN），血肌酐（Cr），谷丙转氨酶（ALT），谷草转氨酶（AST），动脉血氧饱和度（SaO2），胸部X线检查。
   
    1.3.6    疗效积分判断  （1）对治疗前后临床症状判断：明显缓解为2分，有所缓解为1分，无缓解为0分，加重为-2分。（2）退热疗效积分：体温≥39℃为3分，38℃≤体温<39℃为2分，37℃≤体温<38℃为1分，体温<37℃为0分，治疗前积分减去治疗后积分为疗效积分。（3）治疗前后胸部X线阴影疗效积分为：肺部阴影完全吸收得3分，明显吸收得2分，有所吸收得1分，无变化得0分，阴影扩散得-2分。
   
    1.3.7  统计学处理  采用疗效积分判断及t检验，α=0.05作为显著性界限值。
   
    2  结果
   
    2.1  动物实验结果  蒙药额日赫木-8对Cy处理小鼠溶血素抗体生成的影响试验结果显示（见表1）：蒙药额日赫木-8 能明显增加Cy模型小鼠血清溶血素含量（P<0.01），对Cy所导致免疫反应抑制有较强的拮抗作用。

表1  蒙药额日赫木-8对Cy处理小鼠溶血素抗体生成的影响

注：**P<0.01，与正常对照组比较；++P<0.01，与Cy模型组比较

    蒙药额日赫木-8对正常小鼠溶血素抗体生成影响试验显示(见表2)：蒙药额日赫木-8高剂量（0.5～1.0g/kg）及左旋咪唑均能明显增加正常小鼠血清溶血素含量（P<0.01），提示蒙药额日赫木-8对正常小鼠免疫反应有增强作用。

表2  蒙药额日赫木-8对正常小鼠溶血素抗体生成的影响

 注：**P<0.01，与正常对照组比较

    2.2  临床观察结果
   
    2.2.1  两组间年龄及病情分布  由表3可见两组SARS患者年龄及病情分布组间差异无显著性意义，P＞0.05。

表3   两组间年龄及病情分布

注：表中△P＞0.05，+P<0.05，++P<0.01，+++P<0.001，下表类同

    2.2.2  前后临床症状改善情况  两组SARS患者治疗前后临床症状改善积分情况，对照组头痛、乏力改善积分为1.40±0.51及1.31±0.49与治疗组1.00±0.00及1.07±0.26比较差异有显著性意义，P<0.001及0.05。其他全身疼痛、咳嗽、胸痛，呼吸困难，腹泻组间差异均无显著性，P＞0.05，见表4。

表4   两组间治疗前后症状改善积分情况  (x±s)

注：同表3

    2.2.3  治疗前后相关生化检查情况  由表5所示：治疗前后血WBC、LC、Pt的改善在组内差异均有显著性，P<0.05～0.001，组间差异均无显著性，P均＞0.05。由表6所见，两组内治疗前后BUN、Cr、ALT、AST变化差异均无显著性，P均＞0.05。

表5    治疗前后血象变化  (x±s)

注：同表3

表6  治疗前后BUN、Cr、ALT、AST变化  (x±s)

注：同表3
   
    2.2.4  两组间治疗前后体温、SaO2及胸部X线阴影改善情况  由表7可见两组组内治疗前后体温改善有显著性，P均<0.001，但组间差异无显著性。治疗组较对照组发热天数缩短1.5天，组间差异有显著性，P<0.05，且体温改善疗效积分优于对照组，P<0.001。由表8所见，治疗组SaO2改善差异有显著性，P<0.05对照组内差异无显著性，P＞0.05。两组间治疗前后肺部X线阴影改善积分，治疗组0.90±1.04优于对照组0.05±1.60，差异有显著性，P<0.05。

表7  两组间治疗前后体温改善情况  (x±s)

注：同表3

表8  两组间治疗前后SaO2及胸部X线阴影改善情况  (x±s)

注：同表3

    3  讨论
   
    对本组SARS病人研究结果显著：（1）在西药治疗的基础上加服蒙药额日赫木-8对缩短发热周期，改善机体缺氧，促进肺部阴影吸收有一定的效果。（2）蒙药额日赫木-8对Cy所致免疫反应抑制有较强的拮抗作用及对正常小鼠免疫反应有增强作用。其机理有待进一步扩大验证。
    
    蒙药额日赫木-8是在蒙成药中有一定代表性的传统有效古方之一。组方严谨而特殊，有确定的疗效，享有很高的盛誉，能反映出蒙医学方药独特理论的性。有必要探索其独特作用的物质基础和作用机理，搞清方剂组合应用的奥秘成分分析、药理作用及改进剂型。在遵循蒙医药理论指导下密切配合临床，既保证原方、原剂型的固有特点，又能提高临床疗效。我们认为工艺先进的新剂型，可作为发热性疾病的绿色卫士。

【】

    1  中医、中西医结合治疗SARS国际研讨会汇编.北京：2003，8.    
    2  国家中医药管理局组织专家制定.SARS型肺炎中医药防治技术方案（试行）.北京：2003，4.    
    3  World Health Organization.Severe acute respiratory syndrome(SARS).［Cited 12 March， 2003.］Available from URL；http：//www. who.int/csr/2003-03-12/en.    
    4  Guangdong Department of Public Health. Report on pneumonia of unknown reason in Zhong Shan City. In Office Document of Guangdong Department of Public Health(YWB-2003-2).    
    5  World Health Organization. Summary probable SARS cases with onset of illness from 1 November 2002 to 31 July 2003(revised 26 September 2003).［Cited 30 September，2003］. Available from URL：http：//www.who，in/csr.sars.country.table 2003-09-23/en/    
    6  Zhong NS，Zheng BJ，Li YM，et al.Epidemiological and aetiological studies of patients with severe acute respiratory syndrome(SARS) from Guangdong in February.Lancet，2003，362：1353.    
    7  World Health Organization. SARS and air travel.［Cited 5 August 2003.］Available from URL：http：//www.who，int/csr/sars/travel/airtravel/en/.    
    8  Hui DS，Wong PC，Wang C.SARS：clinical features and diagnosis.APSR， 2003，8(suppl.)： s20.    
    9  海霞.广东省中治疗非典型肺炎临床经验.中医药报，2003，5：19.    
    10  张允岭，张晓梅，金耀文，等.非典1，2，3号系列方药治疗SARS的临床观察.中国中医药报，2003，5：21.    
    11  邹金盘，花宝金，陈长怀，等.42例SARS患者临床特征与中西医结合.中国中西医结合杂志，2003，23（7）：486-488.    
    12  中华人民共和国卫生部.传染性非典型肺炎临床诊断标准.北京：2003-05-03.